柱层析法分离纯化辅酶Q_(10)研究

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HPLC测定辅酶Q_10_软胶囊中的主药并检查有关物质

华西药学杂志W C J ・P S　2008,23(3):344～345作者简介:张素娟(1981-),女,正攻读药物分析专业的硕士学位。

3通讯作者(Corres pondent author )HP LC 测定辅酶Q 10软胶囊中的主药并检查有关物质张素娟,付春梅,刘三康,李章万3(四川大学华西药学院,四川成都610041)摘要:目的　建立测定软胶囊中辅酶Q 10的含量及有关物质检查的方法。

方法　采用硅胶吸附HP LC 法,色谱柱为TianheKr omasil Silica (250mm ×4.6mm,5μm ),流动相为正己烷-正丁醇(99.2ζ0.8),柱温为35℃。

结果　辅酶Q 10进样量11320～6.032μg 与峰面积的线性关系良好(r =0.9993),分析方法精密度的RSD =0.42%;辅酶Q 10的最低检出限为0.57ng (S/N =3)。

结论　所建方法简便、灵敏、准确,可用于辅酶Q 10的含量测定及有关物质的检查。

关键词:辅酶Q 10软胶囊;硅胶吸附HP LC;辅酶Q 10;有关物质中图分类号:R917　文献标识码:A 　文章编号:1006-0103(2008)03-0344-02Con ten t determ i n a ti on of coenzym e Q 10and the exam i n a ti on of rel a ted subst ances i n Coen 2zym e Q 10soft capsuleZHANG Su -juan,F U Chun -mei,L I U San -kang,L I Zhang -wan3(W est China School of Phar m acy,S ichuan U niversity,Chengdu 610041,China )Abstract:O BJECT I VE To devel op a method f or deter m ining the contents of coenzy me Q 10and exa m ining the related substances in Coenzy me Q 10s oft cap sule .M ETHOD S Silica gel ads or p ti on HP LC was used with Tianhe Kr omasil Silica colu mn (250mm ×416mm,5μm ).The mobile phase was cycl ohexane -n -Butanol (99.2ζ0.8)and the colu mn te mperature was set at 35℃.RESU L TS Good linearity was obtained in the range of 1.320-6.032μg (r =0.9993)f or coenzy me Q 10and the detective li m it was 0.57ng (S/N =3).CO NCL US I O N These methods are si m p le,sensitive and p racticable for the assay of coenzy me and exa m inati on of related substances .Key words:Coenzy me Q 10s oft cap sule;Silica gel ads or p ti on HP LC;Coenzy me Q 10;Related substances CLC nu m ber:R917 D ocu m en t code :A 　Arti cle I D :1006-0103(2008)03-0344-02 辅酶Q 10是一种代谢激活剂,是细胞自身产生的天然抗氧剂,除了用作辅助药物预防感冒延缓衰老和提高机体免疫力之外,还被广泛用作保健品和化妆品[1]。

厦门大学生科院生物化学真题2005

厦门厦门大学大学2005年招收攻读硕士学位研究生入学考试试题年招收攻读硕士学位研究生入学考试试题招生方向招生方向：：水生生物学水生生物学、、生化与分子生物学生化与分子生物学考试科目考试科目：：生物化学477477研究方向研究方向：：一、填空题填空题（（每空1分，共30分）1、乳糖是由一分子____和一分子____组成，他们之间通过____键相连。

2、脂肪的碱水解过程产物称为_____。

3、采用透析和超滤方法来使蛋白质和其他小分子物质分开，是根据的什么特性？______4、蛋白质的内源荧光主要来自于____和___两种氨基酸。

5、当蛋白质疏水侧链折叠到分子内部时，环境中水的熵____。

6、通常球状蛋白质的侧链位于_____分子内部，侧链位于_____分子表面。

7、按国际酶学委员会的规定，每一种酶都有一个唯一的编号，碱性磷酸酶的编号时EC3.1.3.1，EC 代表___，第一个数3代表____。

8、酶活性中心包括____和____两个功能部位，分别决定酶的____和____。

9、双链DNA 热变性OD260值____；单链DNA 热变性OD260值____.10、Watson-Crick 提出的B-DNA 双螺旋结构的螺距为____，相邻两个核苷酸之间的夹角为____。

