PCR扩增缓冲液(10×,pH8.3)
PCR技术的原理
PCR技术的原理我们知道DNA分子通常是双链的，由互补的核苷酸链组成：其中碱基A与T 配对，C与G配对。
形成的双螺旋结构就像一架微小的螺旋形梯子。
细胞分裂时DNA要复制，在DNA聚合酶的作用下合成了新的DNA分子，最终DNA实现了加倍。
然后在细胞分裂时，等量的DNA就分配到两个不同的细胞中去。
而PCR技术模仿的就是天然DNA在细胞分裂时的复制过程，可用"三步曲"来描述：（图1）第一步称为"加热变性"。
即在高温下使DNA的双链解开，彼此分开成为两条单链DNA，作为新的DNA分子合成的模板。
在DNA复制过程中，解开双链这一步是由一种称为"解旋酶"的蛋白质来完成。
第二步称为"退火"。
在对应于模板DNA的特定区段两端的序列部分，合成两条引物（寡核苷酸链），长度通常为几十个核苷酸。
温度降低即"退火"时，引物就附着到模板DNA两侧与引物序列互补配对的地方。
"引物"顾名思义，是在DNA 合成时作为"领头羊"，下一步的DNA合成就是在"引物"的引导下一个个地将脱氧核糖核苷酸加上去。
第三步称为"延伸"。
引物与模板DNA退火后，DNA聚合酶就在适当的反应温度下促使核苷酸依次按与模板碱基互补配对原则，在引物3'端一个个地连接上去，直至形成一个完整的DNA分子。
经过"三步曲"，一个DNA分子解链形成的两个单链同时可以作为模板，分别指导合成了一条新的与之互补的DNA链，一个DNA分子就变成了两个。
这样的一个周期包括一个"三步曲"，下一个周期中两个DNA分子就变成了四个。
这个过程可无限地重复下去。
每个周期只需几分钟，恰似一个"链式反应"，DNA的数量随着每个周期的完成而成倍地增加，2对变4对，4对变8对，8对变16对，依此类推。
三、核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法
三、核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50×TAE Buffer (pH8.5)组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 1 L配制方法3.加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。
4.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。
10×TBE Buffer (pH8.3)组份浓度890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA配制量 1 L配制方法3.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。
10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer组份浓度200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.称41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。
2.加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。
3.使用2 N NaOH调节pH值至7.0。
6.用0.45 m滤膜过滤除去杂质。
7.室温避光保存。
注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。
变黄时也可使用，但变黑时不要使用。
溴乙锭(10 mg/ml)组份浓度10 mg/ml溴乙锭配制量100 ml配制方法 1.称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。
2.加入去离子水100 ml，充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。
3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。
4.溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml。
注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。
Agarose凝胶配制方法 1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。
2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。
3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。
注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。
4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。
加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。
小心摇动锥形瓶。
使琼脂糖充分均匀熔化。
此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔化。
PCR技术操作程序和优化方法
PCR技术操作程序和优化方法典型的PCR操作(一) 试剂(1)引物根据待扩增DNA不同，引物亦不同。
(2)耐热DNA聚合酶：此酶是从耐热细菌中分离出来的，能耐受高温(93—100℃)。
(3)10x PCR缓冲液： 500mm01／L KCl； 100mmol／L Tris一HCl(pH8.4， 20℃)，150mmol ／L MgCl2， lmg／m1明胶。
(4)5mmo1／L dNTP贮备液：将dATP，dCTP，dGTPT和dTTP钠盐各100mg合并，加3m1灭菌去离子水溶解，用NaoH调pH至中性，分装每份300v1，(-) 20℃保存dNTP浓度最好用uv吸收法精确测定。
