临床微生物学检验：链球菌属
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26
肺炎链球菌脐窝状菌落（培养48h后）
27
肺炎链球菌粘液样菌落 28
3.生化反应
• 分解葡萄糖，产酸不产气。 • 一般不分解菊糖，不被胆汁溶解（鉴别
甲型溶血性链球菌与肺炎链球菌）。 • 触酶（-），与葡萄球菌不同。
•肺炎链球菌： 分解葡萄糖、乳糖和菊糖，胆汁可溶菌， Optochin敏感，触酶（-）
45
小结
• 链球菌属细菌种类多，其中某些菌种为毒力强的 致病菌。分类较为复杂，临床分离株仍以传统的 血平板上溶血现象、菌落特点和Lancefield抗原 血清分型，结合生化反应进行鉴定。
• 肺炎链球菌：革兰阳性双球菌，有荚膜，脐窝样 菌落、OP（+）、胆汁溶菌（+）
• A群链球菌：镜下特点、菌落特点、杆菌肽、血清 试验
42
链球菌微生物检验程序
涂片染色 G+球菌，触酶（-）
43
五、药敏试验药物选择
β溶血链球菌 肺炎链球菌 草绿色链球菌
药敏时药物选择不同
首选青霉素和氨苄西林
44
预防分娩妇女B群链球菌感染：
①推荐使用青霉素和氨苄西林。 ②低危险性青霉素过敏者，推荐头孢唑林。 ③高危险性青霉素过敏者推荐克林霉素或红霉素
41
血清学检查
抗O试验（ASO test）： 链球菌侵入体内产生SLO，刺激机体产生
相应抗体ASO(血清），加入SLO乳胶试剂，SLO 抗体(ASO)与乳胶试剂(吸附有SLO)反应，产生 凝集，为阳性；无凝集，为阴性。
–原理：中和试验，用SLO检测血清中的ASO –方法：间接凝集 –结果：效价大于400单位 –意义：活动性风湿热及肾小球肾炎辅助诊断
16
急性肾小球肾炎的临床表现：水肿、 血尿、蛋白尿等。
17
3. 肺炎链球菌：
致病物质 荚膜抗吞噬作用。
所致疾病
在自然界广泛分布，常寄居于正常人 的鼻咽腔中，形成带菌状态，在机体 抵抗力下降时引起疾病。主要引起大 叶性肺炎，约占细菌性肺炎的80%。
18
4.其他链球菌所致疾病：
（ 1 ） B 群 链 球 菌 (group B streptococcus, GBS)
• A群化脓性链球菌的主要致病因素和所致疾病有 哪些？
• A和B群链球菌主要的鉴定要点是什么？ • 链球菌的形态染色和培养特性主要有哪些？ • 肺炎链球菌（肺炎双球菌）的鉴定要点包括哪些？
3
一、分类 （1)血平板上溶血现象分类
链球菌在血琼脂平板培养基上生长繁 殖后，按产生溶血与否及其溶血现象分为3 类：①甲型 (α) 溶血性链球菌 ；②乙型 (β) 溶血性链球菌；③丙型 (γ) 链球菌。
同一群的链球菌又分若干型。A群根 据其M抗原不同，可分成约100个型。
6
医学常见链球菌
链球菌
血清群 溶 血 诊断要点
化脓性链球菌 A 群
β溶血；杆菌肽敏感
引起常见疾病 皮肤感染，咽炎，风湿
热，肾炎
无乳链球菌
B 群 β溶血；杆菌肽不敏感 新生儿败血症和脑膜炎 水解马尿酸盐、CAMP(+)
牛链球菌 肺炎链球菌 草绿色链球菌
4
根据溶血现象分类
溶血环现象 草绿色溶血环 完全溶血环
不溶血
名称 溶血 溶血
类别
致病性
甲型溶血性链球菌 多为条件致病菌
乙型溶血性链球菌 溶血性链球菌
丙型或γ链球菌、 不溶血性链球菌
致病力强 无致病性
金 葡 菌
5
（2）抗原结构分类
Lancefield血清分群：据链球菌细 胞壁中抗原结构（C多糖抗原）不同,运 用血清学方法分成A-H、K-V 20群。对人 致病的链球菌菌株，90%左右属A群，其 他群少见。
1)致热外毒素（pyrogenic exotoxin） 是人类猩红热的主要毒性物质。致热外毒
素抗原性强，具有超抗原作用，对兔有致热 性和致死性。
2)链球菌溶素（streptolysin） 溶解红细胞、破坏白细胞和血小板。
A群链球菌可分为两种溶血素（hemolysin）： 链球菌溶素O（SLO）：对哺乳动物多 （抗原性强氧敏感） 种细胞有毒性作用 链球菌溶素S（SLS）：对红白细胞和多种组织 （无抗原性氧稳定） 细胞有破坏作用
