鳖甲煎丸对肝癌荷瘤小鼠肿瘤组织生长及转移的影响

［关键词］ 鳖甲煎丸； 血管内皮生长因子； Flt-1； 肝癌 ［中图分类号］ R285． 5 ［文献标识码］ B ［文章编号］ 1005-9903（ 2012） 14-0230-03
医圣张仲景所 创 的 鳖 甲 煎 丸 具 有 寒 热 并 用、攻 补 兼 施 、行 气 化 瘀 、软 坚 散 结 之 功 效 。 原 方 用 治 疟 病 日久 而 成 的“疟 母”、“癥 瘕 ”病 症。 该 方 自 汉 代 以 来 ，除 用 于 治 疗 因 疟 疾 等 各 种 原 因 引 起 的 肝 脾 大 、肝 硬化等症外，也广 泛 应 用 于 肝 纤 维 化、肝 癌、胃 癌 及 卵巢囊肿等疾病。近年来肝癌与血管相关性研究已 成为热点课题。许 多 研 究 表 明，肿 瘤 的 生 长 的 转 移 依赖于新的血管生 成，肿 瘤 的 血 管 生 成 特 性 与 其 侵 袭性关系密 切。 本 实 验 采 用 H22 小 鼠 肝 癌 细 胞 株 皮下移植法建立荷 瘤 小 鼠 模 型，观 察 不 同 剂 量 鳖 甲 煎丸混悬液 对 H22 肝 癌 肿 瘤 组 织 血 管 内 皮 细 胞 生 长因子（ VEGF） 及其 受 体 Flt-1 表 达 的 影 响，观 察 鳖 甲煎丸对肝癌的侵 袭 和 转 移 的 影 响，探 讨 其 抗 肝 癌 的 可 能 机 制 ，为 其 临 床 推 广 和 应 用 提 供 科 学 依 据 。 1 材料 1. 1 药物 鳖甲煎丸，武汉中联药业集团股份有限
（ 1. 齐齐哈尔医学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006； 2. 黑龙江中医药大学基础医学院，黑龙江 齐齐哈尔 150040）
［摘要］ 目的： 观察中药鳖甲煎丸对肝癌荷瘤小鼠肿 瘤 组 织 生 长 及 转 移 的 影 响 。 方 法： 小 鼠 肝 癌 荷 瘤 小 鼠 分 为 模 型 组、 环磷酰胺组（ 0. 02 g·kg － 1 ） 和鳖甲煎丸高、中、低剂量组（ 3. 699，1. 233，0. 411 g·kg － 1 ） ，连续 ig 15 d 后断颈椎 处 死 小 鼠，钝 性 分 离肿瘤组织，多聚甲醛固定，应用免疫组化法检测血管 内 皮 细 胞 生 长 因 子 （ VEGF） 及 其 受 体 Flt-1 的 表 达。 采 用 MIAS 医 学 图 像分析系 统 计 算 VEGF，Flt-1 平 均 阳 性 面 积 百 分 率 及 计 算 每 100 个 肿 瘤 细 胞 中 的 阳 性 细 胞 数 。 结 果： VEGF 阳 性 面 积 鳖 甲 煎 高、中、低剂量为（ 2. 28 ± 0. 53） % ，（ 2. 76 ± 0. 56） % ，（ 3. 26 ± 0. 46） % ，模型组为（ 6. 20 ± 0. 78） % ，VEGF 阳性细胞数鳖 甲 煎 高、 中、低剂量为（ 29. 12 ± 1. 53 ） ，（ 30. 95 ± 1. 02 ） ，（ 32. 64 ± 2. 08 ） 个，Flt-1 阳 性 面 积 鳖 甲 煎 高、中、低 剂 量 为 （ 1. 35 ± 0. 78 ） % ， （ 1. 96 ± 0. 36） % ，（ 2. 78 ± 0. 73） % ，模型组为（ 5. 20 ± 0. 48） % ，Flt-1 阳 性 细 胞 数 鳖 甲 煎 高、中、低 为 （ 19. 45 ± 1. 03 ） ，（ 21. 85 ± 1. 82） ，（ 22. 78 ± 1. 18） 个，模型 组 为 （ 27. 38 ± 1. 23 ） 个，鳖 甲 煎 丸 高、中、低 剂 量 组 VEGF，Flt-1 染 色 强 度 较 模 型 组 明 显 下 降 （ P ＜ 0. 01） 。结论： 鳖甲煎丸可能通过抑制肿瘤组织中 VEGF 的高表达及下调其受体 Flt-1 的表达抑制肝癌的侵袭和转移。