11、实验室常用____方法测定DNA 含量，用___方法测定RNA 含量。

12、杀粉蝶菌素作为呼吸链上____类似物，能够阻断呼吸链。

13、生物合成主要由____提供还原能力。

14、葡萄糖的无氧分解只能产生__分子ATP，而有氧分解可以产生__分子ATP。

15、痛风是因为体内____产生过多造成的，使用____作为黄嘌呤氧化酶的自杀性底物可以治疗痛风。

16、褪黑激素来源于____氨基酸，而硫磺酸来源于____氨基酸。

二、选择题选择题（（每题1分，共30分）1、下列哪种糖不具有还原性？A、麦芽糖B、异麦芽糖C、乳糖D、蔗糖2、一些抗菌素可以作为离子载体，这意味着它们：A、可以干扰细菌细胞壁的合成B、对细胞膜有一个类似于去垢剂的作用C、增加了细胞膜对特殊离子的通透性D、抑制转录和翻译3、要将膜蛋白分子完整地从膜上溶解下来，可以采用：A、蛋白酶B、透明质酸酶C、脂肪酶D、去垢剂4、下列物质中，不是高能化合物的是：A、磷酸烯醇式丙酮酸B、1，3－二磷酸甘油酸C、磷酸肌酸D、葡萄糖－6－磷酸5、肌肉组织中肌肉收缩所需的能量主要是以哪种形式储存？A、磷酸烯醇式丙酮酸B、ATPC、磷酸肌酸D、G TP6、催化氨基酸转氨作用的酶称为转氨酶，其辅酶是A、NAD+B、磷酸吡哆醛C、生物素D、黄素单核苷酸7、下列哪种方法可得到蛋白质的“指纹”图谱？A、酸水解，然后凝胶过滤B、用胰蛋白酶水解，然后竞选纸层析或纸电泳C、彻底碱水解并用例子交换层析测定氨基酸的组成D、用2，4－二硝基氟苯处理蛋白质。

柱层析的分离原理和分离步骤

柱层析的分离原理和分离步骤：
柱层析是一种广泛应用于化学和生物学领域中的分离技术，其基本原理是利用混合物中各组分物理化学性质的差异，如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等，使各组分在固定相和流动相之间进行不同的分配和移动速度，从而达到分离的目的。

在柱层析中，固定相通常是由不溶性基质形成，如硅胶、大孔吸附树脂、聚酰胺等，而流动相则是由溶剂组成。

样品被加到柱子上后，用流动相洗脱，在洗脱过程中，样品中的各组分根据其在固定相和流动相中的分配系数不同，经历多次反复的吸附、解吸、再吸附、再解吸过程，最终实现分离。

柱层析的操作方式主要包括常压分离、减压分离和加压分离，其中，常压分离是最简单的分离模式，适用于大于50-100g的产品，但洗脱时间较长；减压分离可以节省填料的使用量，但由于大量的空气通过填料会使溶剂挥发，且有时易分解的化合物难以得到；加压分离可以加快淋洗剂的流动速度，缩短样品的洗脱时间。

秦川牛心肌渣辅酶Q_(10)的萃取方法研究

马志科，昝林森，张双奇
（北农林科技大学动物科技学院，西杨凌西陕７２０）１１０
Байду номын сангаас
摘
要：为综合利用资源，以提取细胞色素ｃ后的秦川牛心肌渣为原料，用醇碱皂化，油醚萃取，胶柱采石硅
ｙｌａｃｏｌｃｙｔ１Ｔｈｅｕｌｓｓｗｅｈｌｏｈａｅｓｏｆｃｔｏｕｉａｅｔｍｐｅａｕｒｓ９ｌｏｈｒｓａ．ｅｒｓｔｈｏｄｔｅａｃｏｌｂｓａＤｎｉｉａｉｎｓｔｂｌｅｒｔｅｗａ０℃ ，
ＱｉｃｕｎＣａｔａｔＭｕｃｅＳｒｌｓｎｈａｔｌＨｅｒｓｌｕｐｕｅ
ＭＡｉｋｅ。ＺＡＮｎｓｎａＺｈ — Ｌｉ — ｅｎｄＺＨＡＮＧｈｕｎｇｑＳａ —ｉ
（ｌｇｆＡｎｍａｃｅｃｎｃｎｌｇＣｏｌｅｏｉｌＳｉｎｅａｄＴｅｈｏｏｙ，Ｎｏｒｈｓ８ｉｅｓｔｅｔｗｅｔＡＬＦＵｎｖｒｉｙ，ＹａｇｉｇＳｈａｘ７１０Ｃｈｎａｎｌｎａｎｉ２１０，ｉ）
辅酶Ｑ１（ｏｎｙ。是一种线粒体氧化。ＣｅｚｍｅＱ１）还原酶的辅酶，在于细胞线粒体内膜上，细胞存为呼吸链上的一种递氢体，细胞自身产生的天然是抗氧化剂和细胞呼吸代谢的激活剂。同时它与网
Ａｂｔａｔｓｒｃ：Ａ｛ｅｘｒｃｅｙｏｈｏｒｍｎｈａａｔｅｈａｔｍｕｃｅｏｎｙ０ｗａｘｒｃｔｒｅｔａｔｄｃｔｃｒｍｅＣｆｏＱｉｃｕｎｃｔｌｅｒｓｌ，ｃｅｚｍｅＱ１ｓｅｔａ —