• B群链球菌：镜下特点、菌落特点、 CAMP试验、 血清试验
46
47
第二节 链球菌属
（Streptococcus）
1
链球菌属（Streptococcus)是一大类镜 下呈链状排列的革兰阳性球菌。
本节重点掌握：
• A群（化脓性）链球菌（S. pyogenes） • 肺炎链球菌（S. pneumoniae）
• B群链球菌
2
通过本节学习，希望能掌握：
• 根据溶血性不同可将链球菌分为哪几种？ Lancefield血清分群链球菌有多少群？与疾病 有关的主要包括哪些群？与人类疾病有关的β溶 血性链球菌主要包括哪些血清群？这些群在致病 性方面的特点？临床常见的α溶血性链球菌主要 包括哪两大类？
革兰阳性链球菌
典型链球菌形态 和排列
典型的链球菌菌落 与金葡菌的鉴别 与肺炎链球菌的鉴别
生化反应或药敏实验等 33
1.β溶血链球菌属内的鉴定试验
34
m35m
36
2.非β溶血链球菌鉴定
菌种
肺炎链球菌 草绿色链球菌 牛链球菌
optochin敏感试 验 S R
R
胆汁溶菌试验
+ — —
胆汁七叶苷试验
10
11
2)M蛋白（M protein） 是A群链球菌的主要致病因子，含
M蛋白的链球菌具有抗吞噬和抵抗细胞 内杀菌作用；与链球菌性变态反应疾 病有关（M蛋白与心肌、肾小球基底膜 有共同抗原）。
12
（2）侵袭性酶（invasive enzyme）
A群链球菌可产生多种侵袭酶，均是扩散因子。 1）透明质酸酶（hyaluronidase）：分解间质内
滑小菌落，不同菌株溶 血不一，A群有透明溶血 环（β溶血现象）。
γ链球菌
α溶血
β溶血
23
β溶血性链球菌
24
肺炎链球菌
营养要求较高,常用血或巧克力平板;生长需要 CO2; 菌落与甲链相似，产生自溶酶能自溶。
肺链的菌落（培养约40h）
肺链的α溶血（培养约24h）
25
肺 炎 链 球 菌 “ 露 滴 样 ” 菌 落
20
三、生物学特性
1.形态与染色
球形或椭圆形，链状或成双排列，革兰染 色阳性（G＋） ，有微荚膜，无芽胞，无鞭毛。
21
肺炎链球菌：
G＋，双球菌矛 头状：平面相 对，尖面相背。 有荚膜，无芽 胞，无鞭毛。
22
2.培养特性
• 营养要求高：血平板或 含血清培养基
• 初代培养需5%-10%CO2 • 液体培养为沉淀生长 • 血平板呈灰白色表面光
D 群 不溶血；胆汁七叶苷（+）
—
α溶血；胆汁溶菌（+）， Optochin敏感
—
α溶血；胆汁溶菌 （-），Optochin耐药
多不致病 肺炎，脑膜炎，心内膜
炎 龋齿，心内膜炎
7
（3）生化反应分类
对一些不具有群特异性抗原的链球 菌（如肺炎链球菌和草绿色链球菌等）， 需用生化反应和对氧的需要分类。对氧 的需要分类分为：需氧、厌氧和微需氧 链球菌。
8
二、临床意义
A群链球菌有较强的侵袭力，产生多种外毒 素和胞外酶。肺炎链球菌可引起大叶性肺炎
1.A群链球菌的致病物质： 细菌的胞壁成分 胞外侵袭酶类 外毒素
9
（1)胞壁成分
1)脂磷壁酸（lipoteichoic acid, LTA）与生 物膜有高度亲和力，是该菌定植在机体皮肤和 呼吸道黏膜等表面的主要侵袭因素。
29
4.抗原结构
荚膜 蛋白质
细胞壁 肽聚糖 细胞膜 细胞质
根据蛋白（M）抗 原进一步分型
多糖 分20个群，A群致病 菌（β溶血性链球菌 或化脓性链球菌）
1）多糖抗原（C抗原）群特异性抗原，细胞壁的多糖组分。
2）表面抗原或称蛋白质抗原：壁外层的菌毛样结构含M蛋白，位于C抗 原外层，具型特异性，A群有100多种血清型。M抗原与致病性有关。 30
透明质酸，使病菌易扩散。 2）链激酶（streptokinase, SK）：与葡
激酶类似，使血液中纤维蛋白酶原 变成纤维蛋白酶，溶解血块或阻止 血浆凝固，利于病菌扩散。 3）链道酶（streptodomase, SD）：亦称 链球菌DNA酶，降解DNA，使脓
