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IL-1β/IL-2/TNF-α/IL-6/IL-8检测试剂盒（流式荧光法）说明书
【产品名称】
通用名称：IL-1β/IL-2/TNF-α/IL-6/IL-8检测试剂盒（流式荧光法）
【包装规格】100人份/盒、200人份/盒、400人份/盒
【预期用途】
本试剂盒通过检测人体生物标本中的IL-1β、IL-2、TNF-α、IL-6和IL-8的表达，为医师提供诊断的辅助信息。

【检验原理】
本试剂盒是基于微球的免疫学分析方法。

捕获微球携带不同量的别藻蓝蛋白（APC）（Ex/Em: 635；660/20BP）呈现不同的荧光强度，微球表面分别偶联对应指标的捕获抗体，可特异性捕获待测样本或校准品中的目标蛋白（分析物）。

待测样本或校准品经反应后，形成捕获微球-目标蛋白-检测抗体-链霉亲和素标记的藻红蛋白(SA-PE)复合物，复合物通过流式细胞仪检测其在PE（Ex：488/532；585/42BP）通道的荧光信号强度，从而得到样本中目标蛋白的含量。

【储存条件及失效期】
1.2℃～8℃避光条件保存运输，有效期12个月。

2.开瓶稳定性：复溶后的基质溶液、校准品溶液应按每次使用量分装，2℃～8℃可稳定保存一周，-20℃保存一个月，避免反复冻融。

其他试剂2℃～8℃避光可稳定保存一个月。

【适用仪器】
Beckman DxFlex、Beckman Navios、Cytomics FC500、BD FACSCalibur、BD FACSCanto、BD FACSCanto II、ACEA NovoCyte、BriCyte E6、BeamCyte-1024/1026等。

【需自行准备的材料及设备】
纯水、锡箔纸、移液器及配套枪头、可调节水平摇床、EP管、流式管、超声仪、涡旋振荡器、流式细胞仪，台式离心机等。

【样本要求】
血清：室温血液自然凝固30分钟后，离心20分钟（1000×g），仔细收集上清。

血浆：EDTA或肝素钠抗凝收集血浆样本，离心20分钟（1000×g），仔细收集上清。

•在室温(15℃至30℃)下，样本可保存8小时；在2℃至8℃下，样本可保存24小时。

•若24小时内不能检测，应将样本分装保存于-20℃不超过一个月或-70℃不超过半年，样本仅可解冻一次。

•待检测物不得含悬浮纤维蛋白或聚集物、絮状物、血块凝集物等。

•避免对脂血/溶血样本进行测定。

•每个实验室需自行判断其所使用的采血试管和血清分离产品的适用性。

由于生产商的不同以及批次的不同，这些产品可能存在差异。

【检验方法】
1.捕获微球混合液准备：将预混微球超声1分钟，涡旋30秒。

若没有超声仪，涡旋2分钟使微球充分混匀。

2.洗涤液准备：将浓缩洗涤液（20×）放置室温，使其中盐分充分溶解，用纯水按需现配现用。

如5mL浓缩洗涤液（20×）+95mL纯水将其配成洗涤工作液。

3.基质准备：用5mL稀释液溶解基质冻干粉，静置15分钟后涡旋使其充分混匀。

4.校准品准备：
（1）用250μL稀释液溶解校准品，颠倒多次使其充分混匀，静置10分钟，此校准品溶液为最高浓度C7。

（2）取适量校准品溶液移入EP管中，标记为C7。

再取6个EP管，分别标记为C6/C5/C4/C3/C2/C1，每个管中加75μL稀释液，从C7中取出25μL高浓度校准品至C6管中进行4倍倍比稀释，以同样方式稀释至C5/C4/C3/C2/C1管中，以稀释液作为C0。