另外。
现在已有中性dNTP溶液商品供应(Sigma公司和Pharmacia公司等).(5)标本处理试剂：不同标本所需试剂不同，根据具体情况而定.(二) 操作程序利用PcR扩增的操作程序基本相同，只是根据引物与靶序列的不同，选择不同的反应体系与循环参数(见本章第：：节)o基本的操作是将PcR必需反应成分加入一微量离心管中，然后置于一定的循环参数条件下进行循环扩增。
每个实验室或每个人都有不同的操作习惯，但需遵守一定的操作规范。
我们推荐下述操作程序，因这样操作可最大程度地增加反应的成功率。
(1)向一微量离心管中依次加入：ddH20 补至终体积(终体积50~100ul)10 x PCR缓冲液1／10体积dNTP 各200umol／L引物各1umol／LDNA模板 10*10一10*10*10*10*10拷贝混匀后，离心15s使反应成分集于管底。
(2)加石蜡油50—100ul于反应液表面以防蒸发。
置反应管于97c变性7min(染色体DNA)或5min(质粒DNA).(3)冷至延伸温度时，加入1—5U Taq DNA聚合酶，在此温度作用1min.(4)于变性温度下使模板DNA变性适当时间。
(5)在复性温度下使引物与模板杂交一定时间。
非变性聚丙烯酰胺连续电泳缓冲液(10×)
北京雷根生物技术有限公司
非变性聚丙烯酰胺连续电泳缓冲液(10×)
简介：
非变性聚丙烯酰胺连续电泳缓冲液(10×)由Tris 、甘氨酸组成，不含变性剂SDS ，用于非变性条件下的单向凝胶电泳，使用时需用蒸馏水或去离子水稀释后使用。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、用蒸馏水或去离子水稀释后使用。
注意事项：
1、 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。
2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 12个月有效。
相关：
编号 名称 PE0015 Storage 非变性聚丙烯酰胺连续电泳缓冲液(10×) 500ml RT 使用说明书 1份 编号 名称 NA0006 DNA 凝胶加样缓冲液(6×DNA Loading Buffer) NA0034
Tris-硼酸电泳缓冲液(5×TBE) PE0025
SDS-PAGE 蛋白加样缓冲液(5×) PT0001
BCA 蛋白定量试剂盒 PT0013
考马斯亮蓝快速染色液 PW0053
Western 抗体洗脱液(碱性) TO1013 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 比色法)。
常用的电泳缓冲液
常用的电泳缓冲液缓冲液使用液浓贮存液（每升）Tris-乙酸（TAE）1×：0.04mol/L Tris-乙酸50×：242g Tris碱0.001mol/L EDTA 57.1ml冰乙酸100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris-磷酸（TPE）1×:0.09mol/L Tris-磷酸10×:10g Tris碱0.002mol/L EDTA 15.5ml85%磷酸（1.679g/ml）40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris-硼酸（TBE）a0.5×0.045mol/L Tris-硼酸5×：54g Tris碱0.001mol/L EDTA 27.5硼酸20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 碱性缓冲液b1×:50mmol/L NaOH1×:5ml 10mol/L NaOH1mmol/L EDTA 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) Tris-甘氨酸c1×:25mmol/L Tris5×:15.1g Tris250mmol/L 甘氨酸94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3）0.1% SDS 50ml 10% SDS(电泳级)说明：①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。
以片都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。
但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。
目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：10稀释的贮存液作为使用液。
进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。
②碱性电泳缓冲液应现用现配。
③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
2×SDS凝胶加样缓冲液：100mmol/L Tris?HCl(6.8)200mmol/L二硫苏糖醇（DTT）4%SDS（电泳级）0.2%溴酚蓝20%甘油不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。
10×TBE缓冲液使用说明
10×TBE缓冲液使用说明10×TBE缓冲液TBE 缓冲液是生物学中常使用的核酸电泳缓冲盐溶液，主要用于DNA 的琼脂糖凝胶电泳。
TBE的主要成分是Tris-硼酸盐与EDTA，缓冲能力强，适合较长时间电泳，分辨率较高，电泳小于1kb的片段时分离效果好。
TBE 缓冲液中的硼酸成分会影响DNA回收效率以及后续的酶反应，若要进行DNA片段的琼脂糖凝胶电泳回收实验，建议使用TAE 缓冲液。
储存条件: 室温储存，有效期至少12个月。