液稀薄，促进病菌扩散。
13
（3）外毒素类
— — +
37
肺炎链球菌微生物学检验方法
1.直接涂片镜检： G＋有荚膜的双球菌
2.分离培养： “脐形”菌落 与甲链鉴别
肺炎球菌荚膜（×1000）
菊糖分解试验（+） 胆汁溶菌试验（+） Optochin敏感试验（敏感） 小白鼠动物试验（+）
38
大叶性肺炎患者痰涂片
39
40
胆汁溶菌试验
肺炎链球菌胆汁溶菌试验为阳性 甲型溶血性链球菌的胆汁溶菌试验为阴性。
又称乳链球菌。可寄居于正常妇女 阴道和直肠，条件致病，可引起： • 孕妇菌血症、泌尿系感染、胎膜感染、子 宫内感染和产褥热 • 新生儿败血症、肺炎和脑膜炎。 美国《围产期GBS预防指南》指出： 对怀孕35-37周的孕妇必须进行GBS筛检，阳 性需预防性治疗
19
（2）甲型溶血性链球菌：也称草绿色链球菌 （streptococcus viridians）。因无多糖抗原， 故不属于Lancefield血清学分类的任何族。包括 多个种，条件致病，可引起下列两种疾病： ①龋齿（dental caries）：常由变形链球 菌引起。 ②亚急性细菌性心内膜炎（subacute bacterial endocarditis, SBE）由此菌引起的 SBE占全部病例50%。
14
2.A群所致疾病
A群链球菌引起的疾病约 占人类链球菌感染的90%
(1)各种化脓性 感染
呼吸道感染 扁桃体炎 产褥热 丹毒（淋巴管炎）
(2)毒素性疾病
猩红热
发热、咽峡炎、全身弥漫性鲜红色皮疹 和疹退后明显的脱屑
(3)变态反应性疾病 风湿热
急性肾小球肾炎
15
风湿热的临床表现：发热、环形红斑、 游走性关节炎等。
肺炎链球菌：
荚膜多糖抗原：具有型特异性，可将 肺炎链球菌分为90多个血清型。
31
5.抵抗力
一般链球菌对热力敏感，对常用消毒剂 敏感。在干燥尘埃中生存数月。乙型链球菌 对青霉素、红霉素，四环素、杆菌肽和磺胺 药都很敏感。
32
四、链球菌微生物学检验方法
（脓汁、咽喉拭子） 血液
增菌
直接涂片镜检
分离培养（初代置CO2环境中）
肺炎链球菌脐窝状菌落（培养48h后）
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肺炎链球菌粘液样菌落 28
3.生化反应
• 分解葡萄糖，产酸不产气。 • 一般不分解菊糖，不被胆汁溶解（鉴别
甲型溶血性链球菌与肺炎链球菌）。 • 触酶（-），与葡萄球菌不同。
•肺炎链球菌： 分解葡萄糖、乳糖和菊糖，胆汁可溶菌， Optochin敏感，触酶（-）
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小结
• 链球菌属细菌种类多，其中某些菌种为毒力强的 致病菌。分类较为复杂，临床分离株仍以传统的 血平板上溶血现象、菌落特点和Lancefield抗原 血清分型，结合生化反应进行鉴定。
• 肺炎链球菌：革兰阳性双球菌，有荚膜，脐窝样 菌落、OP（+）、胆汁溶菌（+）
• A群链球菌：镜下特点、菌落特点、杆菌肽、血清 试验
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链球菌微生物检验程序
涂片染色 G+球菌，触酶（-）
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五、药敏试验药物选择
β溶血链球菌 肺炎链球菌 草绿色链球菌
药敏时药物选择不同
首选青霉素和氨苄西林
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预防分娩妇女B群链球菌感染：
①推荐使用青霉素和氨苄西林。 ②低危险性青霉素过敏者，推荐头孢唑林。 ③高危险性青霉素过敏者推荐克林霉素或红霉素
41
血清学检查
抗O试验（ASO test）： 链球菌侵入体内产生SLO，刺激机体产生
相应抗体ASO(血清），加入SLO乳胶试剂，SLO 抗体(ASO)与乳胶试剂(吸附有SLO)反应，产生 凝集，为阳性；无凝集，为阴性。