有机物分离与纯化的方法柱层析的一些技巧

有机物分离与纯化的方法柱层析的一些技巧柱层析是有机物分离与纯化中常用的一种方法，它适用于各种有机物分离和纯化的需求，具有操作简单、分离效果好、分离范围广等优点。

以下是柱层析的一些技巧和注意事项：1.选择合适的固定相：柱层析的关键是选择合适的固定相。

固定相应根据有机物的性质选择，例如，非极性化合物可选择疏水性固定相，而极性化合物可选择亲水性固定相。

此外，选择固定相时还需考虑其耐酸碱性、耐溶剂性以及稳定性等因素。

2.预处理样品：在进行柱层析之前，需要对样品进行预处理。

通常，样品需要经过一系列的前处理步骤，如提取、结晶、干燥等，以去除杂质和水分，确保柱层析的准确性和精确性。

3.选择合适的洗脱剂：洗脱剂的选择应根据样品的性质和分离要求进行。

通常，洗脱剂应具有良好的溶解度、流动性和洗脱效果。

此外，还应注意洗脱剂对固定相的稳定性和可逆性的影响。

4.控制流量和压力：柱层析时，通过控制流量和压力来控制洗脱速度。

一般情况下，流速应控制在适当的范围内，以避免样品在柱上停留时间过短或过长，同时还应注意防止柱内压力过高导致流动性降低。

5.分馏收集：柱层析过程中，不同组分的洗脱剂和样品溶液需要分馏收集。

对于挥发性较强的组分，可采用低温收集或短时间收集的方法，以减少组分的损失。

6.调整pH值：一些有机物分离和纯化需要在特定pH条件下进行。

在柱层析前，需要对洗脱剂或样品溶液进行调整，以改变pH值，提高分离效果。

7.重复柱层析：柱层析是一个可重复进行的操作，可以根据需要多次进行柱层析。

在重复柱层析过程中，需要逐步提高洗脱剂的极性或采用不同的洗脱剂组合，以实现更好的分离效果。

8.优化条件：在柱层析过程中，需进行条件优化。

通过调整柱层析的参数，如固定相类型、样品负载量、洗脱剂类型和流速等，以达到最佳分离效果。

9.保护柱层析柱：柱层析柱是一种易损耗的设备，应注意保护。

在使用过程中，应避免受到机械碰撞和高温等有害因素的影响，避免使用过量的洗脱剂和样品负载，以延长柱层析柱的使用寿命。

柱层析技术在中药材有效成分分离纯化中的应用

柱层析技术在中药材有效成分分离纯化中的应用作者：许政赵志强来源：《中国中医药信息》2013年第12期关键词：柱层析技术；中药材；有效成分；分离纯化；综述DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.12.049中图分类号：R288 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）12-0109-02中药材中有效成分具有显著的生理活性和药理作用，其中以多糖、生物碱和黄酮等的应用最为广泛。

但中药材有效成分复杂、含量低、杂质多，用常规提取法得到的提取物仍是混合物，需进一步分离与纯化。

柱层析技术是利用物质的分子形状、大小、带电状态、溶解度、吸附能力、分配系数、分子极性及亲和力等理化性质的差别，使混合物中各组份以不同程度分布在固定相和流动相中，使各组份逐步分离。

