不同方法制备的浓缩血小板表面CD62分子的表达
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Ｃ ６ 。 结 论 相 对 于 Ｐ Ｐ 法 ， 采 法 和 Ｂ 法 更 适 合 于 浓 缩 血 小 板 的 制 备 。 Ｄ ２ Ｒ 机 Ｃ 关 键 词 ： Ｄ ２ 血 小 板 活 化 ／ 小 板 制 备 方 法 ／ 小 板 流 式 细 胞 术 Ｃ ６ ／ 血 血 中 图分 类号 ： ３ １ １ ３ Ｒ ３ ． ４ 文 献标 识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ４５ ９ ２ ０ ） ４０ ３ ． ２ １ ０ ． ４ Ｘ（ ０ ２ ０ ．２ ６ ０
膜 进 行 轻 离 心 （ ０ ０ ｒｍｉ ， ｍｉ ， ２ ） 上 清 挤 入 １０ ／ ｎ ７ ｎ ２ ℃ ， 空袋 ， 制成浓缩血小 板 。 即 １ ７ 机 采 血 小 板 采 用 ＭＣ ． Ｐ单 采 机 收 集 浓 缩 ． Ｓ３
血小板 。
１１ 试剂 ．
藻 红 素 （ Ｅ） 记 抗 Ｃ ２ 抗 ； Ｅ 标 Ｐ 标 Ｄ６ 单 Ｐ
１ 材 料 与 方 法
浆、 白膜 层 分 别 挤 入不 同 的 卫 星袋 中 ， 将 红 细 胞 保 再 存 液 转 移 到 浓 缩 红 细 胞 中 制 成 晶 体 盐 红 细胞 悬 液 ， 然后 将 大 约 ２ ５～３ ｍｌ 浆 挤 入 白 膜 中 。将 白膜 置 ０ 血 于 血 小 板 保 存 装 置 中 振 荡 保 存 １ ５ ２ 然 后 将 白 ． ～ ｈ，
记 的 鼠 ＩＧ１Ｐ ａｍｉｇ ｎ公 司 ） ｇ （ｈｒ ｎｅ
１ ２ 仪 器 Ｊ６ 低 温 离 心 机 （ ｅｋ ｎ 公 司 ） ． －Ｍ Ｂ ｃ ｍａ ；
Ｍ Ｃ ．Ｐ 血 小 板 单 采 机 （ ｅ ｎ ｔ ｓＴｅｈ ｉ ｌ Ｓ３ Ｈａｍｏ ｅｌ ｃ ｎｃ 公 ｃ ａ
司 ） Ｅｐｃ ； ｉ ＸＬ流 式 细 胞 仪 （ ｏ ｌ ｒ 司 ） ｓ Ｃ ｕｔ 公 ｅ 。
／ ｎ ７ｍｉ ，２ ） 将 上 清 血 浆部 分 移 至 卫 星 袋 内 ， ｍｉ ， ｎ ２ ℃ ， 最 后 留 下 大 约 ２ ～ ３ ｍｌ 浆 ， 成 品 置 于 ２ ℃ 静 ５ ０ 血 将 ２ 置 １ ５ ｈ 然 后 用 手 轻 轻将 血 小 板 悬 起 。 ． ～２ ， １ ６ 白膜 回 浆 法 制 备 浓 缩 血 小 板 ． 将 采 后 １ ｈ
浓 缩 血 小 板 在 临 床 治 疗 中发 挥 着 重 要 作 用 。 目 前 其 制 备 方 法 有 ： 血 小 板 血 浆 法 （ Ｒ 法 ） 白膜 富 Ｐ Ｐ ，
