反相高效液相色谱法测定糕点馅料中对羟基苯甲酸酯的含量_刘燕

= 60 ∶ 40. The C18 reversed phase chromatographic col-
umn （ Nova － Pak C18 ； 4. 6 × 150mm，4um） and PDA Detector 2998 were used with wavelengths 254nm． The results showed a good linearity in the range of 0. 05 g / mL ～ 250 g / mL，and the minimum detected concentration was 0. 25 g / mL． The average recovery ranged from 98. 5% ～ 104. 2% ． The method has good recovery and repeatability． It can meet the requirement of routine test． The 11 kinds of pastry fillings from shopping malls， supermarkets， small workshop were tested． The detection rate was 36. 4% of methylparaben，9. 1% of ethyl p － hydroxybenzoate，no of propyl p － hydroxybenzoate and 9. 1% of butyl p － hydroxybenzoate． Use of butyl p － hydroxybenzoate exceeded to the
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价值 。
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材料与方法
试剂及仪器
对羟基苯甲酸甲酯、 对羟基苯甲酸乙酯、 对 羟基苯甲酸丙酯、 对羟基苯甲酸丁酯 （ 分析纯， 纯度： ≥99% ， 天 津 市 科 密 欧 化 学 试 剂 开 发 中 心） ； 甲醇、 乙醇 HPLC 级 （ 美国 Merck 公司 ） ； 超声波清洗器 （ KQ5200B 型昆山市超生仪器有限 公司） ； 电子天 METTLEＲ TOLEDO AC204 （ 梅特 勒 － 托 利 多 仪 器 有 限 公 司） ； 高 效 液 相 色 谱 仪 e2695 Waters； PDADetector 2998 型 Waters； C18 反相 色 谱 柱 （ Nova － Pak C18 ； 4. 6 × 150mm， 4um） 。 1. 2 储备液制备 分别称取 0. 100g 对羟基苯甲酸甲、 乙、 丙、 丁酯，将其全部转移至 100（ 乙醇 + 水 = 95 + 5 ） 定容， 得到浓 度约为 1mg / mL 的混合标准溶液。 1. 3 标准溶液制备 分别取储备液 0. 1mL、0. 2mL、0. 5mL、1mL
储备液于 10mL 容量瓶中， 加入 40 μL H2 SO4 ， 用 乙醇水混合溶液 （ 乙醇 + 水 = 95 + 5 ） 定容， 得 到 各 组 分 最 终 浓 度 约 为 10 μL / mL、 20 μL / mL、 50 μL / mL、100 μL / mL 的 对 羟 基 苯 甲 酸 酯 混 合 溶液。 1. 4 样品处理 称量粉碎后试样 2. 5g （ 准确值 0. 0001g ） 试 样于 50mL 具塞锥形瓶中， 加入 0. 2 mLH2 SO4 和 20mL 乙醇水混合溶液 （ 乙醇 + 水 = 95 + 5 ） ， 将 瓶盖拧紧后用力振荡混匀。60℃ 超声提取 5min， 冷水冷却后定容至刻度线， 然后置于冰箱中 4℃ 冷藏 1h，用 0. 45 μm 滤膜过滤， 上机进行高效液 相色谱分析。 1. 5 仪器测定条件 色 谱 柱： Nova － Pak C18 ； 4. 6 × 150mm， 4 μm； 流 动 相： 甲 醇 + 0. 02mol / L 磷 酸 二 氢 钠
收稿日期： 2014 － 02 － 14
* 通讯作者
作者简介： 刘燕，女，（ 1979 － ） ，硕士研究生，研究方向为食品检验工作。
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range of GB2760 － 2011 and no use of excess． Tthe application of p － hydroxy benzoate in pastry fillings was common， and the supervision and management should be strengthen． Key words： pastry fillings； reversed phase high performance liquid chromatography （ ＲP － HPLC） ； p － hydroxy benzoate； isocratic elution
。食 品
中尼泊金酯的含量及限量研究愈显重要 。 对羟基苯甲酸酯类的测定多采用气相色谱 法 ， 与之相比 ， 利 用 液 相 色 谱 法 测 定 对 羟 基 苯 甲酸酯有高 效 、 快 捷 的 特 点 ， 但 这 些 液 相 色 谱 法往往采用 梯 度 洗 脱 ， 较 为 繁 琐 ， 使 用 不 同 设 备时往往 需 要 复 杂 的 方 法 转 换 ， 不 利 于 日 常 监 管工作的 需 要 。 本 文 采 用 等 度 洗 脱 方 法 对 糕 点 中四种 对 羟 基 苯 甲 酸 酯 类 进 行 液 相 色 谱 分 析 ， 方法 操 作 简 单 、 灵 敏 、 可 靠 ， 具 有 很 高 的 实 用
反相高效液相色谱法测定糕点馅料中 对羟基苯甲酸酯的含量
* 刘燕 ，丁太春，杨智灵，吴昊，王宗汉，魏法山
（ 河南省产品质量监督检验院，郑州 450004 ）
摘 要： 建立一种快速、简便测定糕点馅料中对羟基苯甲酸酯类物质的等度洗脱反相高效液相色谱方法 。
