课件3：2.1 微生物的实验室培养
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真菌： 酵母菌、霉菌、食用菌
非细胞类： 病毒、类病毒、朊病毒
微生物的共同特点： 个体微小、结构简单
1.细菌的形态
2.细菌的繁殖 细菌主要是以二分裂的方式进行增殖（如图）
3.病毒的营养方式: 寄生
4.细菌的菌落 （1）定义：
单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时， 会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子 细胞群体，叫做菌落。 （2）特征： 大小、形状、光泽度、颜色、硬度、 透明度等。 （3）功能： 每种细菌在一定条件下所形成的菌落， 可以作为菌种鉴定的重要依据。
专题2 微生物的培养与应用 课题1 微生物的实验室培养
一.微生物基础知识
(一）微生物的类群
微原生核物类：: 指细形菌体、微支小原（体小、于放0.线1m菌m、）蓝，藻结构简单， 微生在显适微宜镜真环才核境能类中看能清迅楚原速的生生生生长物物繁。：殖显草大，微履约易藻虫有变类、10异、变万，原形种通生虫。常生等要物）借（助如： 物
1.微生物的碳源 （1）概念：凡是能为微生物提供所需碳元素的营养
物质。
（2）来源： ①无机碳源：CO2；NaHCO3等 ②有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、 石油等
（3）作用： ①构成细胞物质和一些代谢产物 ②异养微生物的能源
2.微生物的氮源
（1）概念：凡是能够为微生物提供N元素的营养物质。 （2）来源：①无机氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。
（2）灭菌的定义：
以化学试剂或物理方法消灭所有微生物，包括所 有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完 全无菌之过程。 灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是 最重要的技术。
3.常用的消毒与灭菌的方法
（1）消毒的方法： ①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。 ②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或 80℃下煮 15min。 ③化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进行 皮肤消毒；氯气消毒水源。 ④紫外线消毒。
（1）临时保藏： 接种到固体斜面培养基， 菌落长成后置于4℃冰箱 保存。 （2）长期保存：
甘油冷冻管藏法
液体培养基：
表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长
半固体培养基：
固体培养基：菌落
无动力
有动力(弥散)
谢谢观看！
http://www.91taoke.com
培养、分离出特 定微生物
鉴别培养基
在培养基中加入某种指示剂 或化学药品,用以鉴别不同 种类的微生物
鉴别不同种类微 生物
（四）无菌技术
1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止 杂菌污染的方法。 2.消毒与灭菌的概念及两者的区别
（1）消毒定义： 利用化学或物理方法，杀死部份微生物的过程。
（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基
1.计ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 2.称量 3.溶化 4.灭菌: 将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、 温度为121℃，灭菌15～30min。
5.倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒
平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。
倒 平 板 操 作
(二）纯化大肠杆菌
②有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨 基酸等 （3）作用：主要用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢 产物。
3.生长因子 （1）概念：微生物生长不可缺少的微量有机物。 （2）作用：酶和核酸的组成成分。 （3）常见的生长因子：
维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。
（三）培养基
培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供 微生物生长繁殖使用的营养基质。 1.培养基的类型和用途 2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方(参 考教材附录内容)
3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、氮源、 无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对 pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必 需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨 基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压 等的要求。
培养基的种类
划分标准 物理性质 化学成分
用途
培养基种类
几 种 菌 落 及 其 形 态
几 种 菌 落 及 其 形 态
5.病毒的结构
由核酸和蛋白质构成。
病毒的结构
6.病毒的繁殖
吸附
注入
合成
释放
组装
病毒的增殖一般可分五个阶段，即：
吸附→注入核酸→合成核酸和蛋白质→组装→释放
（二）微生物需要的营养物质及功能
微生物需要的五大类营养要素物质是： 1.碳源 2.氮源 3.生长因子 4.无机盐 5.水
特点
用途
液体培养基
不加凝固剂
工业生产
半固体培养基 固体培养基
加凝固剂，如琼脂
观察微生物的运动、 分类鉴定
微生物分离、鉴定、 活菌计数、保藏菌
种
天然培养基 合成培养基
含化学成分不明确的天然物 质
培养基成分明确
工业生产 分类、鉴定
选择培养基
在培养基中加入某种化学物 质,以抑制不需要的微生物 的生长,促进所需要的微生 物的生长
（2）灭菌的方法：
①灼烧灭菌 ②干热灭菌：160-170 ℃下加 热1-2h。 ③高压蒸气灭菌：100kPa、 121 ℃下维持15-30min.
