布拉德福德测定法

布拉德福德测定法
布拉德福德测定法是一种常用的蛋白质含量测定方法，其基本原理是利用蛋白质中存在的酪氨酸与硫代硫酸钠发生氧化反应，生成酪氨酸硫酸盐的数量与蛋白质含量成正比。

下面为大家介绍一下布拉德福德测定法的相关参考内容。

测定原理
布拉德福德测定法是一种比色法，在此之前，分析者要首先将样品进行前处理，使其能够与试剂反应。

一般来说，前处理方法包括二甲基亚砜（DMSO）处理、直接加入试剂溶液和醇萃取等。

在前处理完成后，将样品与布拉德福德试剂（也称为“G-250试剂”）混合后，等待反应达到平衡，然后使用分光光
度计测定样品的吸光度值，最后与标准曲线对照计算蛋白质含量。

试剂制备
布拉德福德试剂是由考马斯酸（Coomassie Brilliant Blue G-250）、甲醛和磷酸盐缓冲液组成的。

制备方法如下：
将0.1 g的考马斯酸溶于50 ml的95%乙醇中，并用玻璃棒搅
拌至完全溶解；
加入1 ml的甲醛并充分混合；
加入100 ml的0.1 mol/L磷酸盐缓冲液（PH 7.0），并充分混
合；
用5%的乙醇调节至200 ml，并用纯水调节至1000 ml。

标准曲线制备
标准曲线是布拉德福德测定法中必不可少的一部分，它能够帮助分析者根据反应的吸光度值推算出样品中蛋白质的确切含量。

制备方法如下：
制定标准物质，如用碳酸钠进行稀释后的卵清蛋白（BSA）等；
按照浓度从高到低顺序将不同浓度的标准物质与布拉德福德试剂按照1:4的体积比混合，使其反应，等待反应达到平衡，最
后使用分光光度计测定吸光度值；
制作标准曲线，将不同浓度的标准物质的吸光度值与浓度对照，可以得到一条线性趋势的曲线。

以这条曲线为基础，即可通过计算样品的吸光度值推算出其中蛋白质的含量。

测定注意事项
在进行布拉德福德测定法测定时，需要注意以下几个方面：
在样品前处理过程中要避免使用含有蛋白质的物质，以免干扰后续的测定结果；
样品与试剂的比例要控制好，过低会导致样品中蛋白质的多少
无法确定，过高则会测定结果的范围过窄；
在进行试剂的混合时要慢慢地滴加，以免溶液产生泡沫导致吸光度值不稳定。

总结
布拉德福德测定法是一种简单易行、可靠度高的蛋白质含量测定方法。

通过制备标准曲线，分析者可以根据样品的吸光度值推算出其中蛋白质的含量，从而得到分析结果。

在进行测定时，需要注意前处理、试剂比例和测定过程的各项技巧，才能获得准确的测定结果。