（3）复溶后剩余校准品可按每次使用量分装于低吸附EP管中，于2℃~8℃可稳定保存一周；-20℃可稳定保存一个月，避免反复冻融。

5.样本准备：血清或血浆样本使用前用试剂盒内稀释液稀释两倍，如50μL样本+50μL稀释液混匀后进行后续操作。

若需要更大稀释倍数时，需用基质溶液进行下一步稀释，以确保结果准确。

6.实验流程：
（1）试剂盒中组分恢复至室温。

（2）根据实验需求，按下表将相应试剂加入至相应管中
样品/25μL
总体积100μL
（3）将实验管放置在振荡器上500rpm震荡，室温避光孵育2小时。

（4）加入25μL SA-PE荧光素至各管，500rpm震荡，室温避光孵育30分钟。

（5）加入1mL洗涤工作液至各管，1200×g离心5分钟，弃上清。

可选择重复洗涤一次以减少背景。

（6）加入200μL洗涤工作液至各管，在振荡器上震荡1分钟，上机检测。

【参考区间】
本试剂盒对221例健康人群的血清或血浆样本进行检测，根据非参数参考区间分析，得到各检测指标95%上限区间如下：
以上范围仅供参考，每个实验室需确立其实验室的参考区间，以确保能正确地反映某一特定人群的情况。

【检验结果的解释】
待测样本IL-1β、IL-2、TNF-α、IL-6和IL-8的测定在2.44pg/mL~10000pg/mL，测定结果有效；若检测结果大于10000pg/mL，应用实验缓冲液将样本稀释后重新检测；若检测结果＜2.44pg/mL，低于检测下线，结果仅供参考。

建议：负责数据分析和出具报告的实验人员需经过技术培训且有一定临床经验，二者结合有助于对实验数据做出合理的解释。

【检验方法的局限性】
1.本试剂盒的检测结果仅供临床参考，对患者的临床管理应结合其症状、体征、病史、年龄、性别及其他实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。

2.本试剂盒的检测结果不得作为患者病情评价的唯一标准，需结合患者临床表现及其他实验室检测对病情进行综合分析。

3.不合理的样本采集、转运、储存、处理以及仪器设置均有可能导致错误的检测结果。

【产品性能指标】
1.回收率：用已知浓度样品添加入血清样本中，回收率在50%~130%以内。

2.最低检测限：本试剂盒中IL-1β、IL-2、TNF-α、IL-6和IL-8的最低检测限为2.44pg/mL。

3.线性范围及线性相关系数：本试剂盒中IL-1β、IL-2、TNF-α、IL-6和IL-8在[2.44，10000]pg/mL的线性范围内，线性相关系数R2≥0.98。

4.批内重复性：由同一操作员使用同一批次试剂盒，按相同方法检测100-1000pg/mL范围内两个浓度样品，批内变异系数（CV值）≤15%。

5.批间重复性：3个批次试剂盒检测100-1000pg/mL范围内两个浓度样品，试剂盒之间的批间变异系数（CV值）≤15%。

【注意事项】
1.本品应由专业人员使用，使用前应仔细阅读说明书，并做好个人卫生防护。

2.试剂储存时，避免高温、低温环境及日光照射；不要使用超过有效期的试剂。

3.不要混合或替换来自不同试剂盒或批次的试剂。

4.所有血液成分和生物材料都应当作潜在危险物品并按国家或其他相关规定进行处理。

5.在检测过程中，应使用锡箔纸进行避光孵育。

6.使用前请确保试剂充分混匀。

7.根据说明书步骤操作时，血清血浆样本被稀释2倍，在数据处理时需设置稀释倍数。

8.流式细胞仪未经正确校准、荧光未进行合理补偿、检测区域未精确定位，则可能产生错误的检测结果，请参照仪器操作规程，确保仪器处于最佳检测状态。

9.本试剂盒不能冷冻保存。

【参考文献】
1.《体外诊断试剂注册管理办法》国家食品药品监督管理总局，2014第5号令。

2.《医疗器械说明书和标签管理规定》国家食品药品监督管理总局，2014第6号令。

3.《体外诊断试剂说明书编写指导原则》国家食品药品监督管理总局，2014第17号令。

【产品标签符号说明】
产品标签符号说明产品标签符号说明
产品编号产品批号
生产日期储存条件2℃到8℃
有效期至体外诊断试剂
ExFlow®产品商标避光
公司标志产品品牌标志
【基本信息】
备案人/生产企业名称：深圳市达科为生物工程有限公司
住所：深圳市坪山区坑梓街道金辉路14号深圳市生物医药创新产业园区1号楼702、703联系方式：*************
售后服务单位名称：深圳市达科为生物工程有限公司
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生产地址：深圳市坪山区坑梓街道金辉路14号深圳市生物医药创新产业园区1号楼702、703
【医疗器械产品备案号/产品技术要求编号】粤深械备20200972号
【医疗器械生产备案凭证号】粤深食药监械生产备20150032号
【产品说明书批准日期及修改日期】2021/09/09。