肺癌患者肺泡灌洗液抑癌基因p16、FHIT、MGMT、APC的甲基化表达水平
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８μL,灭菌蒸馏水加至 ５０μL.
１．
４ 统 计 学 处 理 采 用 SPSS１７．
０统计软件进行数
据分析,计数 资 料 采 用 例 数 或 率 表 示,采 用 χ２ 检 验、
赵美芳,王月花
(浙江省金华市人民医院呼吸科 ３２１０００)
摘 要:目的 研究肺癌患者肺泡灌洗液抑癌基因 p１６、
FHIT、MGMT、
APC 的 甲 基 化 表 达 水 平.方 法
选取 ２０１８ 年 １—１２ 月该院胸外科收治的肺癌住院准备手术患者 １００ 例作为研究对象,所有患者均在术前行气
能只存在某个关键基因发 生 甲 基 化 状 态 改 变,往 往 是
多个基因共同作用的结果.
７１(
７１．
００)
密切相关.另外,本 研 究 所 选 取 的 均 是 肺 癌 Ⅰ ~ Ⅱa
期患者,属早期肺癌,因此,可 进 一 步 研 究 是 否 可 推 广
参考文献:
化检测,观测其异常表达情 况 即 可 取 得 较 为 显 著 的 诊
２４)
８(
５７．
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４ 项阳性
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断准确率.
在肺癌组织中 P１６、
FHIT、MGMT 和 APC 等 相
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中华医学会神
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３
血管病学组 ．中国急 性 缺 血 性 脑 卒 中 诊 治 指 南 ２０１８[
J]．
中华神经科杂志,
２０１８,
５１(
９):
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[
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００％ .结论 通过肺泡灌洗液抑癌基因 p１６、
FHIT、MGMT、
APC 的甲基化检测发现抑癌基因的甲基化与不同病理类型肺癌密切相关.
关键词:肺癌;抑癌基因;甲基化;相关性
肺癌是 当 前 世 界 上 一 种 导 致 患 者 死 亡 的 主 要 恶
性肿瘤疾病,无论是死亡 率,还 是 发 病 率 均 位 于 首 位.
２)
严重肝、功能肾功能疾病;(
３)其 他 感 染 性、造 血 系 统、
神经系统、自身免疫系统疾病等.
１．
３ 检测方法
１．
３．
１ 采集支气管肺泡 灌 洗 液 将 电 子 支 气 管 的 镜
前端嵌入病灶所在的肺 段 中 并 向 其 中 灌 注 生 理 盐 水,
/mi
再负压点吸 回 收 BALF 反 复 ３ 次,
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水准(双侧):
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０５. 以 P ＜０．
０５ 为 差 异 有 统 计 学
意义.
２ 结 果
P１６、
FHIT、MGMT、
APC 的 甲 基 化 阳 性 率 分 别
为 ６５．
００％ 、
５０．
００％ 、
５５．
００％ 、
达的 调 控,其 中 CpG 二 核 苷 酸 中 胞 咪 定 的 甲 基 化 修
任意阳性
[
１] 苑群,张建银,陈 乾,等 ．支 气 管 肺 泡 灌 洗 液 MGMT 基 因
甲基化检测在非小细胞肺癌 诊 断 中 的 价 值 [
J]．滨 州 医 学
院学报,
２０１８,
４１(
２):
１０５
Ｇ
１０８．
[
、
２] 骆江龙,李鲲,冯旭 ．
００％
.为此,提高
[
２]
肺癌的早期 筛 查 的 特 异 性 和 灵 敏 度 是 当 前 学 界 探 索
的热点.近年来,大量研 究 表 明,各 种 结 直 肠 癌、乳 腺
癌、淋巴瘤等 疾 病 的 发 生、发 展 均 与 其 遗 传 特 征 密 切
相关
.基因的 表 现 形 式 主 要 是 DNA 甲 基 化
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肺癌患者肺泡灌洗液抑癌基因 p１６、
FHIT、MGMT、
∗
APC 的甲基化表达水平
[
３]
,其
[
４]
中基因的功 能 发 生 可 遗 传、可 逆 性 的 改 变,而 基 因 的
序列并未改变.为此,通过 对 抑 癌 基 因 甲 基 化 检 测 可
反映出机体 的 病 变 情 况. 本 研 究 对 肺 癌 住 院 患 者 肺
泡灌 注 液 p１６、MGMT、FHIT 和 APC 基 因 启 动 子
２５００r
n离心
１０mi
n,用磷酸 盐 缓 冲 液 清 洗 ２ 次,收 集 到 的 细 胞 置
于 －８０ ℃ 保存待测.
