广西口岸东南亚旅行人群腹泻病的溯源性分析

口岸卫生控制第24卷第2期旅行者腹泻是旅行中最常见的疾病，约占旅行者各类疾病的一半以上，已成为全球性公共卫生问题，并严重影响旅行者身心健康和旅游业的发展。

我国在对外改革开放以来，人民的生活水平得到不断改善和提高，特别是国家制定了“五一”、”十一”等长假策略后，旅游市场得到了启动，出门旅行尤其具有浓厚异域风情的东南亚国家旅行成为人们的热点。

因此，了解我国东南亚旅行者感染诺如病毒的情况，并进行核酸序列的分析，分析其分子流行病学情况，科学评估其发生风险、流行趋势、潜在的风险区域，是指导东南亚国际旅行者预防和处理旅行腹泻的有效手段。

广西口岸东南亚旅行人群腹泻病的溯源性分析张凤芬樊幼珍黎湘娟广西国际旅行卫生保健中心（广西，南宁，530021）摘要目的了解广西口岸东南亚旅行人群腹泻病的病原谱及分子流行特征。

方法收集2016年8月至2017年10月广西各口岸送检的80名腹泻病患者肛拭子样本，使用多重PCR方法进行肠道常见病原体检测，并对诺如病毒阳性样本进行扩增测序。

结果本研究中的旅行者腹泻的总阳性率为40%（32/80），其中诺如病毒是最主要的病原12例，其次为肠道腺病毒9例，轮状病毒8例，星状病毒3例。

其中诺如病毒主要以GⅡ.4型为主（10例），其次为GI.6型1例，GⅡ、GI混合感染1例，GⅡ.4与2012年澳大利亚Sydney NSW0514株的同源性达到98%。

结论广西口岸东南亚旅行人群的腹泻病原体以诺如病毒为主，GⅡ.4型是广西口岸东南亚国际旅行者主要的流行毒株，同时存在GⅡ、GI病毒混合感染的情况。

关键词旅行者腹泻溯源性东南亚诺如病毒中图分类号R文献标识码B doi10．3969／j．issn．1008-5777．2019．02．016Analysis on the Traceability of Diarrheal Diseases in Southeast Asian Travelers at Guangxi PortZhang Fengfen Fan Youzhen Li XiangjuanGuangxi International Travel Healthcare Center（Nanning，Guangxi，530021）Abstract Objective To understand the pathogen spectrum and molecular epidemic characteristics of diarrheal disease in southeast Asian travelers at Guangxi port.Methods From August2016to October2017，80samples of anal swabs from patients with diarrheal diseases sent to various ports in Guangxi were collected，and multiple PCR methods were used to detect common intestinal pathogens.And norovirus positive samples were amplified and sequenced.Results The total positive detection rate of traveler's diarrhea in this study was40%（32/80），including12cases of norovirus，the most important pathogen，followed by9cases of intestinal adenovirus，8cases of rotavirus，and3cases of astrovirus.Among them，such as virus mainly G iv（10cases），followed by GI.6in1 case，GⅡ，GI mixed infection in1case，GⅡ.4and2012Australian Sydney NSW0514strain homology of98%. Conclusion Norovirus was that of the main pethogens of traveler’s diarrhea in people travelled to Southeast Asian.And theGⅡ.4was that of the predominant epidemic genotype at Guangxi port，at the same time there is GⅡand GI mixed infection.Key words Norovirus Traveler’s diarrhea Genotype analysis Southeast Asia传染病监测50--第24卷第2期图1诺如病毒毒株与参考毒株的进化树分析1材料与方法1.1样本收集对经广西各口岸入境人员进行医学排查，收集流行病学调查表并采集腹泻病患者呕吐物、粪便或肛拭子样本，于-80℃保存。

1.2核酸提取采用美国PerkinElme 公司的全自动核酸提取仪，并按照试剂盒说明书提取核酸。

1.3病原体的检测采用多重PCR 的方法进行病原体检测，实验步骤按试剂盒说明书进行，检测的病原体包括诺如病毒、轮状病毒、肠腺病毒、O157：H7大肠埃希菌、沙门氏菌、志贺氏菌、霍乱弧菌、金黄色葡萄球菌等常见肠道病原体。

1.4基因扩增使用Takara 公司体外逆转试剂盒对阳性样本进行逆转录并进行扩增，实验步骤按试剂盒说明书进行。

1.5核酸序列测定及分析将PCR 产物纯化后使用ABI3000一代测序仪进行测序。

采用美国NCBI 提供的在线BEAST 平台进行序列比对，使用MEGA5.0软件建立系统进化树，以确定诺如病毒的分析，同时碱性核苷酸序列的同源性分析。

参考株序列来源于NCBI 数据库。

2结果2.1一般情况自2016年8月至2017年10月共监测到80例腹泻病患者，其中男性为55%（44/80），女性为45%（36/80），主要是去往柬埔寨、越南、泰国等东南亚国家。