–原理：中和试验，用SLO检测血清中的ASO –方法：间接凝集 –结果：效价大于400单位 –意义：活动性风湿热及肾小球肾炎辅助诊断
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急性肾小球肾炎的临床表现：水肿、 血尿、蛋白尿等。
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3. 肺炎链球菌：
致病物质 荚膜抗吞噬作用。
所致疾病
在自然界广泛分布，常寄居于正常人 的鼻咽腔中，形成带菌状态，在机体 抵抗力下降时引起疾病。主要引起大 叶性肺炎，约占细菌性肺炎的80%。
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4.其他链球菌所致疾病：
（ 1 ） B 群 链 球 菌 (group B streptococcus, GBS)
• A群化脓性链球菌的主要致病因素和所致疾病有 哪些？
• A和B群链球菌主要的鉴定要点是什么？ • 链球菌的形态染色和培养特性主要有哪些？ • 肺炎链球菌（肺炎双球菌）的鉴定要点包括哪些？
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一、分类 （1)血平板上溶血现象分类
链球菌在血琼脂平板培养基上生长繁 殖后，按产生溶血与否及其溶血现象分为3 类：①甲型 (α) 溶血性链球菌 ；②乙型 (β) 溶血性链球菌；③丙型 (γ) 链球菌。
同一群的链球菌又分若干型。A群根 据其M抗原不同，可分成约100个型。
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医学常见链球菌
链球菌
血清群 溶 血 诊断要点
化脓性链球菌 A 群
β溶血；杆菌肽敏感
引起常见疾病 皮肤感染，咽炎，风湿
热，肾炎
无乳链球菌
B 群 β溶血；杆菌肽不敏感 新生儿败血症和脑膜炎 水解马尿酸盐、CAMP(+)
牛链球菌 肺炎链球菌 草绿色链球菌
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根据溶血现象分类
溶血环现象 草绿色溶血环 完全溶血环
不溶血
名称 溶血 溶血
类别
致病性
甲型溶血性链球菌 多为条件致病菌
乙型溶血性链球菌 溶血性链球菌
丙型或γ链球菌、 不溶血性链球菌
致病力强 无致病性
金 葡 菌
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（2）抗原结构分类
Lancefield血清分群：据链球菌细 胞壁中抗原结构（C多糖抗原）不同,运 用血清学方法分成A-H、K-V 20群。对人 致病的链球菌菌株，90%左右属A群，其 他群少见。
1)致热外毒素（pyrogenic exotoxin） 是人类猩红热的主要毒性物质。致热外毒
素抗原性强，具有超抗原作用，对兔有致热 性和致死性。
2)链球菌溶素（streptolysin） 溶解红细胞、破坏白细胞和血小板。
A群链球菌可分为两种溶血素（hemolysin）： 链球菌溶素O（SLO）：对哺乳动物多 （抗原性强氧敏感） 种细胞有毒性作用 链球菌溶素S（SLS）：对红白细胞和多种组织 （无抗原性氧稳定） 细胞有破坏作用
• B群链球菌：镜下特点、菌落特点、 CAMP试验、 血清试验
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第二节 链球菌属
（Streptococcus）
1
链球菌属（Streptococcus)是一大类镜 下呈链状排列的革兰阳性球菌。
本节重点掌握：
• A群（化脓性）链球菌（S. pyogenes） • 肺炎链球菌（S. pneumoniae）
• B群链球菌
