HPLC法测定复方抗溃混悬液中盐酸小檗碱的含量

HPLC法测定复方抗溃混悬液中盐酸小檗碱的含量
崔田;邓祖磊
【摘要】目的:建立测定复方抗溃混悬液中盐酸小檗碱含量的方法;方法:用高效液相色谱法测定含量,采用ZORBAX Eclipse XDB -C18色谱柱,流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液(50:50)(每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g),检测波长345砌,流速1.0 mL/min.结果:盐酸小檗碱的线性范围为6.175 ～61.75μg/mL(r=0.9998),平均回收率为99.3％,RSD为0.69％(n=6),复方抗溃混悬液中小檗碱含量为1.02～1.05 mg/g.结论:试验表明该方法可用于复方抗溃混悬液的质量控制,该方法专属性强、操作简便.
【期刊名称】《安徽科技学院学报》
【年(卷),期】2016(030)004
【总页数】4页(P46-49)
【关键词】复方抗溃混悬液;盐酸小檗碱;高效液相色谱法
【作者】崔田;邓祖磊
【作者单位】蚌埠市食品药品检验中心,安徽蚌埠233000;蚌埠市食品药品检验中心,安徽蚌埠233000
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1;R286.0
复方抗溃混悬液为蚌埠市第一人民医院皮肤科研制的院内制剂，由黄芪、黄连、黄柏、白芷、地榆、水杨酸、冰片、黄芩、樟脑、氧化锌、苯酚药味组成，具有抗炎
镇痛、排毒生肌、促进溃疡面愈合等作用[1-2]。

方中主药为黄连、黄柏，其中盐
酸小檗碱是其主要活性成分[2]。

当前，盐酸小檗碱测定方法有高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)[3-4]、高效液相荧光色谱法[5]、荧光分光光度法[6]、直接电位法[7]等多种方法。

高效液相色谱法具有分离效能高，灵敏度高，应用范围广，分析速度快、载液流速快，色谱柱可反复使用，样品不被破坏、易回收等优点，已成为当前药物分析的重要方法之一[8]。

采用HPLC法测定复方抗溃混悬液中盐酸小檗碱含量尚未见报道，本文建立HPLC法测定复方抗溃混悬液盐酸小檗碱含量，为其质量控制和确保临床疗效提供检测手段。

1.1 仪器与设备
Agilent 1260高效液相色谱仪(美国，Agilent公司)，二级管阵列检测器，Agilent Chemstation工作站；ZORBAX Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱(美国，Agilent公司)；Sartorius CP225D电子天平(德国Sartorius 公司，十万分之一天平)；Sartorius BS210S电子天平(德国Sartorius公司，万分之一天平)；KQ-500DE超声波仪(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 材料与试药
盐酸小檗碱(购自中国食品药品检定研究院，批号110713-200609)；甲醇(美国天地试剂有限公司，色谱纯)；十二烷基磺酸钠、磷酸(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)；实验用重蒸水(实验室自制)；其他试剂均为分析纯；复方抗溃混悬液(蚌
埠市第一人民医院提供，批号分别为140302、140303、140304)。

1.3 方法
1.3.1 色谱条件色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm， 5
μm)，流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(50 ∶50)(每100mL加十二烷基磺酸钠0.1 g)，检测波长为345 nm，流速为l mL/min，柱温为30 ℃，进样体积为5 μL。

1.3.2 检测样品溶液的制备供试品溶液的制备：取本品约
2.5 g，精密称定，置
具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.3.3 对照品溶液的配制精密称取盐酸小檗碱1
2.35 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。

精密量取2 mL至20 mL
量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.0247 mg/mL对照品溶液。

1.3.4 阴性对照溶液的制备按处方比例，取除黄连、黄柏以外的药材，按制备
工艺要求制备阴性样品，再按供试品溶液制备方法制备成阴性对照溶液。

1.3.5 方法学考察与样品测定按1.3.2项下方法制备供试品溶液，采用1.3.1项下的色谱条件，分别对线性关系、精密度试验、重复性试验、稳定性试验、专属性试验、加样回收试验进行考察，然后分别取3批复方抗溃混悬液样品，测定峰面积，按外标法计算含量。

2.1 线性关系的考察
分别精密吸取对照品储备液0.5、1、2、3、5 mL，分别置20 mL量瓶中，加甲
醇至刻度，摇匀。

分别进样5 μL，按上述色谱条件进行测定，记录色谱峰面积，
以浓度(X)对峰面积(Y)进行线性回归，得回归方程为Y=19.9785X-7.2891，
r=0.9998，结果表明盐酸小檗碱在6.175～61.75μg/mL范围内线性关系良好。

2.2 专属性试验
取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液按上述色谱条件测定，结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照色谱图中，在此保留时间无干扰峰，见图1。

2.3 精密度试验
取对照品溶液连续进样5次，每次5 μL，记录盐酸小檗碱峰面积，RSD为
0.40 %，表明精密度良好。

2.4 重复性试验
精密称取同一批号供试品(140302)6份，按供试品溶液的制备方法制备并测定峰面积，代入线性方程计算，平均含量为1.03 mg/g (n=6)，RSD=0.56%；表明该方法重复性良好。

2.5 稳定性试验
取供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h，按色谱条件测定。

结果表明12 h 之内测定供试品稳定，盐酸小檗碱峰面积RSD为0.72%(n=6)。

2.6 加样回收试验
精密称取已知含量的同一批供试品(批号140302，含量为1.03 mg/g)6份，精密加入对照品溶液储备液5.0 mL，按供试品测定方法测定含量，计算回收率，结果见表1。

2.7 供试品测定
取三批样品按1.3.2项下样品溶液的方法制备供试品溶液，按1.3.1色谱条件进行分析测试，测定峰面积，按外标法计算含量，结果见表2。

结合DAD光谱，选择345nm作为盐酸小檗碱的测定波长，在345nm测定时分离度较好，基线稳定，响应值适中，因此选择345nm为测定波长参考文献[9-11]报道。

本文采用的流动相是乙腈-0.1%磷酸溶液(50 ∶50)(每100mL加十二烷基磺酸钠0.1g)，曾比较多种流动相比例[9～12]，以离子对溶液作为流动相，可以使盐酸小檗碱峰达到较好分离，峰型也较好，理论塔板数高 (n=8560)，因此选其作为流动相。

超声波作为一种新技术在提取中草药有效成分方面，应用已日趋广泛。

超声波提取效率高，操作简便。

同时对超声提取时间做了比较，分别超声10min、15min、20min、30min和45min处理，结果表明随超声时间延长，含量也相应增加，但
30min后含量并无变化，故选择超声提取30min。

由于医院制剂质量标准一般都较简单，提高完善标准对于保证药品质量，维护患者用药安全都有重要意义。

本实验方法中盐酸小檗碱的线性范围为6.175～61.75
μg/mL(r=0.9998)，平均回收率为99.3%，RSD为0.69 %(n=6)复方抗溃混液中盐酸小檗碱含量为1.02～1.05mg/g。

本文建立的含量测定方法，经方法学验证该方法灵敏度高，重复性好，准确，为有效控制复合抗溃混悬液质量提供了科学依据。

【相关文献】
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