高效液相色谱法测定鸡肉中的二氯二甲吡啶酚

高效液相色谱法测定鸡肉中的二氯二甲吡啶酚
程盛华;查玉兵;丁丽;杨春亮
【摘要】目的:建立反相高效液相色谱法测定鸡肉中二氯二甲吡啶酚含量的方法.方法:采用Symmetry C18色谱柱(250mm×4.6,5μm);流动相为甲醇-水(20:80),流速1.0mL/min,检测波长266nm,柱温35℃.结果:在0.05～5.00 mg/L的范围内呈良好的线性关系(r=0.999 7),RSD＜5.0%(n=5),检出限为5ug/kg,回收率92.3%～102.1%.结论:此方法快速、简单、准确,实际样品分析结果令人满意,适合于鸡肉中二氯二甲吡啶酚的检测.
【期刊名称】《分析仪器》
【年(卷),期】2008(000)001
【总页数】3页(P39-41)
【关键词】高效液相色谱法;二氯二甲吡啶酚;鸡肉
【作者】程盛华;查玉兵;丁丽;杨春亮
【作者单位】中国热带农业科学院农产品加工研究所,湛江,524001;中国热带农业科学院农产品加工研究所,湛江,524001;中国热带农业科学院农产品加工研究所,湛江,524001;中国热带农业科学院农产品加工研究所,湛江,524001
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
1 前言
二氯二甲吡啶酚俗称克球酚(clopidol)，是一种杀虫效果较高的抗球虫兽药，在畜禽饲养业中应用广泛。

但由于停药期控制不严,常导致药物在禽肉组织中有残留。

目前禽肉中克球酚残留量的测定方法主要有气相色谱法、液相色谱法、酶联免疫法等。

气相色谱法测定克球酚,样品需衍生化后再测定，操作步骤复杂、繁琐，此外因样品中杂质较多，容易产生干扰，造成结果的假阳性，而且定量不准。

酶联免疫法目前尚不成熟，且不能准确定量[1]。

我国曾颁布进出口商品检验行业标准，但该方法操作繁琐，回收率不高，重复性也不好。

本文建立了鸡肉中克球酚残留量的液相色谱法测定法，此方法快速、简单、准确，适合批量检测。

2 实验部分
2.1 仪器与试剂
Waters2695液相色谱仪，配2996二极管阵列检测器；Empower化学工作站；CXJ-IIB型低速大容量多管离心机；RE-52AA旋转蒸发器；SHB-III型循环水真空泵；MS1旋涡混合器；E120H超声波清洗器；万分之一电子天平。

甲醇，色谱纯。

无水硫酸钠，650℃灼烧4h，贮于密封瓶中。

二氯二甲吡啶酚标准品，购自Sigma公司。

二氯二甲吡啶酚标准溶液储备液：精密称取二氯二甲吡啶酚标准品5mg，置于25mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，混匀，即得浓度为200μg/mL的二氯二甲吡啶酚标准储备液，-20℃冰箱保存。

标准中间液：精密吸取二氯二甲吡啶酚储备液0.25mL，置于25mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为2μg/mL的标准中间溶液。

标准工作液：精密取0mL、0.625mL、1.25mL、2.5mL、6.25mL标准中间液，分别用甲醇稀释定容至25mL，即得系列标准工作液，浓度分别为0.00μg/mL、0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.50μg/mL。

工作液应临用时配制。

2.2 色谱条件
色谱柱： Symmetry C18 反相液相色谱柱(250mm×4.6mm，粒径5μm)；流动相：甲醇︰水(20︰80)，流速1.0mL/min；检测波长： 266 nm；进样量：
20μL；柱温：35℃。

保留时间10min。

2.3 样品制备
称取经捣碎匀浆的鸡肉样品5.00 g(精确到0.001 g)置于50 mL具塞离心管中,加入5 g无水硫酸钠，再加入25 mL乙腈,旋涡混匀1 min后,超声波振荡25 min，再以4500 r/min离心10 min。