１．
３．
２ DNA 的纯度测定 按全基因组 DNA 提取试
剂盒的操作 说 明 书 严 格 进 行. 利 用 紫 外 分 光 光 度 计
测量 实 验 中 提 取 到 的 DNA 的 吸 光 度 (OD)值,
OD２６０/OD２８０ 为１．
８~２．
０ 的基因组 DNA 作为标准
样品.DNA 溶液置于 －２０ ℃ 保存.
１．
３．
３ DNA 甲 基 化 的 MSP 检 测 MSP 检 测 原 理
是利用 NaHSO３ 处理 基 因 组 DNA,其 中 可 以 使 为 计
划的胞嘧啶转化为尿嘧啶,而 甲 基 化 的 胞 嘧 啶 则 不 会
重庆医学 ２０２１ 年第 ５０ 卷增刊(Ⅰ )
１５２
转变,由此可以根据产物进 行 序 列 分 析 来 测 定 其 是 否
甲基化.
１．
３．
３．
１ DNA 的亚硫酸氢盐的处理 ２μg 的 DNA
加入 NaOH,水浴 ３０ mi
n充分变性后加入氢琨和调
定 pH５ 的亚硫酸氢钠 溶 液 混 匀 后,在 避 光 条 件 下 ５０
２０１８
Ｇ
４
Ｇ
０５５).
１．
２ 纳入标准和排除标准 纳入标准:(
１)年龄 ３０~
７０ 岁,性别不受限;(
２)
CT 定 位 经 皮 肺 穿 刺 活 检 或 气
管镜检查活检确诊为肺癌 Ⅰ~Ⅱa期;(
３)签署本研究
知情同意书. 排 除 对 象:(
１)患 有 高 血 压、糖 尿 病、心
脏病、重度支气管哮喘、恶 性 肿 瘤、过 敏 性 疾 病 等;(
各方面因素,并成为了导致 抑 癌 基 因 和 关 键 致 癌 基 因
出现癌 症 相 关 信 号 被 激 活 及 失 调 最 关 键 的 因 素
.
[
５]
在肿瘤的发生、发展期间表 观 遗 传 学 在 其 中 发 挥 着 非
常重要的作用,其主要是指 在 不 对 基 因 序 列 进 行 改 变
APC
３５(
５２．
DNA 甲基化进行了 MSP 检测,并 将 其 与 病 理 诊 断 结
果进行了对比,旨在观察肺 癌 与 抑 癌 基 因 甲 基 化 的 相
关性.
１ 资料与方法
１．
１ 研究 对 象 选 取 ２０１８ 年 １—１２ 月 本 院 胸 外 科
收治的肺癌住院准备手术患者 １００ 例作为研究对象.
∗
基金项目:浙江省金华市科技局立项课题(
５８．
００％ ,其 中 ４ 项 指
标阳性率 为 ４４．
００％ ,任 意 阳 性 率 为 ７１．
００％ . 见 表
１.
