早中期强直性脊柱炎患者两种检测HLA-B27方法比较

早中期强直性脊柱炎患者两种检测HLA-B27方法比较
刘波;邱萌
【摘要】Objective: To compare the accuracy, sensitivity and specificity in detection of HLA-B27 between the enzyme-linked immunoassay and flow cytometry, to investigate the value in the diagnosis of ankylosing spondylitis. Methods: Using the enzyme-linked immunoassay and flow cytometry, the same blood samples of suspected early and mid-AS patients were detected, and then calculated the sensitivity, specificity and positive and negative predictive value according to the results of two methods. Results: The sensitivity, specificity, positive and negative predictive value of the enzyme-linked immunoassay and flow cytometry was 0.960, 0.972, 0.967, 0.972; 0.980, 0.986, 0.980, 0.986, respectively, and accordance rate of the results of the two methods was 98.0％. Conclusion: In contrast with flow cytometry, sensitivity and specificity of the enzyme-linked immunoassay is relatively high, thus the enzyme-linked immunoassay is a time-saving, convenient and accurate method for detection of HLA-B27. In basic level hospitals, it is a practical and reliable method for AS patients with early diagnosis and differential diagnosis, and has bright prospects for clinical application.%目的:比较磁性酶联免疫分析法和流式细胞仪检测HLA-B27的准确性、敏感性和特异性,以探讨其在强直性脊柱炎辅助诊断中的价值.方法:以磁性酶联免疫分析和流式细胞仪同时对早中期疑似患者血标本进行检测,根据结果计算出两种检测方法的敏感性、特异性和阳性、阴性预测值.结果:磁性酶联免疫分析和流式细胞术两种检测方法的敏感性、特异性和阳性、
阴性预测值分别为0.960、0.972、0.967、0.972;0.980、0.986、0.980、0.986,
两种方法结果符合率为98.0%.结论:与流式细胞仪相比,磁性酶联免疫分析法的敏感性和特异性也比较高,是一种省时、方便、准确检测HLA-B27的方法.对基层医院
来说,是适合AS患者早期诊断和鉴别诊断的一种实用而可靠的检测方法,具有良好
的临床应用前景.
【期刊名称】《中国医药导报》
【年(卷),期】2011(008)013
【总页数】2页(P47-48)
【关键词】强直性脊柱炎;HLA-B27;磁性酶联免疫;流式细胞仪
【作者】刘波;邱萌
【作者单位】湖北省孝感市中心医院检验科,湖北孝感,432000;湖北省孝感市中心
医院检验科,湖北孝感,432000
【正文语种】中文
【中图分类】R593.23
强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是一种以脊柱病变为主的慢性免疫性疾病，病变主要累及骶髂关节和周围关节，引起脊柱强直和纤维化，最终导致关节功能障碍，关节畸形，该病的病因至今尚未完全明确。

目前我国大约有400万
患者[1]。

多数学者认为，本病是在遗传因素的基础上，受到外伤、感染、劳累等
因素的刺激而引发自身免疫性炎症反应。

国内外有许多实验研究证明人类白细胞抗原B27（human leukocyte antigen B27，HLA-B27）表达阳性与AS高度相关，
＞90%的AS患者HLA-B27抗原阳性而正常人群只有8%表达，是对疑似患者进行HLA-B27检测成为临床诊断与鉴别诊断AS的重要辅助手段[2-5]。

2007年9 月～2011年2月笔者对来我院就诊的早中期疑似AS患者进行了HLA-B27的检测，采用磁性酶联免疫分析试剂盒和流式细胞仪两种检测方法分别进行检测，并对这两种检测方法的敏感性、特异性和适用性进行比较和分析，为临床实验室选择合适的HLA-B27检测方法提供参考依据。

1 资料与方法
1.1 一般资料
361例早中期AS疑似患者均来源于2007年9月～2011年2月我院门诊和住院患者，其中，男260例，女101例，男女比例约为2.6∶1；年龄6～75岁。

