内容实验四 离体蛙心灌流

实验器材和药品
【实验对象】 蛙或蟾蜍。 实验对象】 蛙或蟾蜍。 实验器材和药品】 【实验器材和药品】 蛙类手术器械、玻璃蛙心插管、铁支架、蛙心 蛙类手术器械、玻璃蛙心插管、铁支架、 张力换能器、BL-420系统 任氏液、 系统、 夹、张力换能器、BL-420系统、任氏液、无钙任 氏液、 氯化钙溶液、 氯化钙溶液1%氯 氏液、3%氯化钙溶液、0.1%氯化钙溶液 氯化钙溶液 氯化钙溶液 氯 化钾溶液、 去甲肾上腺素溶液、 化钾溶液、l:10000 去甲肾上腺素溶液、l:10000 肾上腺素溶液、 乙酰胆碱溶液、 肾上腺素溶液、l:10000乙酰胆碱溶液、2.5%碳 乙酰胆碱溶液 碳 酸氢钠溶液、3%乳酸溶液、0.0125%毒毛花甙 酸氢钠溶液、 乳酸溶液、 毒毛花甙 乳酸溶液 K。 。
漳州卫生职业学院
基础医学部实验中心
内容:实验四 离体蛙心灌流 内容:
主讲教师：林艺
实验四、 实验四、离体蛙心灌流
目的和原理 实验对象 实验准备 实验器材和药品 实验步骤及观察项目 注意事项 思考与讨论
实验四、 实验四、离体蛙心灌流
目的和原理
正常的蛙心能按静脉窦的节律性自动产生兴奋， 正常的蛙心能按静脉窦的节律性自动产生兴奋， 如将离体的蛙心保存在适宜的环境中，在一定时间内 如将离体的蛙心保存在适宜的环境中， 仍能产生节律性兴奋和收缩活动。 仍能产生节律性兴奋和收缩活动。由于心脏的正常活 动还有赖于内环境因素的相对稳定， 动还有赖于内环境因素的相对稳定，改变灌流液的成 分可引起心脏活动的改变。 分可引起心脏活动的改变。 本实验的目的是学习离体蛙心的灌流方法， 本实验的目的是学习离体蛙心的灌流方法，并观察 某些离子、递质和强心贰对心脏活动的影响。 某些离子、递质和强心贰对心脏活动的影响。
2.4.1制作标本
⑴破坏脑和脊髓 同“实验一、蛙离体神经干生物信号 与兴奋性检测”的标本制作⑴。 ⑵暴露心脏 同“实验三、期前收缩和代偿间歇”的标 本制作⑵。 ⑶观察心脏的解剖结构 暴露心脏，用小镊子夹起心包 膜，沿心轴剪开心包膜，仔细识别心房、心室、动脉 圆锥、主动脉、静脉窦、前后腔静脉等解剖结构（图 2-4-1 、2-4-2 ）。
实验步骤概要241制作标本破坏脑和脊髓暴露心脏观察心脏的解剖结构心脏插管242连接仪器与装置标本?242连接仪器与装置标本243启动并进入bl420系统进行软件操作244观察项目225结果处理观察描记正常的蛙心搏动曲线观察钙离子的作用观察钾离子的作用观察去甲肾上腺素的作用观察肾上腺素的作用观察乙酸胆碱的作用观察h的作用观察强心药的作用????????????????241制作标本?破坏脑和脊髓同实验一蛙离体神经干生物信号与兴奋性检测的标本制作
2.4.4观察项目 观察项目
⑴观察描记正常的蛙心搏动曲线，注意观察心跳频率、强度及心 室的收缩和舒张程度。 ⑵观察钙离子的作用 ①将插管内任氏液全部吸出，换入无钙溶液，观察心搏曲线，当 心搏曲线开始出现变化时立即将无钙溶液吸出，用新鲜任氏液反 复换洗，待曲线恢复正常时，再做下一项实验。 ②任氏液中加入3%氯化钙溶液1∽2滴，观察心搏曲线，同样， 当心搏曲线开始出现变化时立即更换新鲜任氏液，待曲线恢复正 常时，再作下一项实验（以下要求相同）。 ⑶观察钾离子的作用 任氏液中加入1%氯化钾溶液1∽2滴，观察 心搏曲线的变化，待效应出现，即用任氏液换洗至心收缩曲线正 常。 ⑷观察肾上腺素的作用 任氏液中加入1:10000肾上腺素溶液1∽2 滴，观察心搏曲线的变化。
①在1 通道的输入接口上连接张力传感器。 ②开机进入BE-420 系统。 ③选择“输入信号”菜单中的“l 通道”菜单项，以弹出“l 通道”子菜单；在“1 通道”中选择“张力”信号。 ④使用鼠标单击工具条上的“开始”命令按钮。 注：上述步骤的③、④亦可由下面的步骤替代： 选择“实验项目”菜单中的“循环实验”菜单项，以弹出 “循环实验”子菜单；在子菜单中选择“蛙心灌流”实验模 块。 ⑤根据窗口中显示的心搏曲线，再适当调整实验参数以获得 最佳的实验效果。 ⑥观察正常的心搏曲线之后，在每次更换药品之前，打开屏 幕右下角的特殊实验标记编辑对话框，选择一个已经编辑好 的特殊实验标记组或自己新建一个特殊实验标记组或添加一 个新的实验标记，然后点击“OK ”即可完成实验标记。
5 10 15 (min)