其优点是分离效率高，应用物质范围广、分离条件参数选择性强、操作条件温和等，广泛应用于多糖、生物碱、黄酮、酶、色素、苷类、萜类等代谢产物和生物大分子的分离纯化。

本文重点介绍几种柱层析在中药材多糖、生物碱和黄酮的分离纯化中的应用，为中药研究开发提供参考。

1 柱层析的分类根据物质分离机理的不同，目前的柱层析可分为吸附柱层析、离子交换柱层析、凝胶柱层析、亲和柱层析、疏水柱层析、分配柱层析及等电聚焦柱层析等多种类型。

其中，吸附、离子交换、凝胶柱层析是应用最为广泛的柱层析技术[1]。

吸附柱层析是利用吸附剂对不同物质的吸附力不同而使各组份分离的方法。

吸附力越大的物质，移动速率越慢。

常用的吸附剂有吸附树脂、硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭、硅藻土的。

吸附柱层析主要应用在生物碱、色素等生物小分子物质的分离，其成本较低、易于操作，在天然药物分离制备中应用较广[2]。

离子交换柱层析是利用离子交换剂对各种离子的离子交换亲和力不同，将目标离子固定在固定相中，通过洗脱液洗脱而使各组份得以分离。

常用的有离子交换树脂、离子交换纤维素（二乙胺基乙基纤维素等）、离子交换凝胶（二乙胺基乙基纤维素-葡聚糖凝胶等）。

柱层析纯化

柱层析纯化一、概述柱层析纯化是分离、纯化和富集生物大分子的一种常用技术。

它是利用各种不同的化学和物理性质来分离、提纯和富集混合物中的目标分子，如蛋白质、核酸等。

柱层析纯化技术已经成为生物制药工业中最常用的方法之一，因为它可以高效地从复杂混合物中提取目标分子，并且能够在较短时间内得到高度纯净的产物。

二、柱层析原理柱层析是基于不同组分在固定相上的不同亲和力而进行分离的。

固定相通常是填充在管柱中的小颗粒，这些颗粒可以根据表面化学性质进行选择性修饰。

样品通过固定相时，会与其表面发生相互作用，使其在固定相上停留时间不同，从而实现了对样品组分的分离。

三、柱层析步骤1. 选择填料：根据需要分离的目标分子特异性选择填料；2. 制备填料：将填料与特异性结合剂进行反应；3. 装填柱子：将填料装入柱子中；4. 平衡柱子：在样品加入之前，用适当的缓冲液平衡柱子；5. 加入样品：加入经过前处理的样品；6. 洗脱杂质：用缓冲液洗脱非特异性结合的杂质；7. 洗脱目标分子：用特定条件洗脱目标分子；8. 收集纯化产物：收集纯化后的产物。

四、柱层析类型1. 亲和层析：利用特异性结合剂选择性地捕捉目标分子。

2. 尺寸排除层析：根据分子大小进行分离。

3. 离子交换层析：通过离子交换基团对带电荷的生物大分子进行选择性捕捉。

4. 逆相层析：根据生物大分子在水相和有机相之间的亲和力差异进行分离。

五、优点与局限优点：1. 可以高效地从复杂混合物中提取目标分子，并且能够在较短时间内得到高度纯净的产物。

2. 操作简单，容易掌握，可以快速实现自动化操作。

3. 适用于各种生物大分子的分离纯化，具有广泛的应用前景。

局限：1. 填料选择和柱子操作需要一定的专业知识和经验。

2. 操作过程中可能会引入杂质，影响纯化效果。

3. 操作过程中需要严格控制条件，如温度、pH值等，否则可能会影响纯化效果。

六、应用柱层析技术广泛应用于生物制药工业、生命科学研究领域以及食品和环境监测等领域。

辅酶 Q10 的分离纯化及生物活性的研究进展

中图分类号：Ｒ２８４．２文献标识码：ＡＤＯＩ：１０．３９６９／Ｊ．ＩＳＳＮ．１６７４—１４８Ｘ．２０１４．０２．０１２
ＲｅｖｉｅｗｏｎＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＣｏｅｎｚｙｍｅＱ１０
文章编号：１６７４ —１４８Ｘ（２０１４）０２ —０１３６０６
辅酶Ｑ１０的分离纯化及生物活性的研究进展
秦云，朴美子，王凤舞
（青岛农业大学食品科学与工程学院，山东青岛２６６１０９）
ａｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．ＴｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＣｏＱ１０ｄｉｓｐｌａｙｓｏｎａｎｔｉ — ｏｘｉｄａｔｉｏｎ，ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ，ｃａｎｃｅｒａｎｄ
青岛农业大学学报（自然科学版）３１（２）：１３６～１４１，２０１４
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＱｉｎｇｄａｏＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ）
ｍｅｔｏｌｏｇｙ：ＣｏｅｎｚｙｍｅＱ１０；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ

辅酶 Q10(CoQ10)检测试剂盒说明书

A 标准=标准管的吸光度 0.5=CoQ10 标准的浓度(mg/ml) VT=CoQ10 提取液的总体积(ml) m=样品的实际用量(g)
注意事项： 1、待测样品中不能含有 CoQ10 抑制剂，同时需避免反复冻融。 2、在皂化过程中，震荡不要剧烈，以免形成乳化层。 3、CoQ10Assaybuffer 如果出现浑浊或絮状物，应弃用。 4、CoQ10 标准梯度应准确，尽量减少不必要的误差。 5、ECsolution 有一定毒性，请小心操作。 6、检测标准品时，按步骤 3 表格混合后，2min 内即出现明显的蓝色变化并逐渐加深，20min 后蓝色开始变浅，30min 后逐渐呈黄绿色。630nm 检测数据表明，随着时间的延长，OD 值在不断的下降，对应的颜色也已发生变化，特别是高浓度的标准品变化比较大。因此，应在出现最深的蓝色结果且稳定的时间段内尽快检测，而且建议每次同时检测标准品 (0.3~0.5mg/ml)和样品。如有条件，最好用酶标仪检测，减少因检测时间导致的误差。 7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
辅酶 Q10(CoQ10)检测试剂盒(微板法)说明书
本产品仅供体外研究使用，不得用于临床诊断
产品简介：辅酶 Q(CoenzymeQ，CoQ)是一种生物体内广泛存在的脂溶性醌类化合物，故又称泛醌，在体内呼吸链中质子移位及电子传递中起重要作用，是呼吸链中重要的递氢体，它是细胞呼吸和细胞代谢的激活剂，也是重要的抗氧化剂和非特异性免疫增强剂。对多种酶有激活作用。不同生物体来源的辅酶 Q 其侧链异戊烯单位的数目不同，人类和哺乳动物是 10 个异戊烯单位，故称辅酶 Q10。辅酶 Q10 是辅酶 Q 类的重要成员之一，它们与线粒体内膜相结合，广泛参与体内的生物代谢过程。
相关产品：氨苄青霉素溶液(Ampicillin,50mg/ml) 苏木素伊红(HE)染色液 SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法) 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 比色法) 附一：参考标准曲线范围：测定 CoQ10 标准 0.04、0.1、0.3、0.5、1、2、5mg/ml 在 630nm 的吸光度，据此做出其标准曲线如下：