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通过本节学习，希望能掌握：
• 根据溶血性不同可将链球菌分为哪几种？ Lancefield血清分群链球菌有多少群？与疾病 有关的主要包括哪些群？与人类疾病有关的β溶 血性链球菌主要包括哪些血清群？这些群在致病 性方面的特点？临床常见的α溶血性链球菌主要 包括哪两大类？
革兰阳性链球菌
典型链球菌形态 和排列
典型的链球菌菌落 与金葡菌的鉴别 与肺炎链球菌的鉴别
生化反应或药敏实验等 33
1.β溶血链球菌属内的鉴定试验
34
m35m
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2.非β溶血链球菌鉴定
菌种
肺炎链球菌 草绿色链球菌 牛链球菌
optochin敏感试 验 S R
R
胆汁溶菌试验
+ — —
胆汁七叶苷试验
10
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2)M蛋白（M protein） 是A群链球菌的主要致病因子，含
M蛋白的链球菌具有抗吞噬和抵抗细胞 内杀菌作用；与链球菌性变态反应疾 病有关（M蛋白与心肌、肾小球基底膜 有共同抗原）。
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（2）侵袭性酶（invasive enzyme）
A群链球菌可产生多种侵袭酶，均是扩散因子。 1）透明质酸酶（hyaluronidase）：分解间质内
滑小菌落，不同菌株溶 血不一，A群有透明溶血 环（β溶血现象）。
γ链球菌
α溶血
β溶血
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β溶血性链球菌
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肺炎链球菌
营养要求较高,常用血或巧克力平板;生长需要 CO2; 菌落与甲链相似，产生自溶酶能自溶。
肺链的菌落（培养约40h）
肺链的α溶血（培养约24h）
25
肺 炎 链 球 菌 “ 露 滴 样 ” 菌 落
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三、生物学特性
1.形态与染色
球形或椭圆形，链状或成双排列，革兰染 色阳性（G＋） ，有微荚膜，无芽胞，无鞭毛。
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肺炎链球菌：
G＋，双球菌矛 头状：平面相 对，尖面相背。 有荚膜，无芽 胞，无鞭毛。
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2.培养特性
• 营养要求高：血平板或 含血清培养基
• 初代培养需5%-10%CO2 • 液体培养为沉淀生长 • 血平板呈灰白色表面光
D 群 不溶血；胆汁七叶苷（+）
—
α溶血；胆汁溶菌（+）， Optochin敏感
—
α溶血；胆汁溶菌 （-），Optochin耐药
多不致病 肺炎，脑膜炎，心内膜
炎 龋齿，心内膜炎
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（3）生化反应分类
对一些不具有群特异性抗原的链球 菌（如肺炎链球菌和草绿色链球菌等）， 需用生化反应和对氧的需要分类。对氧 的需要分类分为：需氧、厌氧和微需氧 链球菌。
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二、临床意义
A群链球菌有较强的侵袭力，产生多种外毒 素和胞外酶。肺炎链球菌可引起大叶性肺炎
1.A群链球菌的致病物质： 细菌的胞壁成分 胞外侵袭酶类 外毒素
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（1)胞壁成分