所有患者检测前均未接受柳氮磺胺嘧啶、甲氨蝶呤和益赛普等药物的治疗。

1.2 诊断标准
参照1984年修订的纽约标准[6]。

临床标准：①下腰背痛至少持续3个月，疼痛随活动改善，但休息不减轻；②腰椎在前后和侧屈方向活动受限；③胸廓扩展范围小于同年龄和性别的正常值。

放射学标准：双侧骶髂关节炎Ⅱ～Ⅳ 级，或单侧骶髂关节炎Ⅲ～Ⅳ级。

如果患者符合放射学标准并分别附加①～③条中的任何1条临床标准可确诊为AS。

排除标准：①晚期强直性脊柱炎患者（X线显示关节出现骨性融合）；②恶性肿瘤患者；③妊娠期或哺乳期女性患者；④精神病患者。

最后确诊AS患者151例，排除AS患者210例。

1.3 标本准备
患者晨起空腹抽取静脉血4 ml分装在两支美国BD公司专用EDTA抗凝管中，每管约 2 ml，编号并注明性别、年龄。

24 h内分别用于磁珠酶联免疫分析和流式细胞仪检测。

1.4 试剂与方法
1.4.1 磁珠酶联免疫分析法采用美国Goldsign公司的HLAB27抗原磁酶免试剂盒，严格按试剂盒说明书进行操作，以国产KHB st-360酶免疫检测仪，在主波长450 nm、副波长630 nm下读取其吸光度值（OD），OD＜0.7判定为结果阴性，
OD≥0.7判定为结果阳性。

1.4.2 流式细胞仪检测采用美国BD公司的FACSCalibur流式细胞仪，HLA-B27
试剂盒采用BD公司专用试剂盒，严格按试剂盒说明书进行操作，并采用其专用软件进行样品分析和结果计算，结果与定界值（decision maker）进行比较，大于
或等于定界值判断为阳性，否则为阴性。

1.5 数据分析方法
敏感性=真阳性/（真阳性+假阴性），特异性=真阴性/（真阴性+假阴性），阳性预测价值=真阳性/（真阳性+假阳性），阴性预测值=真阴性/（真阴性+假阴性）。

1.6 统计学处理
所有数据按要求输入SPSS 11.5统计软件表格进行计算、绘图和数据统计，采用
χ2检验。

以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果
以临床确诊AS病例为标准，两种检测方法的结果见表1。

流式细胞术检测148例阳性患者中有2例磁性酶联免疫法检测为阴性，其余检测结果相同，两法结果符
合率为98.0%，两种检测方法比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

见表2。

表1 两种检测方法的检测结果（例）检测方法磁珠酶联免疫+-流式细胞仪+-临床确诊AS阳性AS阴性145 5 6 3 205 148 3 207
表2 两种检测方法比较（%）磁性酶联免疫流式细胞仪检测方法敏感性0.960
0.980特异性0.972 0.986阳性预测价值0.967 0.980阴性预测价值0.972 0.986 3 讨论
临床研究显示，AS主要侵害青壮年，对青壮年（特别是男性）劳动力身体健康的
危害很大。

由于最初起病隐匿，病程进展缓慢，早期症状与腰椎间盘突出症、骶髂关节炎、腰背肌筋膜炎等相似，初发者在X线片上没有骶髂关节炎的明确表现，
因此在临床诊断中容易误诊和漏诊，延误患者的早期治疗，导致患者出现中、晚期不可逆症状，最终发生关节强直甚至致残。

同时，赖建铭等[7]通过对AS家系调
查发现，HLAB27阳性的幼年强直性脊柱炎患者中69%有脊柱关节病家族史，其
中90%为一级亲属，说明AS有明显的家族聚集性。

AS早期诊断的研究方向，应该是尽可能在肯定的放射学骶髂关节炎出现之前进行诊断[8]。

因此，HLA-B27实验室筛查对AS患者的早期诊断和控制住病情的进展、减轻畸形、维持和改善功能，具有相当重要的意义。

实验研究已证实流式细胞术是临床检测HLA-B27抗原表达的理想方法[9-11]。

但由于流式细胞仪和其耗材价格昂贵，人员需要专门培训后才能上岗，因而只适合在大型医院使用，不适合在基层医院推广应用。

磁性酶免疫分析法是近年推出用于检测HLA-B27的新方法[12]，利用免疫磁珠技术和ELISA法相结合，通过经HLAB27抗体包被的磁珠分离全血中带有HLA-B27抗原的白细胞，经酶底物液显色而测定其结果。

实验表明，使用磁性酶疫分析法与使用流式细胞仪检测的结果符合率很高，两种方法的阳性预测价值和阴性预测价值差异无统计学意义，磁性酶免疫分析法还具有较高的敏感性和特异性。

同时由于此法具有操作简便、反应时间短（1 h内即可完成）、标本用量少（仅需抗凝全血
50 μl）、结果稳定客观易判断（通过酶联免疫检测仪判读结果）、不需特殊设备、影响因素少、不需要细胞、价格合理、适合批量测定等优点，因而对基层医院来说，磁性酶免疫分析法是适合AS患者早期诊断和鉴别诊断的一种实用而可靠的检测方法，具有良好的临床应用前景。

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