紫外光谱分析法测定饮料中咖啡因的含量

紫外光谱分析测定饮料中咖啡因的含量
一实验目的
1 熟悉分光光度计的操作
2 掌握分光光度计的使用方法
二实验原理
咖啡因又名生物碱，属甲基黄嘌呤化合物，化学名称为1,3,7—三甲基黄嘌呤。

紫外分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。

三实验仪器和试剂
1 仪器
紫外分光光度计
2 试剂
本实验所用试剂均为分析纯试剂，实验用水为蒸馏水。

(1) 无水硫酸钠
(2) 三氯甲烷使用前重新蒸馏
(3)1.5(m/v)高锰酸钾溶液：称取1.5g高锰酸钾，用水溶解并稀释至100mL。

(4) 亚硫酸钠和硫氰酸钾混合溶液：称取1Og无水亚硫酸钠，用水溶
解并稀释至1OOmL，另取10g硫氰酸钾，用水溶解并稀释至1OOmL，然后一者均匀混合。

(5) 15%(v／v)磷酸溶液：吸取15mL磷酸置于1OOmL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。

(6) 20%(m／V)氢氧化钠溶液：称取20g氧氧化钠，用水溶解，冷却后稀释至100mL。

(7) 20%(m/V)醋酸锌溶液：称取20g醋酸锌[Zn (C~COO)：．2H20]加入3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL。

(8) 10%(m／V)亚铁氰化钾溶液：称取10g亚铁氰化钾。

[K4Fe (CN)6·3H2O]用水溶解并稀释至100mL。

(9）咖啡因标准品：含量98 0%以上。

(10) 咖啡因标准储备液：根据咖啡因标准品的含量用重蒸三氯甲烷配制成每mL相当于0.5mg咖啡液，置于冰箱中保存。

四实验内容
1 样品的处理
在250mL的分液漏斗中，准确移入l0.0mL经超声脱气后的均匀可乐型饮料试样，加入1.5%高锰酸钾溶液5mL，摇匀，静置于5min，加入混合溶液10mL，摇匀，加入30mL重蒸三氯甲烷。

振摇100镒，静止分层，收集三氯甲烷。

水层再加入10mL重蒸三氯甲烷，振摇100次，静置分层。

合并二次三氯甲烷萃取液，并用重蒸三氯甲烷定容至100mL，摇匀，备用。

2标准曲线的绘制
从0 5mg/mL的咖啡因标准储备tfit中，用重蒸三氯甲烷配制成浓度分别为2.00，4.00，6.00，8.00，10.0，12.00，14.00ug/mL的标准系列，以0ug/mL作对比管，调节零点，用1cm 比色杯于276.5nm下测量吸光度A，得出吸光度-咖啡因浓度的标准曲线。

3 样品的测定
在25mL 巨塞试管中，加入5g 无水硫酸钠，倒入20mL 样品的三氯甲烷制备液，摇匀，静置。

将澄清的三氯甲烷用1cm 比色杯于276.5nm 处测其吸光度，根据标准曲线求出样品的吸光度相当于咖啡因的浓度。

测定时用重蒸三氯甲烷作试剂空白。

五 结果处理
计算
样品中咖啡因含量（mg/L ）=10001000V
100
c -c 0⨯⨯）（
c ：样品吸光度相当于咖啡因浓度（ug/L ） c 0 ：试剂空白吸光度相当于咖啡因浓度（ug/L ）,本实验c 0=0ug/L
V : 样品的体积（mL ）
六 讨论
观察咖啡因的标准曲线可知，随咖啡因含量的增加，其在最大吸收波长处的
吸光度值也随之增加，呈现良好的线性关系。