重组人β-防御素-2基因在昆虫细胞的转染表达

重组人β-防御素-2基因在昆虫细胞的转染表达
蔡绍晖;黄宁;王伯瑶
【期刊名称】《中国病理生理杂志》
【年(卷),期】2001(017)008
【摘要】目的:BEVS(Baculovirus expression vector system)杆状病毒表达系统是近年涌现的适用范围最广、表达效率最高的真核表达系统之一.本研究旨在探索应用该系统高效表达hBD-2的可行性及技术路线.方法:(1)利用引物hBD2p6和hBD2p9经PCR扩增,从原质粒的pcDNA3.1/Myc-His(+)/hBD-2中扩增出带有翻译起始密码ATG和终止密码TGA的完整重组hBD-2/His基因片段,通过双酶切,使该片段两端分别带有ScaI和KpnI两种限制性内切酶粘性末端;将此外源性片段插入转移质粒pAcGHLT-A的多克隆位点中的ScaI和KpnI位点上,使其处在多角蛋白基因强启动子的控制之下.(2)经重组pAcGHLT-A/hBD-2/His转移载体和AcNPV DNA共转染Sf21细胞,并在细胞内进行同源重组,形成重组病毒rAcNPVhBD-2/His.于共染后第5 d,收集各组细胞的培养上清,用终点稀释分析法检测共转染效率.经过多轮感染上清反复感染Sf21细胞和终点稀释分析法验证,获得高滴度的重组病毒.(3)用特异性抗-His抗体,经Western blot检测细胞及上清hBD-2/His的表达情况.结果:经酶切鉴定和测序分析证实:C端带Myc和6个多聚组氨酸双重标志的重组hBD-2已正确地插入BEVS系统的转移载体中,构建成重组转移载体pAcGHLT-A/hBD-2/His.经过多轮感染上清反复感染Sf21细胞及终点稀释分析法验证,高滴度的重组病毒rAcNPVhBD-2/His已被获得.Western blot 检测结果提示Sf21细胞已表达和分泌6xHis-GST-hBD-2-6xHis融合蛋白.结论:本
研究结果支持利用BEVS杆状病毒-昆虫表达系统作为高效表达重组hBD-2生物反应器的设想.
【总页数】1页(P800)
【作者】蔡绍晖;黄宁;王伯瑶
【作者单位】四川大学华西医学中心感染免疫研究室病理生理学教研室四川成都610041;四川大学华西医学中心感染免疫研究室病理生理学教研室四川成都610041;四川大学华西医学中心感染免疫研究室病理生理学教研室四川成都610041
【正文语种】中文
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