回浆 法 （ Ｃ法 ） 机 采 血 小 板 法 。血 小 板 活 化 程 度 Ｂ 及 对血 小 板 的 体 内存 活 有 较 大 影 响 ， 此 笔 者 采 用 藻 为
Ｐ Ｅ标 记 的抗 Ｃ ６ Ｄ ２单 抗 ， 温 避 光 孵 育 ２ ～３ ｍｉ ， 室 ０ ０ ｎ 再 用 Ｐ Ｓ洗 涤 并 稀 释 至 ５ ０ ｄ 然 后 用 流 式 细 胞 仪 Ｂ ０ｔ，
测定表 达 Ｃ ６ Ｄ ２的 血 小 板 的 百 分 数 ， 个 样 品 均 用 每
１ ３ 献 血 者 分 组 将 符 合 献 血 标 准 的献 血 者 ， 机 ． 随
１ ８ 流 式 细 胞 仪 分 析 ［ 将 ３ ０ｔ血 小 板 样 品 用 ． ］ ０ｔ ｌ
１ 多 聚 甲醛 固定 １ ～２ ｎ， 后 用 Ｐ Ｓ洗 涤 １ ％ ０ ０ｍｉ 然 Ｂ ～ ２次 ， ５ 经 过 洗 涤 的 固定 血 小 板 中 加 入 ２ 的 向 ０ｌ ０ｌ
洪 俊 姚 锦 炎 李 小 文 徐 洪 卫 杨 金 龄 王 浦 南
（ ． 锡 市红 十 字 中心血 站 ， 苏无 锡 ２ ４ ２ ； ． 锡 市 第 一人 民 医院 ） １无 江 １０ １２ 无
摘 要 ： 的 了 解 不 同 制 备 方 法 对 浓 缩 血 小 板 表 面 Ｃ ６ 目 Ｄ ２表 达 的 影 响 。 方 法 采 用 藻 红 素 标 记 的抗 Ｃ ６ Ｄ ２单
分 为３ ， 组 每组 ｌ ２名 ， 别 按 机 采 法 、 ＲＰ法 、 Ｃ法 分 Ｐ Ｂ 制备浓缩 血小板 。
１ ４ 全 血 采 集 用 ＡＣ — ． Ｄ Ｂ抗 凝 的 四联 袋 采 集 ２ ０ ０ ｍｌ 血 ， 制 备 Ｐ 前 ， 置 于室 温 １ 。 全 在 Ｃ 静 ｈ １ ５ 富 血 小 板 血 浆 法 制 备 浓 缩 血 小 板 Ｊ 将 采 后 ． １ 的 全 血 先 进 行 轻 离 心 （ ０ ０ ／ ｎ １ ｍｉ ， ｈ １ ０ ｒｍｉ ， ５ ｎ
维普资讯
生虽 输 照 志 ２０ ０２年 ８月第 ｌ 卷 第 ４ ５ 期 Ｃ ｉＪＢｏｄＴａｓ ｓ ｎ Ａ ｇｓ，０２ ｖ １１， ｏ ４ ｈ ｌ ｒ ｆ ｉ ， ｕｕｔ２方 法 制 备 的 浓 缩 血 小 板 表 面 Ｃ ２分 子 的 表 达 Ｄ６
抗 ， 漉 式 细 胞 仪 分 析 血 小 板 表 面 Ｃ ２ 表 达 情 况 。 结 果 （ ． ５±３ ５ ） 的 机 采 血 小 板 表 达 Ｃ ６ ，９ ２ 经 Ｄ６ ６５ ．２ ％ Ｄ ２ （ ．６± ５．０ ％ 的 白膜 回 浆 法 （ Ｃ 法 ） 小 板 表 达 Ｃ ６ ， 达 （ Ｏ ３ ４） Ｂ 血 Ｄ２高 ５ ． ０±２ ． ２ ％ 的 富 血 小 板 血 浆 法 （ ＲＰ 血 小 板 表 达 Ｏ４ ） Ｐ ）
