stbl3感受态细胞制备方法

stbl3感受态细胞制备方法
一、准备工作。

1.1 材料准备。

咱得先把要用的东西都找齐喽。

首先是stbl3菌株，这就像是咱做菜的主食材，可不能少。

然后呢，还有LB培养基，这就好比是给菌株提供营养的美味大餐。

再就是一些化学试剂，像氯化钙（CaCl₂），这可是制备感受态细胞的关键“小助手”呢。

另外，还得有离心机、冰盒这些小工具，缺了它们可不行，这就如同打仗少了兵器一样。

1.2 菌株活化。

把stbl3菌株从冰箱里小心翼翼地拿出来，就像捧着个宝贝似的。

在超净工作台里，用接种环挑取少量的菌株，轻轻地接种到LB培养基里。

这一步得特别小心，就像走钢丝一样，稍微不注意就可能让菌株受到污染。

然后把接种好的培养基放到合适的温度下，一般是37°C，让菌株欢快地生长起来，就像小种子在土里发芽一样。

二、感受态细胞制备过程。

2.1 菌液培养。

看着接种好的菌液在摇床里晃悠，就像看着自己的孩子在摇篮里睡觉一样。

等到菌液变得浑浊了，这时候菌株就繁殖得差不多了。

一般来说，OD₆₀₀的值达到0.4 0.6就比较合适了。

这就像是到了收获的季节，咱们得赶紧进行下一步。

2.2 菌液收集。

把菌液小心地倒入离心管里，然后放到离心机里。

这时候离心机就像一个大力士，快速地把菌液中的菌体都收集到管底。

离心的速度和时间可得掌握好，就像厨师掌握火候一样，一般是4000 5000转每分钟，离心5 10分钟。

离心完了之后，把上清液倒掉，这时候就看到管底那一小坨菌体了，就像挖到了宝藏一样。

2.3 感受态制备。

接下来就是关键的一步了。

用预冷的氯化钙溶液重悬菌体，这氯化钙溶液得是冰冷冰冷的，就像冬天的冰块一样。

重悬的时候动作要轻柔，可不能把菌体弄伤了。

然后把重悬好的菌液放到冰上静置一段时间，这就像让菌体在冰上冷静冷静，一般静置30分钟左右。

静置完了之后，再离心一次，把上清液倒掉，然后再用少量的预冷氯化钙溶液重悬菌体，这时候感受态细胞就初步制备好啦。

三、感受态细胞的保存。

3.1 分装保存。

把制备好的感受态细胞分装到小离心管里，就像把宝贝分成小份保存一样。

每管的量可以根据自己的需求来定，一般50 100 μL就比较合适。

分装完了之后，赶紧放到 -80°C的冰箱里冻起来，这就像把食物放进冰窖里保鲜一样。

3.2 质量检测。

为了确保感受态细胞的质量，咱还得做个小检测。

可以用一些已知的质粒转化到感受态细胞里，看看转化效率高不高。

如果转化效率还不错，那就说明咱们制备的感受态细胞是成功的，就像考试得了个好成绩一样，心里美滋滋的。

要是转化效率不高，那还得回过头去看看是哪个步骤出了问题，可不能稀里糊涂的。