植物体内硝态氮含量的测定

实验二植物体内硝态氮含量的测定
实验目的：
掌握比色法测定硝态氮含量。

实验原理：
在浓酸条件下，NO3－与水杨酸反应，生成硝基水杨酸。

生成的硝基水杨酸在碱性条件下（pH>12）呈黄色，最大吸收峰的波长为410nm，在一定范围内，其颜色的深浅与含量呈正比，可直接比色测定。

实验仪器：
可见分光光度计、天平（感量0.1 mg）、20 mL刻度试管、50 ml容量瓶、小漏斗、玻棒、洗耳球、水浴锅、封口膜、滤纸、移液管。

植物材料：菠菜
试剂：500 mg/L 硝态氮标准溶液；5% 水杨酸－硫酸溶液；8% 氢氧化钠溶液。

实验注意事项：
1.一定不要将5%水杨酸－硫酸溶液溅到桌面、试管外或衣物及皮肤上。

2.加热煮沸时要小心，以免烫伤。

实验内容：
1.标准溶液配制
吸取500 mg/L 硝态氮的标准溶液2、4、6、8、10 ml分别放入50 ml 容量瓶中，用去离子水定容至刻度，使之成20、40、60、80、100 mg/L的系列标准溶液。

2.样品中NO3－的提取
取一定量的植物材料，剪碎混匀，用天平精确称取材料2 g ，放入试管中，加入10 ml 去离子水，用塑料封口，置于沸水浴中提取30 min。

到时间后取出，用自来水冷却，将提取液过滤到25 ml容量瓶中，并反复冲洗残渣，最后定容至刻度。

3.反应
吸取上述系列标准溶液和样品提取液各0.1 ml，分别放入烘干的试管中，以0.1 ml 蒸馏水代替标准溶液作空白。

再分别放入0.4 ml 5%水杨酸－硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20 min后，再加入8% NaOH溶液9.5 ml，摇匀冷却至室温。

则显色液总体积为10 ml。

4.绘制标准曲线
以空白作参比，在410 nm波长下测定吸光度。

以硝态氮浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线并计算出回归方程。

5.样品中NO3—含量的计算
在标准曲线上查得或用回归方程计算出硝态氮的浓度，再用以下公式计算其含量。

NO3－－N含量= (C×V/1000 )/W
式中C—标准曲线上查得或回归方程计算得NO3－－N浓度；
V—提取样品液总量；W—样品鲜重。