的 全 血 进 行 离 心 （ ０ ０ ／ ｎ １ ｎ ２ ３ ０ ｒｍｉ ， ０ ｍｉ ， ２℃ ） 把 血 ，
红素 标 记 的抗 Ｃ ６ Ｄ ２单 抗 ， 流 式 细 胞 术 观 察 不 同 以 方法 制 备 的浓 缩 血 小 板 表 面 Ｃ ２的 表 达 情 况 ， Ｄ６ 从
而 了解 血 小 板 的活 化 情 况 。
膜 进 行 轻 离 心 （ ０ ０ ｒｍｉ ， ｍｉ ， ２ ） 上 清 挤 入 １０ ／ ｎ ７ ｎ ２ ℃ ， 空袋 ， 制成浓缩血小 板 。 即 １ ７ 机 采 血 小 板 采 用 ＭＣ ． Ｐ单 采 机 收 集 浓 缩 ． Ｓ３
血小板 。
１１ 试剂 ．
藻 红 素 （ Ｅ） 记 抗 Ｃ ２ 抗 ； Ｅ 标 Ｐ 标 Ｄ６ 单 Ｐ
１ 材 料 与 方 法
浆、 白膜 层 分 别 挤 入不 同 的 卫 星袋 中 ， 将 红 细 胞 保 再 存 液 转 移 到 浓 缩 红 细 胞 中 制 成 晶 体 盐 红 细胞 悬 液 ， 然后 将 大 约 ２ ５～３ ｍｌ 浆 挤 入 白 膜 中 。将 白膜 置 ０ 血 于 血 小 板 保 存 装 置 中 振 荡 保 存 １ ５ ２ 然 后 将 白 ． ～ ｈ，
记 的 鼠 ＩＧ１Ｐ ａｍｉｇ ｎ公 司 ） ｇ （ｈｒ ｎｅ
１ ２ 仪 器 Ｊ６ 低 温 离 心 机 （ ｅｋ ｎ 公 司 ） ． －Ｍ Ｂ ｃ ｍａ ；
Ｍ Ｃ ．Ｐ 血 小 板 单 采 机 （ ｅ ｎ ｔ ｓＴｅｈ ｉ ｌ Ｓ３ Ｈａｍｏ ｅｌ ｃ ｎｃ 公 ｃ ａ
司 ） Ｅｐｃ ； ｉ ＸＬ流 式 细 胞 仪 （ ｏ ｌ ｒ 司 ） ｓ Ｃ ｕｔ 公 ｅ 。
／ ｎ ７ｍｉ ，２ ） 将 上 清 血 浆部 分 移 至 卫 星 袋 内 ， ｍｉ ， ｎ ２ ℃ ， 最 后 留 下 大 约 ２ ～ ３ ｍｌ 浆 ， 成 品 置 于 ２ ℃ 静 ５ ０ 血 将 ２ 置 １ ５ ｈ 然 后 用 手 轻 轻将 血 小 板 悬 起 。 ． ～２ ， １ ６ 白膜 回 浆 法 制 备 浓 缩 血 小 板 ． 将 采 后 １ ｈ
浓 缩 血 小 板 在 临 床 治 疗 中发 挥 着 重 要 作 用 。 目 前 其 制 备 方 法 有 ： 血 小 板 血 浆 法 （ Ｒ 法 ） 白膜 富 Ｐ Ｐ ，
回浆 法 （ Ｃ法 ） 机 采 血 小 板 法 。血 小 板 活 化 程 度 Ｂ 及 对血 小 板 的 体 内存 活 有 较 大 影 响 ， 此 笔 者 采 用 藻 为
Ｐ Ｅ标 记 的抗 Ｃ ６ Ｄ ２单 抗 ， 温 避 光 孵 育 ２ ～３ ｍｉ ， 室 ０ ０ ｎ 再 用 Ｐ Ｓ洗 涤 并 稀 释 至 ５ ０ ｄ 然 后 用 流 式 细 胞 仪 Ｂ ０ｔ，