1)脂磷壁酸（lipoteichoic acid, LTA）与生 物膜有高度亲和力，是该菌定植在机体皮肤和 呼吸道黏膜等表面的主要侵袭因素。
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4.抗原结构
荚膜 蛋白质
细胞壁 肽聚糖 细胞膜 细胞质
根据蛋白（M）抗 原进一步分型
多糖 分20个群，A群致病 菌（β溶血性链球菌 或化脓性链球菌）
1）多糖抗原（C抗原）群特异性抗原，细胞壁的多糖组分。
2）表面抗原或称蛋白质抗原：壁外层的菌毛样结构含M蛋白，位于C抗 原外层，具型特异性，A群有100多种血清型。M抗原与致病性有关。 30
透明质酸，使病菌易扩散。 2）链激酶（streptokinase, SK）：与葡
激酶类似，使血液中纤维蛋白酶原 变成纤维蛋白酶，溶解血块或阻止 血浆凝固，利于病菌扩散。 3）链道酶（streptodomase, SD）：亦称 链球菌DNA酶，降解DNA，使脓
液稀薄，促进病菌扩散。
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（3）外毒素类
— — +
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肺炎链球菌微生物学检验方法
1.直接涂片镜检： G＋有荚膜的双球菌
2.分离培养： “脐形”菌落 与甲链鉴别
肺炎球菌荚膜（×1000）
菊糖分解试验（+） 胆汁溶菌试验（+） Optochin敏感试验（敏感） 小白鼠动物试验（+）
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大叶性肺炎患者痰涂片
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胆汁溶菌试验
肺炎链球菌胆汁溶菌试验为阳性 甲型溶血性链球菌的胆汁溶菌试验为阴性。
又称乳链球菌。可寄居于正常妇女 阴道和直肠，条件致病，可引起： • 孕妇菌血症、泌尿系感染、胎膜感染、子 宫内感染和产褥热 • 新生儿败血症、肺炎和脑膜炎。 美国《围产期GBS预防指南》指出： 对怀孕35-37周的孕妇必须进行GBS筛检，阳 性需预防性治疗
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（2）甲型溶血性链球菌：也称草绿色链球菌 （streptococcus viridians）。因无多糖抗原， 故不属于Lancefield血清学分类的任何族。包括 多个种，条件致病，可引起下列两种疾病： ①龋齿（dental caries）：常由变形链球 菌引起。 ②亚急性细菌性心内膜炎（subacute bacterial endocarditis, SBE）由此菌引起的 SBE占全部病例50%。
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2.A群所致疾病
A群链球菌引起的疾病约 占人类链球菌感染的90%
(1)各种化脓性 感染
呼吸道感染 扁桃体炎 产褥热 丹毒（淋巴管炎）
(2)毒素性疾病
猩红热
发热、咽峡炎、全身弥漫性鲜红色皮疹 和疹退后明显的脱屑
(3)变态反应性疾病 风湿热
急性肾小球肾炎
15
风湿热的临床表现：发热、环形红斑、 游走性关节炎等。
肺炎链球菌：
荚膜多糖抗原：具有型特异性，可将 肺炎链球菌分为90多个血清型。
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5.抵抗力
一般链球菌对热力敏感，对常用消毒剂 敏感。在干燥尘埃中生存数月。乙型链球菌 对青霉素、红霉素，四环素、杆菌肽和磺胺 药都很敏感。
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四、链球菌微生物学检验方法
（脓汁、咽喉拭子） 血液
增菌
直接涂片镜检
分离培养（初代置CO2环境中）