细胞死活鉴定 实验报告

细胞生物学实验报告
细胞死活鉴定
1.实验目的：观察上次实验培养的小鼠脾细胞，掌握细胞死活鉴定的方法。

2.实验用品：
（1）仪器及器材：显微镜、血细胞鉴定板、盖玻片、胶头滴管、试管
（2）实验药品：蒸馏水、台盼蓝染液、生理盐水、伊红染液
（3）实验材料：小鼠脾细胞
3.实验原理：
（1）活细胞特征：细胞边缘清晰，细胞透明度高，整体立体感强，核区域明显，细胞质内颗粒物质较少，无空泡。

培养数天后，可观察到正在分裂的细胞。

（2）肉眼观察鉴定细胞死活：正常生长的细胞培养液微微发黄，透明度高；如发现培养液微混，则说明细胞量太大需进行传代培养，或者培养液被污染；如果培养液
仍呈现清亮的粉红色，则说明细胞未生长。

（3）细胞凋亡特征过程：首先，细胞膜绒毛消失；然后，细胞收缩，细胞核高度浓缩，边缘化；最后，细胞核片段化，形成凋亡小体。

细胞核片段化时，如果对此类细胞进行DNA电泳，则会发现电泳条带呈梯状分布。

（4）细胞死活鉴定方法
①染色排除法：细胞死亡后，细胞膜的通透性变大，染料可以通过细胞膜进入细
胞。

因此，死细胞可以被染料染色，而活细胞由于细胞膜的选择透过性而呈无
色。

②荧光染色法：活细胞需要进行代谢。

将荧光染料与有机分子结合（如二丙酸酯
荧光素），使之易穿膜。

在活细胞中这些物质可被分解为荧光染料和有机分子
（二丙酸酯和荧光素），在显微镜下观察，细胞被染色。

此种方法中，活细胞
被染色，死细胞则呈无色。

（5）血细胞计数板的用法：如果是对比较密的细胞进行计数（如红细胞），则使用中间的中格进行计数，再将所得数值乘以2500，即是每毫升中的细胞数量；如果是
对比较稀疏的细胞进行计数（如白细胞），则使用四个角上的大格进行计数，再将
所得数值乘以10000，即是每毫升中的细胞数量。

4.实验步骤：
（1）台盼蓝染色法：
①用生理盐水制成0.4%的台盼蓝溶液备用
②取0.5ml细胞悬液放入干净试管中，加一滴染液，混合。

2 mins 后迅
速制成临时装片，镜检。

（2）伊红丫染色法
①用生理盐水制成0.15%的伊红染液混合
② 2 mins 后制片镜检
5.实验结果：视野中活细胞呈无色；死细胞呈蓝色，有些可观察到细胞核；还有少量细胞
只有边缘部分呈蓝色。

10*10显微镜下观察：
10*40显微镜下观察：
6.分析与讨论
（1）结果分析：视野中活细胞未被染色而呈无色；死细胞由于细胞膜通透性变大而被染色，呈蓝色，细胞核被染色，所以有些可观察到细胞核。

还有少
量细胞只有边缘部分呈蓝色，这是可能是由于染色时间过长，细胞离开恒
温环境而死亡，慢慢被染成蓝色。

（2）注意事项
①用显微镜观察时：由于血细胞鉴定板的网格线比较难以观察，应该事先将光圈
调为小光圈，同时光线尽量调暗，使网格线清晰。

②观察：在制成临时装片后，应迅速镜检。

因为细胞从恒温（37℃）环境转移到
室温环境后，会迅速死亡，如不迅速观察，很难观察到活细胞。

③血细胞计数板的用法：如果是对比较密的细胞进行计数（如红细胞），则使用
中间的中格进行计数，再将所得数值乘以2500，即是每毫升中的细胞数量；如
果是对比较稀疏的细胞进行计数（如白细胞），则使用四个角上的大格进行计
数，再将所得数值乘以10000，即是每毫升中的细胞数量。

选择合适的计数方
法，会取得事半功倍的效果。