分离辅酶Q的提纯方法[发明专利]

专利名称：分离辅酶Q的提纯方法专利类型：发明专利
发明人：卢伟良,周苗
申请号：CN200710166132.1申请日：20071109
公开号：CN101429108A
公开日：
20090513
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种辅酶Q的提纯方法，所述方法包括将含有辅酶Q的上柱液通过硅胶柱层析；再用正己烷与低级醇、或正己烷与低级酮的混合溶剂进行洗脱得到洗脱液；洗脱液减压浓缩至干，加乙醇结晶得到辅酶Q。

通过此种洗脱方式，大大降低了后续溶剂的回收工作的困难程度，同时辅酶Q 的有效组分含量得到提高。

申请人：浙江医药股份有限公司新昌制药厂
地址：312500 浙江省新昌环城东路59号
国籍：CN
代理机构：北京乾诚五洲知识产权代理有限责任公司
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柱层析分离纯化原理

柱层析分离纯化原理一、柱层析分离纯化原理概述柱层析分离纯化是一种常用的生物分子分离纯化技术，其基本原理是利用吸附剂对不同组分的吸附能力的差异，实现对混合物的分离。

在柱层析过程中，混合物溶液通过加压或重力作用，流经吸附剂填充的色谱柱。

不同组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，因此会以不同的速度在柱内移动，从而实现各组分的分离。

二、吸附剂的种类与性质1.硅胶：硅胶是一种常见的柱层析吸附剂，其表面具有极性基团，可以与非极性物质产生相互作用。

硅胶具有高比表面积、高孔隙率等特点，适用于多种生物分子的分离纯化。

2.氧化铝：氧化铝是一种具有中强碱性的吸附剂，适用于酸性物质的分离。

其表面具有较高的活性，能够与多种物质发生相互作用。

3.活性炭：活性炭是一种具有高比表面积和发达孔隙结构的吸附剂，能够吸附多种有机物质。

其表面具有较强的化学活性，可以通过与被吸附物质发生化学反应实现分离。

4.聚酰胺：聚酰胺是一种高分子吸附剂，能够通过氢键作用吸附多种物质。

其优点是选择性高、吸附能力强，适用于蛋白质、核酸等生物分子的分离纯化。

三、流动相与固定相的选择1.流动相：流动相是一种连续相，在柱层析过程中不断通过色谱柱。

选择适当的流动相有助于提高柱层析的分离效果。

常见的流动相包括有机溶剂和水溶液等。

2.固定相：固定相是色谱柱中的填料，是实现分离的关键因素。

根据被分离物质的性质选择合适的固定相，可以提高分离的选择性和效率。

四、洗脱方式及其影响因素1.洗脱方式：洗脱是指将已吸附在固定相上的组分从固定相中转移至流动相的过程。

常见的洗脱方式包括线性梯度洗脱和阶跃式洗脱等。

选择适当的洗脱方式有助于提高分离效果和纯度。

2.影响因素：洗脱方式的优劣受多种因素影响，如洗脱液的组成、流速、洗脱梯度等。

通过优化这些参数，可以提高柱层析的分离效果和纯度。

五、柱层析分离纯化的应用领域1.生物分子分离纯化：柱层析技术在生物分子分离纯化中应用广泛，如蛋白质、核酸、糖类等物质的分离纯化。

柱层析分离净化的实验方法和经验总结

柱层析分离净化的实验方法和经验总结柱层析技术也称柱色谱技术。

一根柱子里先填充不溶性基质形成固定相，将混合样品加到柱子上后用特别的溶剂洗脱，溶剂组成流动相。

在样品从柱子上洗脱下来的过程中，根据混合物中各组分在固定向和流动相中的分配系数不同经过多次反复分配，将不同组分逐一分离。

硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。

根据填充基质和样品分配交换原理不同，离子交换层析，凝胶过滤层析和亲和层析是三种分离混合物的经典层析技术。

1、柱层析操作方法的选择目前，柱色谱分离的操作方式，主要包括常压分离、减压分离和加压分离3种模式。

常压分离是最简单的分离模式方便、简单，但是洗脱时间长。

减压分离尽管能节省填料的使用量，但是由于大量的空气通过填料会使溶剂挥发，并且有时在柱子外面会有水汽凝结，以及有些易分解的化合物也难以得到，而且还必须同时使用水泵或真空泵抽气。