表 １ 病理检查结果与基因甲基化检测结果比较[
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P１６
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２２)
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６５(
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００)
℃ 水浴 １６h,通 过 上 述 处 理 方 法,已 被 甲 基 化 的 胞 嘧
啶不汇发生改变,为甲基 化 的 则 会 变 为 尿 嘧 啶. 修 饰
后的 DNA 通过纯 化 回 收 系 统 沉 淀 及 乙 醇 洗 涤 后,加
入 去 离 子 水 后 沉 淀 溶 解,可 用 于 进 行 聚 合 酶 链 反 应
FHIT
３１(
４６．
２７)
MGMT
３３(
４９．
２５)
１(
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００)
５５(
５５．
００)
３ 讨 论
肺癌的 发 生、发 展 涉 及 表 观 遗 传、遗 传 及 环 境 等
重庆医学 ２０２１ 年第 ５０ 卷增刊(Ⅰ )
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癌早期诊断中的价值[
微创医学,
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７１)
７(
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５０)
此,可以认为 抑 癌 基 因 的 甲 基 化 与 肺 癌 的 发 生、发 展
饰最为常见 [６]. 因 DNA 启 动 子 区 域 CpG 岛 的 高 甲
瘤疾病的临 床 筛 查 中 通 过 对 其 特 异 性 基 因 进 行 甲 基
２(
１００．
００)
１(
５０．
００)
同病理类 型 肺 癌 均 存 在 抑 癌 基 因 的 高 度 甲 基 化,因
(
PCR).
１．
３．
３．
２ 引 物 设 计 和 PCR 扩 增 对 甲 基 化 及 非 甲
基化 p１６、MGMT、
FHIT 和 APC 基 因 启 动 子 序 列 进
行 PCR 扩增.PCR 反应体系的构成:
Taq 酶 ０．
５μL,
病理检查结果
腺癌
鳞癌
腺鳞癌
大细胞癌
小细胞癌
其他及未分型
合计
n
６７
关抑癌基因极少会存在基 因 突 变 和 基 因 缺 失 的 现 象,
本 研 究 对 １００ 例 肺 癌 患 者 P１６、FHIT、MGMT 和
APC 甲 基 化 检 测,结 果 显 示,其 阳 性 率 分 别 为 ６５．
００％ 、
５０．
００％ 、
５５．
００％ 、
５８．
００％ ,而 其 ４ 项 指 标 均 显
至肺结节患者的早期肺癌筛查.
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０统计软件进行数
据分析,计数 资 料 采 用 例 数 或 率 表 示,采 用 χ２ 检 验、
赵美芳,王月花
(浙江省金华市人民医院呼吸科 ３２１０００)
摘 要:目的 研究肺癌患者肺泡灌洗液抑癌基因 p１６、
FHIT、MGMT、
APC 的 甲 基 化 表 达 水 平.方 法
选取 ２０１８ 年 １—１２ 月该院胸外科收治的肺癌住院准备手术患者 １００ 例作为研究对象,所有患者均在术前行气
能只存在某个关键基因发 生 甲 基 化 状 态 改 变,往 往 是
多个基因共同作用的结果.
７１(
７１．
００)
密切相关.另外,本 研 究 所 选 取 的 均 是 肺 癌 Ⅰ ~ Ⅱa
期患者,属早期肺癌,因此,可 进 一 步 研 究 是 否 可 推 广
参考文献:
化检测,观测其异常表达情 况 即 可 取 得 较 为 显 著 的 诊
２４)
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４ 项阳性
２５(
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００)
４４(
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断准确率.
在肺癌组织中 P１６、
FHIT、MGMT 和 APC 等 相
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中华医学会神
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血管病学组 ．中国急 性 缺 血 性 脑 卒 中 诊 治 指 南 ２０１８[
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中华神经科杂志,
２０１８,
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APC 的甲基化检测发现抑癌基因的甲基化与不同病理类型肺癌密切相关.
关键词:肺癌;抑癌基因;甲基化;相关性
肺癌是 当 前 世 界 上 一 种 导 致 患 者 死 亡 的 主 要 恶
性肿瘤疾病,无论是死亡 率,还 是 发 病 率 均 位 于 首 位.