心室收缩频率(次/分) 收缩力(g)
离体蛙心灌流
注意事项
1.蛙心插管内液面勿过高或过低，每次换液时，必须 用任氏液冲洗3次，并使插管内液面应保持同一高度。 2.加试剂时，先加1∽2滴，用滴管混匀后如作用不明 显可再适当补加。 3.每次加药，心搏曲线出现变化后立即将插管内液体 吸出并及时更换新鲜任氏液，重复几次使心搏曲线恢 复正常。 4.每项实验都应有前后对照，随时滴加任氏液于心脏 表面使之保持湿润。 5.换能器头端应向下倾斜以免液体进人换能器。 6.各种试剂的滴管不要混淆,以免影响实验结果。
⑸观察去甲肾上腺素的作用 任氏液中加入1:10000去甲肾上 腺素溶液1∽2滴，观察心搏曲线的变化。 ⑹观察乙酸胆碱的作用 任氏液中加入1:10000 乙酰胆碱1∽2 滴，观察心搏曲线的变化。待效应明显后，换液、冲洗至心 收缩曲线正常。 ⑺观察[H+]的作用 ①任氏液中加入2.5%碳酸氢钠溶液1∽2滴，观察心搏曲线的 变化。 ②任氏液中加入3%乳酸溶液1∽2 滴，当心搏曲线出现变化 时加入1∽2滴2.5%碳酸氢钠溶液，观察心搏曲线的恢复过程。 ⑻观察强心药的作用 换用适量无钙任氏液灌流，待心肌收缩 力和排出量明显减少时，在灌流液中加入0.0125%毒毛花甙K 2滴，给药后每3分钟记录心室收缩频率和心肌收缩力一次， 待强心作用明显时加入0.1% 氯化钙溶液1∽2滴，继续观察上 述指标，并注意有无心律律失常发生，将结果填入表2-4-1。
思考题
1.在每个实验项目中心搏曲线分别出现什么变化，为什么？ 2.如果你们的实验结果与预期的不同，请找出原因。
在右主动脉下方穿一根线， ⑷心脏插管 在右主动脉下方穿一根线，用玻璃分针将心脏拨翻 至背面，将前、后腔静脉一起结扎（注意勿扎住静脉窦）， ），再将 至背面，将前、后腔静脉一起结扎（注意勿扎住静脉窦），再将 心脏复至原位，在左总动脉干下穿2 条线， 心脏复至原位，在左总动脉干下穿 条线，一条在左总动脉上端 结扎作插管时牵引用，另一条在动脉圆锥上方系一松结， 结扎作插管时牵引用，另一条在动脉圆锥上方系一松结，用于结 扎固定蛙心插管。 扎固定蛙心插管。用眼科剪在松结扎上方左总动脉根部剪一小斜 将盛有少量任氏液的蛙心插管由此口插入主动脉， 口，将盛有少量任氏液的蛙心插管由此口插入主动脉，至动脉圆 锥略向后退，并转向心室的中央方向， 锥略向后退，并转向心室的中央方向，在心室收缩期插入心室 如插管已插入心室， （如插管已插入心室，可见管内液面会随着心室的舒缩而上下波 ），将预先准备好的松结扎紧并固定于插管侧面的小突起上以 动），将预先准备好的松结扎紧并固定于插管侧面的小突起上以 免插管滑出心室。轻轻提起插管， 免插管滑出心室。轻轻提起插管，在结扎线远端分别剪断左主动 右主动脉、左右肺静脉和前后腔静脉，将心脏离体， 脉、右主动脉、左右肺静脉和前后腔静脉，将心脏离体，用新鲜 任氏液反复换洗蛙心插管内含血的任氏液， 任氏液反复换洗蛙心插管内含血的任氏液，直至插管内无血液残 留为止，保持液面1cm 。 留为止，保持液面
2.4.5结果处理 结果处理
①返演实验、剪辑结果，打印剪辑后的 实验结果。 ②返回视窗界面，关闭计算机。
毒毛花甙K及 表2-4-1毒毛花甙 及CaCl2对蛙心的影响 毒毛花甙 对蛙心的影响
0.0125%毒毛花甙 2滴
0.1%CaCl2 2滴
给药前 缺钙
3 6 9 12 15 1骤概要
2.4.1制作标本 制作标本 ⑴破坏脑和脊髓 ⑵暴露心脏 ⑶观察心脏的解剖结构 ⑷心脏插管 2.4.2连接仪器与装置标本 连接仪器与装置标本 2.4.3启动并进入 启动并进入BL-420 系统，进行软件操作 系统， 启动并进入 2.4.4观察项目 观察项目 2.2.5结果处理 结果处理 ⑴观察描记正常的蛙心搏动曲线 ⑵观察钙离子的作用 ⑶观察钾离子的作用 ⑷观察去甲肾上腺素的作用 ⑸观察肾上腺素的作用 ⑹观察乙酸胆碱的作用 观察[H+]的作用 ⑺观察 的作用 ⑻观察强心药的作用
2.4.2连接仪器与装置标本 连接仪器与装置标本
用试管夹将蛙心插管固 定在铁支架上，用蛙心 夹在心脏舒张期夹住心 尖组织约2mm，将其 上的线头连至张力换能 器（图2-4-3 ） ，调节 连线之松紧，注意让线 垂直。 图2-4-3
2.4.3启动并进入 启动并进入BL-420 系统，进行软件操作 系统， 启动并进入