微生物实验室培养的基本操作程序
1、器具的灭菌 2、培养基的配制 3、培养基的灭菌 4、倒平板 5、微生物接种 6、恒温箱中培养 7、菌种的保存
二.实验操作(以培养大肠杆菌为例)
微生物的接种的常用接种方法有：平板划线法 和稀释涂布平板法。 1.平板划线的操作方法
平板划线的操作
一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌 落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成 规则的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个 条状的菌落。
2.稀释涂布平板的操作方法
3.微生物的恒温培养 4.菌种的保存
非细胞类： 病毒、类病毒、朊病毒
微生物的共同特点： 个体微小、结构简单
1.细菌的形态
2.细菌的繁殖 细菌主要是以二分裂的方式进行增殖（如图）
3.病毒的营养方式: 寄生
4.细菌的菌落 （1）定义：
单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时， 会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子 细胞群体，叫做菌落。 （2）特征： 大小、形状、光泽度、颜色、硬度、 透明度等。 （3）功能： 每种细菌在一定条件下所形成的菌落， 可以作为菌种鉴定的重要依据。
专题2 微生物的培养与应用 课题1 微生物的实验室培养
一.微生物基础知识
(一）微生物的类群
微原生核物类：: 指细形菌体、微支小原（体小、于放0.线1m菌m、）蓝，藻结构简单， 微生在显适微宜镜真环才核境能类中看能清迅楚原速的生生生生长物物繁。：殖显草大，微履约易藻虫有变类、10异、变万，原形种通生虫。常生等要物）借（助如： 物
1.微生物的碳源 （1）概念：凡是能为微生物提供所需碳元素的营养
物质。
（2）来源： ①无机碳源：CO2；NaHCO3等 ②有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、 石油等
（3）作用： ①构成细胞物质和一些代谢产物 ②异养微生物的能源
2.微生物的氮源
（1）概念：凡是能够为微生物提供N元素的营养物质。 （2）来源：①无机氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。
（2）灭菌的定义：
以化学试剂或物理方法消灭所有微生物，包括所 有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完 全无菌之过程。 灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是 最重要的技术。
3.常用的消毒与灭菌的方法
（1）消毒的方法： ①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。 ②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或 80℃下煮 15min。 ③化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进行 皮肤消毒；氯气消毒水源。 ④紫外线消毒。
（1）临时保藏： 接种到固体斜面培养基， 菌落长成后置于4℃冰箱 保存。 （2）长期保存：
甘油冷冻管藏法
液体培养基：
表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长
半固体培养基：
固体培养基：菌落
无动力
有动力(弥散)
谢谢观看！
http://www.91taoke.com
培养、分离出特 定微生物
鉴别培养基
在培养基中加入某种指示剂 或化学药品,用以鉴别不同 种类的微生物
鉴别不同种类微 生物
（四）无菌技术
1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止 杂菌污染的方法。 2.消毒与灭菌的概念及两者的区别
（1）消毒定义： 利用化学或物理方法，杀死部份微生物的过程。
（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基
1.计ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 2.称量 3.溶化 4.灭菌: 将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、 温度为121℃，灭菌15～30min。
5.倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒
平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。
倒 平 板 操 作
(二）纯化大肠杆菌
②有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨 基酸等 （3）作用：主要用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢 产物。
3.生长因子 （1）概念：微生物生长不可缺少的微量有机物。 （2）作用：酶和核酸的组成成分。 （3）常见的生长因子：
维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。
（三）培养基
培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供 微生物生长繁殖使用的营养基质。 1.培养基的类型和用途 2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方(参 考教材附录内容)
3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、氮源、 无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对 pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必 需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨 基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压 等的要求。
培养基的种类
划分标准 物理性质 化学成分
用途
培养基种类
几 种 菌 落 及 其 形 态
几 种 菌 落 及 其 形 态
5.病毒的结构
由核酸和蛋白质构成。
病毒的结构
6.病毒的繁殖
吸附
注入
合成
释放
组装
病毒的增殖一般可分五个阶段，即：
吸附→注入核酸→合成核酸和蛋白质→组装→释放
（二）微生物需要的营养物质及功能
微生物需要的五大类营养要素物质是： 1.碳源 2.氮源 3.生长因子 4.无机盐 5.水
特点
用途
液体培养基
不加凝固剂
工业生产
半固体培养基 固体培养基
加凝固剂，如琼脂
观察微生物的运动、 分类鉴定
微生物分离、鉴定、 活菌计数、保藏菌
种
天然培养基 合成培养基
含化学成分不明确的天然物 质
培养基成分明确
工业生产 分类、鉴定
选择培养基
在培养基中加入某种化学物 质,以抑制不需要的微生物 的生长,促进所需要的微生 物的生长
（2）灭菌的方法：
①灼烧灭菌 ②干热灭菌：160-170 ℃下加 热1-2h。 ③高压蒸气灭菌：100kPa、 121 ℃下维持15-30min.
微生物实验室培养的基本操作程序
1、器具的灭菌 2、培养基的配制 3、培养基的灭菌 4、倒平板 5、微生物接种 6、恒温箱中培养 7、菌种的保存
二.实验操作(以培养大肠杆菌为例)
微生物的接种的常用接种方法有：平板划线法 和稀释涂布平板法。 1.平板划线的操作方法
平板划线的操作
一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌 落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成 规则的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个 条状的菌落。
2.稀释涂布平板的操作方法
3.微生物的恒温培养 4.菌种的保存