２)
严重肝、功能肾功能疾病;(
３)其 他 感 染 性、造 血 系 统、
神经系统、自身免疫系统疾病等.
１．
３ 检测方法
１．
３．
１ 采集支气管肺泡 灌 洗 液 将 电 子 支 气 管 的 镜
前端嵌入病灶所在的肺 段 中 并 向 其 中 灌 注 生 理 盐 水,
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０５. 以 P ＜０．
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意义.
２ 结 果
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为 ６５．
００％ 、
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达的 调 控,其 中 CpG 二 核 苷 酸 中 胞 咪 定 的 甲 基 化 修
任意阳性
[
１] 苑群,张建银,陈 乾,等 ．支 气 管 肺 泡 灌 洗 液 MGMT 基 因
甲基化检测在非小细胞肺癌 诊 断 中 的 价 值 [
J]．滨 州 医 学
院学报,
２０１８,
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１０８．
[
、
２] 骆江龙,李鲲,冯旭 ．
００％
.为此,提高
[
２]
肺癌的早期 筛 查 的 特 异 性 和 灵 敏 度 是 当 前 学 界 探 索
的热点.近年来,大量研 究 表 明,各 种 结 直 肠 癌、乳 腺
癌、淋巴瘤等 疾 病 的 发 生、发 展 均 与 其 遗 传 特 征 密 切
相关
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肺癌患者肺泡灌洗液抑癌基因 p１６、
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APC 的甲基化表达水平
[
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中基因的功 能 发 生 可 遗 传、可 逆 性 的 改 变,而 基 因 的
序列并未改变.为此,通过 对 抑 癌 基 因 甲 基 化 检 测 可
反映出机体 的 病 变 情 况. 本 研 究 对 肺 癌 住 院 患 者 肺
泡灌 注 液 p１６、MGMT、FHIT 和 APC 基 因 启 动 子
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１．
３．
２ DNA 的纯度测定 按全基因组 DNA 提取试
剂盒的操作 说 明 书 严 格 进 行. 利 用 紫 外 分 光 光 度 计
测量 实 验 中 提 取 到 的 DNA 的 吸 光 度 (OD)值,
OD２６０/OD２８０ 为１．
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样品.DNA 溶液置于 －２０ ℃ 保存.
１．
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３ DNA 甲 基 化 的 MSP 检 测 MSP 检 测 原 理
是利用 NaHSO３ 处理 基 因 组 DNA,其 中 可 以 使 为 计
划的胞嘧啶转化为尿嘧啶,而 甲 基 化 的 胞 嘧 啶 则 不 会
重庆医学 ２０２１ 年第 ５０ 卷增刊(Ⅰ )
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转变,由此可以根据产物进 行 序 列 分 析 来 测 定 其 是 否
甲基化.
１．
３．
３．
１ DNA 的亚硫酸氢盐的处理 ２μg 的 DNA
加入 NaOH,水浴 ３０ mi
n充分变性后加入氢琨和调
定 pH５ 的亚硫酸氢钠 溶 液 混 匀 后,在 避 光 条 件 下 ５０
２０１８
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１．
２ 纳入标准和排除标准 纳入标准:(
１)年龄 ３０~
７０ 岁,性别不受限;(
２)
CT 定 位 经 皮 肺 穿 刺 活 检 或 气
管镜检查活检确诊为肺癌 Ⅰ~Ⅱa期;(
３)签署本研究
知情同意书. 排 除 对 象:(
１)患 有 高 血 压、糖 尿 病、心
脏病、重度支气管哮喘、恶 性 肿 瘤、过 敏 性 疾 病 等;(
各方面因素,并成为了导致 抑 癌 基 因 和 关 键 致 癌 基 因
出现癌 症 相 关 信 号 被 激 活 及 失 调 最 关 键 的 因 素
.