［收稿日期］ 20120328 （ 266 ） ［基金项目］ 黑龙江省教育厅 2012 年 度 科 学 技 术 研 究 （ 面 上 ）
项目（ 12521648） ［第一作者］ 罗庆东，主任医师，从事经方治疗疑难杂病的临 床
与基础研究，Tel： 0452 -2663855 ，E-mail： 326487704 @ qq． com ［通讯作者］ * 姜德友，教 授，博 士，从 事 经 方 治 疗 疑 难 杂 病 的 临 床 与 基 础 研 究，Tel： 0451 -82193627 ，E-mail： jiangdeyou@ hljucm． net
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公司，批号 020602； 环磷 酰 胺 片，天 津 金 世 制 药 有 限 公司，批号 10071121。 1. 2 动物及瘤株 昆明 种 小 鼠，雄 性，18 ～ 22 g，大 连医科 大 学 实 验 动 物 中 心，合 格 证 号 SCXK （ 辽 ） 2008-0002，质量 合 格 证 号 0001120。 H22 小 鼠 肝 癌 细 胞 株 ，购 于 北 京 北 纳 创 联 生 物 技 术 研 究 院 。 1. 3 试剂 VEGF 和 Flt-1 免 疫 组 化 SABC 试 剂 盒 均 为 武 汉 博 士 德 生 物 工 程 有 限 公 司 产 品，批 号 06L16BJ。 1. 4 仪器 IMT-2 倒 置 显 微 镜 （ Olympus 公 司 ） ，超 净工作台（ 苏州 安 泰 空 气 技 术 有 限 公 司 ） ，CO2 培 养 箱（ Thermo Electron Corporation） ，Motic B5 显微镜摄 像系统（ 台湾麦克奥迪实业公司） 。 2 方法 2. 1 鳖甲 煎 丸 药 液 的 制 备［1］ 根 据 人 用 药 量，结 合转换公式计算小鼠的用药量。含鳖甲煎丸制剂量 1. 233 g·kg － 1 （ 等 效 剂 量 ） 作 为 中 剂 量 组，含 鳖 甲 煎 丸制 剂 量 3. 699，0. 411 g·kg － 1 分 别 作 为 鳖 甲 煎 丸 高、低剂量组。用超 纯 水 分 别 配 制 成 不 同 质 量 浓 度 的悬浊液 （ 0. 12，0. 37，0. 04 g·mL － 1 ） ，置 于 4 ℃ 冰 箱 ，用 时 震 荡 混 匀 。 2. 2 分 组 将 50 只 小 鼠 称 重，按 照 体 重 进 行 蛇 形 分组，分 成 5 组，分 别 为： 模 型 组、阳 性 药 环 磷 酰 胺 组、鳖甲煎丸高、中、低剂量组，每组 10 只。 2. 3 肿 瘤 造模 H22 小 鼠 肝癌 细 胞 接种2 年 7 月
中国实验方剂学杂志 Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 14 Jul． ，2012
鳖甲煎丸对肝癌荷瘤小鼠肿瘤组织生长及转移的影响
罗庆东1，2 ，王月飞1 ，赵红晔1 ，王滨1 ，姜德友2*