测定表 达 Ｃ ６ Ｄ ２的 血 小 板 的 百 分 数 ， 个 样 品 均 用 每
１ ３ 献 血 者 分 组 将 符 合 献 血 标 准 的献 血 者 ， 机 ． 随
１ ８ 流 式 细 胞 仪 分 析 ［ 将 ３ ０ｔ血 小 板 样 品 用 ． ］ ０ｔ ｌ
１ 多 聚 甲醛 固定 １ ～２ ｎ， 后 用 Ｐ Ｓ洗 涤 １ ％ ０ ０ｍｉ 然 Ｂ ～ ２次 ， ５ 经 过 洗 涤 的 固定 血 小 板 中 加 入 ２ 的 向 ０ｌ ０ｌ
洪 俊 姚 锦 炎 李 小 文 徐 洪 卫 杨 金 龄 王 浦 南
（ ． 锡 市红 十 字 中心血 站 ， 苏无 锡 ２ ４ ２ ； ． 锡 市 第 一人 民 医院 ） １无 江 １０ １２ 无
摘 要 ： 的 了 解 不 同 制 备 方 法 对 浓 缩 血 小 板 表 面 Ｃ ６ 目 Ｄ ２表 达 的 影 响 。 方 法 采 用 藻 红 素 标 记 的抗 Ｃ ６ Ｄ ２单
分 为３ ， 组 每组 ｌ ２名 ， 别 按 机 采 法 、 ＲＰ法 、 Ｃ法 分 Ｐ Ｂ 制备浓缩 血小板 。
１ ４ 全 血 采 集 用 ＡＣ — ． Ｄ Ｂ抗 凝 的 四联 袋 采 集 ２ ０ ０ ｍｌ 血 ， 制 备 Ｐ 前 ， 置 于室 温 １ 。 全 在 Ｃ 静 ｈ １ ５ 富 血 小 板 血 浆 法 制 备 浓 缩 血 小 板 Ｊ 将 采 后 ． １ 的 全 血 先 进 行 轻 离 心 （ ０ ０ ／ ｎ １ ｍｉ ， ｈ １ ０ ｒｍｉ ， ５ ｎ
维普资讯
生虽 输 照 志 ２０ ０２年 ８月第 ｌ 卷 第 ４ ５ 期 Ｃ ｉＪＢｏｄＴａｓ ｓ ｎ Ａ ｇｓ，０２ ｖ １１， ｏ ４ ｈ ｌ ｒ ｆ ｉ ， ｕｕｔ２方 法 制 备 的 浓 缩 血 小 板 表 面 Ｃ ２分 子 的 表 达 Ｄ６
抗 ， 漉 式 细 胞 仪 分 析 血 小 板 表 面 Ｃ ２ 表 达 情 况 。 结 果 （ ． ５±３ ５ ） 的 机 采 血 小 板 表 达 Ｃ ６ ，９ ２ 经 Ｄ６ ６５ ．２ ％ Ｄ ２ （ ．６± ５．０ ％ 的 白膜 回 浆 法 （ Ｃ 法 ） 小 板 表 达 Ｃ ６ ， 达 （ Ｏ ３ ４） Ｂ 血 Ｄ２高 ５ ． ０±２ ． ２ ％ 的 富 血 小 板 血 浆 法 （ ＲＰ 血 小 板 表 达 Ｏ４ ） Ｐ ）
的 全 血 进 行 离 心 （ ０ ０ ／ ｎ １ ｎ ２ ３ ０ ｒｍｉ ， ０ ｍｉ ， ２℃ ） 把 血 ，
红素 标 记 的抗 Ｃ ６ Ｄ ２单 抗 ， 流 式 细 胞 术 观 察 不 同 以 方法 制 备 的浓 缩 血 小 板 表 面 Ｃ ２的 表 达 情 况 ， Ｄ６ 从
而 了解 血 小 板 的活 化 情 况 。