加压分离可以加快淋洗剂的流动速度，缩短样品的洗脱时间，是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗液更快洗脱。

压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵等。

2、柱子规格的选择市场上有各种规格的柱层析分离柱。

柱子长了，相应的塔板数就高，分离就好。

目前市场上的柱子，其径高比一般在1: 5～10范围，在实际使用时，填料量一般是样品量的30～40倍，具体的选择要根据样品的性质和含量进行具体分析。

如果所需组分和杂质的分离度较大，就可以减少填料量，使用内径相对较小的柱子(如 2 cm × 20 cm的柱子) ；如果Rf相差不到0.1，就要加大柱子，增加填料量，比如用3 cm内径的柱子。

3、装柱柱层析色谱柱的填装主要有湿法和干法两种，湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少越好，不然溶剂就成了淋洗剂了。

有机物分离与纯化方法、柱层析一些技巧

份。 ❖ 蒸馏方法分类：常压蒸馏适用于b.p较低，在b.p时不分解的物质。减压蒸馏适用于b.p较高，或在b.p发生分解的物质。水蒸气蒸馏适用于不与水反应，b.p较高的物质。
有机物分离与纯化方法、柱层析一些技巧
１、常压蒸馏
１）装置不扭、歪、漏２）温度计水银球位置３）加沸石４）容器中液体体积５）热源选择６）馏出速度
❖ C、热源温高于b.p20-30℃，压力不稳调热源。
❖ 馏出速度0.5～1D/S
❖ D、多组分蒸馏：馏出温度上升时转换接收器（使用多头接
受器）。
❖ E、蒸馏完后先撤热源、再开活塞，压力平衡后关气泵与打开
毛细管夹。
有机物分离与纯化方法、柱层析一些技巧
３、旋转浓缩蒸馏法
❖ 一般用于提取液浓缩 ❖ １）浓缩原理 ❖ 使溶剂在瓶壁形成一层薄膜，扩大蒸馏
❖ 几种极性差别大的混合物用几种不同极性的淋洗剂分批洗脱。
❖ 亦可以用混合淋洗剂。
有机物分离与纯化方法、柱层析一些技巧
10、淋洗剂洗脱能力与洗脱要点
❖ １）常用淋洗剂洗脱能力： ❖ 正〈〈己CC3H烷HC7〈lO3〈CHCE〈tl42M〈OeC〈O6HCHH5〈-C3CHHO23O〈2CC2H6H5〈6〈MCeH2C2COl2 ❖ ２）淋洗要点：连续不断，不快不慢，吸
些技巧
减压蒸馏装置图
５）减压蒸馏操作步骤
❖ A、查蒸馏系统可否达应有真空度
开始：关安全瓶活塞，紧毛细管螺丝夹，开抽气泵，
压力达要求。
停止：慢慢打开安全瓶活塞，压力与外界平衡，可旋转多用接头松毛细管螺丝夹，关抽气泵。
❖ B、加液料、关活塞、开抽气、调毛细（气泡与线）、达到压力后（平衡、稳定）再加热。

一种高效纯化辅酶Q10的新工艺

一种高效纯化辅酶Q10的新工艺杨贞妮;杨桂清【摘要】通过两次重结晶和一次硅胶柱层析纯化精制辅酶Q10粗品,产品纯度达到99.0％以上.实验讨论了柱层析中高径比、洗脱液的种类、配比对提纯的影响;结果表明,最佳条件为高径比为1.5:1、正己烷:异丙醚为7:1,得到的产品纯度为99.3％,有望用于工业上.【期刊名称】《信息记录材料》【年(卷),期】2016(017)001【总页数】3页(P29-31)【关键词】辅酶Q10;纯化精制;硅胶柱层析【作者】杨贞妮;杨桂清【作者单位】沈阳感光化工研究院有限公司辽宁沈阳110141;沈阳感光化工研究院有限公司辽宁沈阳110141【正文语种】中文【中图分类】TQ46辅酶Q10（Coenzyme Q10）纯品为黄色或橘黄色的晶体，熔点为48.0-52.0℃，易溶于正己烷、苯、氯仿，微溶于乙醇，不溶于水和甲醇等强极性有机溶剂，对光不稳定易分解为微红色的物质，对湿度和温度不敏感，较稳定。