样品经硫酸酸化后加入乙醇水混合溶液置于 60℃ 超声波中浸提，运用反相高效液相色谱 （ ＲP － HPLC ） 法在 不改变流动相和检测波长的情况下，测定糕点馅料中四类对羟基苯甲酸酯的含量 。 检测条件为： 甲醇 ∶ 0. 02N 磷酸二氢钠 （ pH = 4. 0 ） = 60 ∶ 40 ，C18 反相色谱柱 （ Nova － Pak C18 ； 4. 6 × 150mm，4um ） ， PDADetector 2998 型检测器，检测波长为 254nm。该方法检测浓度范围为 0. 05 μg / mL ～ 250 μg / mL，最小检测浓度为 0. 025 μg / mL，样品回收率为 98. 5% ～ 104. 2% 之间。方法操作简单，样品回收率好，精密度好，适合日常检 测要求。对商场、超市、小作坊采购的 11 种不同含馅糕点进行测定，对羟基苯甲酸甲酯检出率为 36. 4% ，对 羟基苯甲酸乙酯检出率为 9. 1% ，对羟基苯甲酸丙酯未检出，对羟基苯甲酸丁酯检出率为 9. 1% 。 对羟基苯甲 酸丁酯属于超限使用，未发现超量使用情况 。此次监测发现对羟基苯甲酸酯类产品在糕点馅料中应用较为普 遍，应加强监督管理。 关键词： 糕点馅料； 反相高效液相色谱； 对羟基苯甲酸酯； 等度洗脱 中图分类号： TS207. 3 文献标识码： A 文章编号： 1006 － 2513 （ 2014 ） 04 － 0150 － 04
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= 60 + 40 ； 流 速： 0. 8mL / min； 注 温： 30℃ ； 检测波长： 254nm； 进样量 10 μL。
（ pH = 4. 0 ）
（ pH = 4. 0 ）
= 60 + 40 等度洗脱， 选取对羟基苯 甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、 对羟基苯甲酸丙
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结果与讨论
Abstract： A rapid and simple ＲP － HPLC method for the determination of p － hydroxy benzoate in pastry fillings was developed． The acidtreated sample was extracted with ethanol － water solution at 60℃ ． The content of four kinds of p － hydroxy benzoates in pastry fillings was tested by ＲP － HPLC while the flow phase and wavelength was not changed． The flow phase was CH3 OH ∶ 0. 02NNaH2 PO4 （ pH = 4. 0 ）
色谱条件选择 对羟基苯甲酸波长选择情况 采用流动相为甲醇 + 0. 02mol / L 磷酸二氢钠
酯、对羟 基 苯 甲 酸 丁 酯 的 混 合 标 准 溶 液 自 动 进 样，选用二极管阵列检测器 （ PAD ） 在 220nm － 360nm 范围 内 进 行 全 波 长 扫 描。 DAD 检 测 器 在 220nm ～ 360nm 间的三维扫描图如图 1 。
The measurement of p － hydroxy benzoate in pastry fillings by ＲP － HPLC
LIU Yan * ，DING Taichun，YANG Zhiling，WU Hao，WANG Zonghan，WEI Fashan （ Henan Province Product Quality Supervision and Inspection Center Zhengzhou 450004 ）
糕点是 深 受 大 众 喜 爱 的 食 品 。 它 分 为 热 加 工糕点和 冷 加 工 糕 点 ， 热 加 工 糕 点 馅 料 又 可 分 为烘 烤 糕 点 、 油 炸 糕 点 、 水 蒸 糕 点 、 熟 粉 糕 点 等 ； 冷加 工 糕 点 可 分 为 冷 调 韧 糕 点 、 蛋 糕 类 、 油炸 上 糖 浆 类 、 萨 其 马 等 ， 样 式 繁 多 。 糕 点 生 产厂家水平 良 莠 不 齐 ， 以 小 作 坊 居 多 ， 糕 点 产 品的质 量 安 全 需 要 公 众 权 益 机 构 更 多 的 关 注 。 对羟基苯甲 酸 酯 是 一 类 对 羟 基 苯 甲 酸 酯 类 化 合 物 ， 俗称尼泊金 酯 ， 是 公 认 的 广 谱 高 效 食 品 防 腐剂 ， 广 泛 应 用 于 调 味 品 、 腌 制 品 、 糕 点 、 烘 焙食 品 、 酱 制 品 、 饮 料 、 黄 酒 以 及 果 蔬 保 鲜 等 领域 ， 但 存 在 超 标 、 超 范 围 使 用 情 况 。 食 品 中 常见使用 的 有 对 羟 基 苯 甲 酸 甲 酯 、 对 羟 基 苯 甲 酸乙酯 、 对羟基 苯 甲 酸 丙 酯 、 对 羟 基 苯 甲 酸 丁 酯。《食品安全国家标准 食品添加剂食用标准 GB2760 － 2011 》 规定糕点馅料中对羟基苯甲酸 甲酯 、 对羟 基 苯 甲 酸 乙 酯 及 其 钠 盐 含 量 不 得 超 过 0. 5g / kg （ 以对羟基 苯 甲 酸 计 ） ， 对 羟 基 苯 甲 酸丙酯 、 对 羟 基 苯 甲 酸 丁 酯 及 其 相 应 钠 盐 不 能 作为食品 添 加 剂 被 应 用 于 食 品 中 ， 为 非 法 添 加 物 。 所以对糕点 馅 料 中 对 羟 基 苯 甲 酸 甲 酯 、 对 羟基苯甲酸 乙 酯 、 对 羟 基 苯 甲 酸 丙 酯 、 对 羟 基 苯甲酸丁 酯 的 检 验 就 显 得 尤 为 重 要 。 有 些 对 羟 基苯甲酸 酯 类 还 存 在 于 植 物 中 ， 如 蓝 莓 中 存 在 对羟基苯甲酸甲酯 ， 作为其抗微生物剂 。 最近 ， 有科学家研 究 发 现 对 羟 基 苯 甲 酸 酯 与 乳 癌 的 发 ［1］ 生有关 。 动 物 实 验 研 究 显 示 对 羟 基 苯 甲 酸 酯 有弱的 雌 激 素 活 动 ， 如 同 仿 雌 激 素