猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆、高效表达与鉴定

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆、高效表达与鉴
定
张秀云;吴斌;肇慧君;贾赟;刘霞;张瑞
【期刊名称】《大连工业大学学报》
【年(卷),期】2011(030)001
【摘要】根据猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)VR2332株ORF7的全长基因序列设计一对特异性引物,应用RT-PCR扩增出完整的ORF7基因,并将PCR产物克隆至pMD-18T载体进行测序分析.双酶切测序后重组质粒pMD-18T-N得到目的片段连接至原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组质粒pET-28a(+)-N.再转化至BL21宿主菌,对诱导表达条件(IPTG质量浓度、诱导时间、诱导温度)进行优化.结果显示,在37 ℃、0.2 mmol/L IPTG诱导5 h可实现重组N蛋白的高效表达.该重组N蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,Western-blotting分析显示,重组的N蛋白与PRRSV阳性血清发生特异性反应,表明表达的重组N蛋白具有较好的反应活性.
【总页数】5页(P18-22)
【作者】张秀云;吴斌;肇慧君;贾赟;刘霞;张瑞
【作者单位】大连工业大学生物工程学院,辽宁大连,116034;辽宁出入境检验检疫局,辽宁大连,116001;辽宁出入境检验检疫局,辽宁大连,116001;辽宁出入境检验检疫局,辽宁大连,116001;辽宁出入境检验检疫局,辽宁大连,116001;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州,450002
【正文语种】中文
【中图分类】Q786
【相关文献】
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