辅酶Q10可存在牛肉、豆油、花生、鲭鱼等食物及动物的肝、肾组织中[1]。

辅酶Q10具有自由基清除、改善细胞内呼吸、保护线粒体及增强免疫等功能。

因此，辅酶Q10在医药和化妆品等行业有着广泛而重要的应用。

可用于心脏病、高血压、子痫、帕金森及酒精肝等疾病的辅助治疗[2-6]；添加到化妆品中，淡化细纹，细腻肌肤，起到美容养颜的效果。

因此，辅酶Q10深受广大消费者的青睐[7]。

辅酶Q10的生产多采用微生物发酵法，生产产量高。

因此制约辅酶Q10工业化的主要因素是下游提取纯化工艺。

现行的辅酶Q10的提纯方法有∶活性氧化铝柱层析、硅胶柱层析及大孔吸附树脂法。

这些方法存在以下问题∶活性氧化铝价格较高使其工业化应用成本上升；硅胶柱层析次数较多且硅胶重复利用率低，导致工业操作复杂，使后续成本增加。

大孔吸附树脂法较为先进，目前仅适合处于实验室小试阶段。

本文以纯度为50％-60％的辅酶Q10粗提物（外标法测）为原料，通过两次重结晶和一次硅胶柱层析精制后，产品纯度达到99％以上；探讨了柱层析过程中洗脱液的种类、配比等条件对提纯效果的影响。

柱层析蛋白质纯化方法学之综述

柱层析蛋白质纯化方法学之综述来自来邦网，在结构研究和体外生物化学分析等很多实验应用中都需要用到纯化蛋白质。

蛋白质可以从组织中获取，亦或更经常的是从模式生物中过量表达获得，如细菌、酵母或哺乳动物细胞培养等。

蛋白质纯化主要是根据它们各不相同的物理性质来从原料进行分离，其目的就是希望能浪费最少的杂蛋白，获得最多的功能蛋白质。

一个好的蛋白质的纯化过程必须要将其纯化工艺步骤优化至最少。

图 1.含Tris碱及其酸式物的Tris缓冲液溶液。

Tris 25°C 的pK a值是8.06，表示当pH=8.06，50%的Tris是质子化(酸式结构)，50%是去质子化(碱式结构)。

本文主要评述了4种蛋白质纯化中最常用的柱层析方法，并对它们各自的优缺点及存在的问题进行了讨论。

同时，本文还报道了来邦网(Labome)对98篇相关文献的调研。

调研结果表明，主要基于HIS、GST和FLAG标签的亲和层析和体积排阻层析是这些文献中最常采用的方法。

GE Healthcare是蛋白质纯化研究中最大的试剂和仪器供应商。

建立蛋白质纯化工艺建立蛋白质纯化工艺时，最重要的是需要考虑纯化得到的蛋白质应能满足其后续应用要求。

蛋白质的数量及纯度都必须满足实验分析要求。

而且，因为后续研究需要的是保持良好折叠结构的活性蛋白质，因此蛋白质行为的相关信息也需要考虑。

在纯化及后续的保存过程中，很多处理方法都会对蛋白质的性质产生影响，如蛋白质的去折叠、聚集、降解和失活等。

制定详细计划，在最短时间内完成蛋白质纯化，并在最稳定的条件下进行保存才算是成功地完成了其整个纯化过程。

图2.用于蛋白质自动层析分离的?ktaprime plus系统。

来自GE。

缓冲液体系每一步纯化过程中，蛋白质的溶液环境对其稳定性和活性的保持都非常关键。

蛋白质应该保存在一个良好的缓冲液环境中，要避免突然的pH值变化，以其防止对蛋?字收鄣刺⑷芙庑院突钚栽斐刹豢赡娴挠跋臁?缓冲液是一种含有共轭酸/碱对的水溶液。

制备液相色谱法在辅酶Q10分离纯化中的应用研究

制备液相色谱法在辅酶Q10分离纯化中的应用研究王洪宇;张慧君;黄超;汪群杰【期刊名称】《化工设计通讯》【年(卷),期】2024(50)3【摘要】目的 :旨在探究制备液相色谱法在辅酶Q10(Coenzyme Q10,简称CoQ10)的分离纯化过程中的应用,以提高其纯度和产率,为辅酶Q10的工业化生产提供新的思路和技术支持。