2.2病原体检测情况80例的标本检测结果为阳性共32例，其中诺如病毒阳性12例、轮状病毒阳性8例，肠腺病毒9例，星状病毒3例（见表1）。

3讨论食用被病原菌污染的食品和水是引起旅行者腹泻的最重要途径。

而旅行地的基本卫生设施、安全食品和饮水的供给情况，以及旅行者自身文化卫生素养和自身健康状况，以上因素对旅行者是否感染腹泻起着关键性作用，它们共同构成了引起旅行表1出入境腹泻病人的检测结果病原体种类阳性检测数（例）阳性检出率（%）诺如病毒1215轮状病毒810肠道腺病毒911.25星状病毒33.752.3诺如病毒的分型及序列同源性分析诺如病毒GI 型和GII 型阳性共12例，均检自于东南亚旅行患者，其中GI.6型1例，GII.4型10例，GI 型和GII 型混合感染1例，大部分有食用海鲜史。

10例诺如病毒GII.4型中来自柬埔寨3例，来自越南6例，来自泰国3例。

G Ⅱ.4与2012年澳大利亚Sydney NSW0514株的具有较高的同源性，其进化簇的可靠性达到98%（见图1）。

张凤芬，等.广西口岸东南亚旅行人群腹泻病的溯源性分析51--口岸卫生控制第24卷第2期者腹泻的主要危险因素，因此旅行者腹泻发生的危险度与目的地的感染性腹泻的发生率有很大的关系，同时旅行者腹泻的病原谱与当地腹泻病的病原谱构成是紧密相关的。

本次研究的腹泻病人中，半数以上有食用生冷食品及海鲜的病史。

在诺如病毒GI．GVI的6个基因群中，本研究仅检出诺如病毒I型和II型两个主要引起人类急性胃肠炎的基因群，且GII群较GI群阳性检出率高。

与国内和全球的研究报告一致［1-2］。

研究发现，泰国诺如病毒序列以诺如病毒GI基因型和诺如病毒GII.4型为主［3］。

Tamura等对越南芽庄市2005年12月-2006年6月病毒性胃肠炎患儿进行NoV和轮状病毒检测，其中GⅡ.12（50％）和GⅡ.4（33.3％）两种基因型最常见［4］。

本研究中发现GⅡ.4型是广西口岸东南亚国际旅行者主要的流行毒株，同时存在GⅡ、GI病毒混合感染的情况。

GⅡ.4与2012年澳大利亚Sydney NSW0514株具有较高的同源性，其进化簇的可靠性达到98%。

本研究指导东南亚国际旅行者预防和处理旅行腹泻提供理论依据，填补我国东南亚旅行人群腹泻病的分子病原学研究的空白，可有效地降低国际旅行者腹泻病的感染率。

本研究可以广泛地运用在全国各口岸，可监测来自不同国家、不同地区的国际旅行者的腹泻病的情况，了解到该人群的腹泻病病原体的类型和分布，以及其分子流行病学，进一步充实和完善国际旅行健康的病原体数据库，有效地指导国际旅行卫生保健工作。

当前研究主要的问题是本研究的监测范围局限于广西口岸，监测数据稍显单薄，覆盖面不够广，可能会存在样本选择的偏倚，今后应同其他省份的口岸联合研究，扩大监测面及样本量。

参考文献［1］Mathapati BS，Mishra N，Rajukumar K，et al.Entry of bovine viral diarrhea virus into ovine cells occurs through clathrin-dependent endocytosis and low pH-dependent fusion［J］.In Vitro Cell Dev Biol Anim，2010，46（5）：403-407.［2］纪蕾，吴晓芳，等.湖州市非细菌性急性胃肠炎爆发中诺如病毒的分析生物学特点初步研究［J］.病毒学报，2011，27（5）：469-474.［3］Grant S.Hansman，Kazuhiko Katayama，et al.Genetic Diversity of Norovirus and Sapovirus in Hospitalized In-fants with Sporadic Cases of Acute Gastroenteritis in Chi-ang Mai，Thailand［J］.Clin Microbiol，2004，42（3）：1305-1307.［4］刘远兴，郑志远.病毒性胃肠炎患者中诺如病毒感染情况的检测分析［J］．中外医学研究，2014，12（11）：53-55收稿日期2019-01-07欢迎订阅《口岸卫生控制》杂志！!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 52--。