将上清液倒入125mL的分液漏斗中,再用25 mL 乙腈提取滤渣1次,合并滤液，加25mL乙腈饱和的正己烷到分液漏斗中，振摇，静置20min，将下层液体经无水硫酸钠过滤到蒸发瓶中，在55℃水浴中，在旋转蒸发仪上浓缩近干，加2mL甲醇定容,经0.22μm微孔滤膜过滤后,进样20μL进行测定。

2.4 测定方法
取等量试样溶液和标准溶液,做单点和多点校准,依据保留时间(结合最大吸收波长、峰纯度、峰的匹配程度)定性，以色谱峰面积积分值定量。

标准溶液及试样溶液中二氯二甲吡啶酚残留的响应值在仪器检测的线性范围内。

二氯二甲吡啶酚标准色谱图见图1。

图 1 二氯二甲吡啶酚标准色谱图
空白试验，除不加样品外,采取完全相同的测定步骤进行平行操作。

3 结果与讨论
3.1 样品处理效果
鸡肉样品在乙腈中容易结快，加入无水硫酸钠能使样品在乙腈中分散均匀，而且离心后上清液更清澈。

通过实验发现，5g左右样品用50mL乙腈分2次提取,提取效率可达90%以上,完全符合分析要求。

本文用乙腈饱和正己烷去除杂质，结果显示
除杂效果很好，而且回收率在90%以上。

阳性样品用本法与SN/T 0212.1-93方法检测，结果相差不大，测定值分别为20.63μg/kg和16.87μg/kg。

色谱图见图2。

但本法具有操作简单，节约成本的优点。

图 2 鸡肉阳性样品色谱图
3.2 检测波长
通过190～800nm全波长光谱扫描，发现二氯二甲吡啶酚在波长216nm和
266nm处均有较大吸收，但在波长216nm处基线噪音较大，杂质峰较多。

因此本实验采用266nm波长进行检测，以保证测定的灵敏度和准确度。

3.3 工作曲线
配制系列浓度0.00μg/mL，0.05μg/mL，0.25μg/mL，0.20μg/mL，0.50μg/mL 的混合标准工作液，在规定的色谱条件下,进样20μL进行HPLC测定,所得的峰面积值与对应的标准溶液浓度作直线回归，求得标准曲线方程，Y=1006X-121,相关系数r=0.9997。

3.4 检测限
称样量5g，以最大噪音的3倍计算检测限，求得鸡肉中二氯二甲吡啶酚检测限为5μg/kg。

3.5 回收率与精密度
以空白鸡肉样品进行添加回收实验，添加水平分别为10μg/kg和20μg/kg，平均回收率为92.8%和100.8%，相对偏差均小于5%(n=5)，见表1。

实验结果符合欧盟对残留分析的要求。

表 1 试样的加标回收率及变异系数(n=5)添加浓度(μg/kg)实测峰面积实测量(μg/kg)回收率(%)RSD(%)1011869．289．282．320236720．16100．81．2 4 结论
本实验建立的HPLC测定鸡肉中二氯二甲吡啶酚残留量的方法，采用266nm检测
波长，平均回收率可达到90%以上,检测限达5μg/kg,与其它方法相比，具有操作
简便、精密度高、检测限低、回收率高、重现性较好等优点。

用此方法对市场上的10个鸡肉样品进行检测，全部未检出二氯二甲吡啶酚残留量；对10个鸡肝样品
进行检测，有一个呈阳性，含量为20.6±2.3 μg/kg，已经超过国家标准的允许值。

参考文献
1 SN/T 0212.1-1993. 出口禽肉中二氯二甲吡啶酚残留量检验方法
2 刘红河，康莉，陈春晓，仲岳桐，陈裕华. 中国公共卫生，2005，21(3): 354～355。