方法 :我们采用了一种新颖的技术方法,旨在除去5-脱甲氧基辅酶Q10杂质,从而改善CoQ10的质量。

首先,我们准备了辅酶Q10的混合样品,包括目标产物和杂质。

接下来,我们运用液相色谱法,利用某特定参数,如流速、柱温和检测波长,以分离目标产物和杂质。

该方法的关键在于对色谱条件的优化,以确保高效、精确地分离出CoQ10。

结果 :实验结果表明,采用液相色谱法成功实现了对辅酶Q10的分离纯化。

通过优化色谱条件,我们有效地去除了5-脱甲氧基辅酶Q10杂质,提高了CoQ10的纯度。

同时,该方法也显著提高了CoQ10的产率,使其更具商业化价值。

结论 :本研究验证了制备液相色谱法在辅酶Q10生产中的可行性和效果。

该方法为提高CoQ10的质量和产量提供了可行途径,并为其工业化生产提供了新的思路。

因此,液相色谱法可成为辅酶Q10分离纯化过程中的有力工具,有望推动辅酶Q10的广泛应用和市场推广。

【总页数】4页(P96-98)【作者】王洪宇;张慧君;黄超;汪群杰【作者单位】天津中科博蕴生物技术有限公司【正文语种】中文【中图分类】O657.7【相关文献】1.辅酶Q10的分离纯化及生物活性的研究进展2.高效液相色谱法测定蜂王幼虫中辅酶Q10含量3.柱层析法分离纯化辅酶Q10研究4.反相高效液相色谱法测定人视网膜中辅酶Q10的含量5.生物发酵产物中辅酶Q10的快速分离柱高效液相色谱法测定因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

高效液相色谱测定构树叶中辅酶Q_(10)含量

高效液相色谱测定构树叶中辅酶Q_(10)含量李万仓;郑宏燕;张惠娟;张浩;曹玉广【期刊名称】《营养学报》【年(卷),期】2008(30)4【摘要】目的建立一种测定构树叶辅酶Q10含量的方法。

方法构树叶用75%乙醇提取,萃取,蒸馏,浓缩。

色谱柱为C18250mm×4.6mm i.d10μm,流动相为无水乙醇-甲醇(65:35),流速为1ml/min,检测器波长275nm。

结果辅酶Q10在4～64μg/ml(r=0.9997)范围内具有良好的线性关系。

平均加样回收率为98.66%,RSD 为0.97%(n=6)。

构树叶中辅酶Q10的最低检测限为10ng/ml(S/N=3)。

结论该法快速,简便,准确。

适宜于构树叶辅酶Q10含量的检测。

【总页数】3页(P417-419)【关键词】构树叶;辅酶Q10(CoQ10);高效液相色谱【作者】李万仓;郑宏燕;张惠娟;张浩;曹玉广【作者单位】华中科技大学同济公共卫生学院流行病与卫生统计系;华中科技大学同济公共卫生学院;深圳市华士康科技有限公司【正文语种】中文【中图分类】R151.2【相关文献】1.制备型高效液相色谱系统在天然发酵辅酶Q_（10）及其杂质分离中的应用 [J], 秦学;王维;周建仁;何州2.制备型高效液相色谱系统在天然发酵辅酶Q_（10）及其杂质分离中的应用 [J], 秦学;王维;周建仁;何州3.反相高效液相色谱法测定化妆品中辅酶Q_(10)的含量 [J], 江平;辛剑;郑育芳;许国旺4.反相高效液相色谱法测定注射用辅酶Q_(10)冻干乳含量及有关物质 [J], 冯秀珍;姚瑶;丁燕飞;陶昱斐;张俊林5.反相高效液相色谱法测定保健食品中辅酶Q_(10)的含量 [J], 方从容;杨大进;马兰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

HPLC法快速测定辅酶Q₁₀维生素E软胶囊中2种功效成分含量

HPLC法快速测定辅酶Q<sub>10</sub>维生素E软胶囊中2种功效成分含量

摘要目的：建立 HPLC 法同时快速测定辅酶 Q10 维生素 E 软胶囊中辅酶 Q10 和维生素 E 的含量。方法：以无水乙醇为提取溶剂对样品进行超声提取；选用 Accucore C18（150 mm×2.1 mm，2.6 μm）色谱柱，以无水乙醇 - 甲醇（7∶13）为流动相，流速 0.4 mL·min-1，柱温 38 ℃，检测波长 280 nm。结果：样品中辅酶 Q10 和维生素 E 在 6 min 内得到很好的分离，质量浓度分别在 0.050~0.502 和 0.100~0.801 mg·mL-1 范围内呈良好线性（r=0.999 9）；辅酶 Q10 高、低添加水平的平均回收率（n=3）分别为 90.6% 和 98.3%，RSD 分别为 2.9% 和 4.0%；维生素 E 高、低添加水平的平均回收率（n=3）为 98.9% 和 95.7%，RSD 分别为 3.1% 和 2.6%。3 批样品中辅酶 Q10 含量分别为 103、102 和 105 mg·g-1，维生素 E 含量分别为 70.7、71.3 和 71.2 mg·g-1。结论：本文建立的方法经方法学验证，可用于辅酶 Q10 维生素 E 软胶囊的质量控制。关键词：辅酶 Q10；维生素 E；生育酚；脂溶性醌类化合物；抗氧化剂；脂溶性维生素；软胶囊；高效液相色谱
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药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2017,37(3)
HPLC 法快速测定辅酶 Q10 维生素 E 软胶囊中 2 种功效成分含量 *
林宏琳 1，华永有 1，童金华 2
（1．福建省疾病预防控制中心，福州 350001；2．福建农林大学菌草研究所，福州 350002）