重组人胱抑素C在大肠杆菌中的表达及纯化

重组人胱抑素C在大肠杆菌中的表达及纯化
张骥;张巍;赵卫国
【期刊名称】《国际检验医学杂志》
【年(卷),期】2007(028)005
【摘要】目的研究构建人胱抑素C(Cys C)的重组表达质粒及其在大肠杆菌中的表达和纯化.方法采用反转录-聚合酶链反应从人肝组织中获取Cys C cDNA,并将其插入到pET-28a(+)质粒中,重组质粒pET-28a-Cys C转化入大肠杆菌E.coli
BL21(DE3)pLysS,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达可溶性Cys C.重组Cys C采用Ni2+-NTA系统进行层析纯化.结果核酸序列测定与预期一致,Cys C表达水平达到146 mg/L,约占菌体总可溶性蛋白的13.5%,表达产物用SDS-PAGE鉴定,其相对分子质量为13.3×103,经纯化后蛋白纯度达90%.结论成功构建Cys C 原核表达系统和蛋白纯化,为制备抗体以及研制Cys C免疫纳米微球测定试剂奠定了基础.
【总页数】2页(P393-394)
【作者】张骥;张巍;赵卫国
【作者单位】200060,上海市普陀区人民医院检验科;200023,上海市科委医学检验重点实验室;200023,上海市科委医学检验重点实验室
【正文语种】中文
【中图分类】Q78;R392.11
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