[
５]
在肿瘤的发生、发展期间表 观 遗 传 学 在 其 中 发 挥 着 非
常重要的作用,其主要是指 在 不 对 基 因 序 列 进 行 改 变
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３５(
５２．
DNA 甲基化进行了 MSP 检测,并 将 其 与 病 理 诊 断 结
果进行了对比,旨在观察肺 癌 与 抑 癌 基 因 甲 基 化 的 相
关性.
１ 资料与方法
１．
１ 研究 对 象 选 取 ２０１８ 年 １—１２ 月 本 院 胸 外 科
收治的肺癌住院准备手术患者 １００ 例作为研究对象.
∗
基金项目:浙江省金华市科技局立项课题(
５８．
００％ ,其 中 ４ 项 指
标阳性率 为 ４４．
００％ ,任 意 阳 性 率 为 ７１．
００％ . 见 表
１.
表 １ 病理检查结果与基因甲基化检测结果比较[
n(％ )]
P１６
３７(
５５．
２２)
１２(
８５．
７１)
２(
１００．
００)
１(
５０．
００)
６(
８５．
７１)
７(
８７．
５０)
６５(
６５．
００)
℃ 水浴 １６h,通 过 上 述 处 理 方 法,已 被 甲 基 化 的 胞 嘧
啶不汇发生改变,为甲基 化 的 则 会 变 为 尿 嘧 啶. 修 饰
后的 DNA 通过纯 化 回 收 系 统 沉 淀 及 乙 醇 洗 涤 后,加
入 去 离 子 水 后 沉 淀 溶 解,可 用 于 进 行 聚 合 酶 链 反 应
FHIT
３１(
４６．
２７)
MGMT
３３(
４９．
２５)
１(
５０．
００)
５(
７１．
４３)
１(
５０．
００)
５(
７１．
４３)
７(
５０．
００)
２(
１００．
００)
１０(
７１．
４３)
２(
１００．
００)
４(
５０．
００)
５０(
５０．
００)
４(
５０．
００)
５５(
５５．
００)
３ 讨 论
肺癌的 发 生、发 展 涉 及 表 观 遗 传、遗 传 及 环 境 等
重庆医学 ２０２１ 年第 ５０ 卷增刊(Ⅰ )
１５１
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[
J]．
Po
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ad MedJ,
２０２０,
９６(
１１４１):
１
６
D
APK 和 APC 基 因 甲 基 化 在 肺
p
]
癌早期诊断中的价值[
微创医学,
J．
６(
８５．
７１)
７(
８７．
５０)
此,可以认为 抑 癌 基 因 的 甲 基 化 与 肺 癌 的 发 生、发 展
饰最为常见 [６]. 因 DNA 启 动 子 区 域 CpG 岛 的 高 甲
瘤疾病的临 床 筛 查 中 通 过 对 其 特 异 性 基 因 进 行 甲 基
２(
１００．
００)
１(
５０．
００)
同病理类 型 肺 癌 均 存 在 抑 癌 基 因 的 高 度 甲 基 化,因
(
PCR).
１．
３．
３．
２ 引 物 设 计 和 PCR 扩 增 对 甲 基 化 及 非 甲
基化 p１６、MGMT、
FHIT 和 APC 基 因 启 动 子 序 列 进
行 PCR 扩增.PCR 反应体系的构成:
Taq 酶 ０．
５μL,
病理检查结果
腺癌
鳞癌
腺鳞癌
大细胞癌
小细胞癌
其他及未分型
合计
n
６７
关抑癌基因极少会存在基 因 突 变 和 基 因 缺 失 的 现 象,
本 研 究 对 １００ 例 肺 癌 患 者 P１６、FHIT、MGMT 和
APC 甲 基 化 检 测,结 果 显 示,其 阳 性 率 分 别 为 ６５．
００％ 、
５０．
００％ 、
５５．
００％ 、
５８．
００％ ,而 其 ４ 项 指 标 均 显
至肺结节患者的早期肺癌筛查.