缓冲液其他试剂有：5×TBE 缓冲液10×TBE缓冲液50×TAE 缓冲液D-PBS缓冲液(不含钙镁和酚红)PBS缓冲液干粉1×PBS缓冲液(pH7.2- 7.4)10×PBS缓冲液 (pH7.2- 7.4)柠檬酸钠缓冲液0.01mol/L， pH6.0DNA退火缓冲液（5X）5×蛋白上样缓冲液（含DTT）4×蛋白上样缓冲液（含DTT）2×蛋白上样缓冲液（含β-巯基乙醇）2×蛋白上样缓冲液（含DTT）4×SDS-PAGE分离胶缓冲液(PH=8.8)4×SDS-PAGE浓缩胶缓冲液(PH=6.8)5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液10×电泳转移缓冲液（转膜液）Tris-Tricine-SDS-PAGE 凝胶缓冲液2×Tris-Tricine-SDS-PAGE 上样缓冲液 (含DTT) 柠檬酸钠缓冲液0.1mol/L，pH4.5，无菌溶液1×PBST缓冲液，PH7.2-7.4，0.01M10×PBST20×PBS缓冲液， PH7.2-7.4，工作浓度0.01M pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液pH9.0磷酸盐-生理盐水缓冲液pH9.0碳酸盐-甘油缓冲液基础β-半乳糖酶洗涤缓冲液10× tris-mops缓冲液10×DNA上样缓冲液10×MOPS缓冲液TE缓冲液(PH=8.0)0.5M EDTA(PH8.0)20×TBS1×TBST缓冲液STE缓冲液（PH8.0）1×Tris-tricine-SDS-PAGE电泳缓冲液（阴极-）10×Tris-tricine-SDS-PAGE电泳缓冲液（阴极-）10×Tris-tricine-SDS-PAGE电泳缓冲液（阳极+）1×Tris-tricine-SDS-PAGE电泳缓冲液（阳极+）10×TBST缓冲液MES 2-(N-吗啡啉)乙磺酸PIPES 1,4-哌嗪二乙磺酸4×非变性蛋白上样缓冲液。
核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法
核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50×TAE Buffer (pH8.5)10×TBE Buffer (pH8.3)10×MOPS Buffer ■组份浓度 2 M Tirs-醋酸，100 mM EDTA■配制量 1 L■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
Tris 242 gNa2EDTA·2H2O 37.2 g2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加入57.1 ml的醋酸，充分搅拌。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。
■组份浓度 890 mM Tirs-硼酸，20 mM EDTA■配制量 1 L■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
Tris 108 gNa2EDTA·2H2O 7.44 g硼酸 55 g2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。
■组份浓度 200 mM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA■配制量 1 L■配制方法 1. 称量41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。
2. 加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。
3. 使用2 N NaOH调节pH值至7.0。
4. 再向溶液中加入下列试剂。
1 M NaOAc（DEPC处理） 20 ml0.5 M EDTA（pH8.0）（DEPC处理） 20 ml5. 用DEPC处理水将溶液定容至1 L。
6. 用0.45 μm滤膜过滤除去杂质。
7. 室温避光保存。
注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。
变黄时也可使用，但变黑时不要使用。
溴乙锭(10 mg/ml) Agarose凝胶■组份浓度 10 mg/ml溴乙锭■配制量 100 ml■配制方法 1. 称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。
2. 加入去离子水100 ml，充分搅拌数小时完全溶解溴乙锭。
核酸电泳相关试剂、缓冲液配制方法
三、核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50×TAE Buffer (pH8.5)组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 1 L配制方法3.加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。
4.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。
10×TBE Buffer (pH8.3)组份浓度890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA配制量 1 L配制方法3.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。
10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer组份浓度200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.称41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。
2.加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。
3.使用2 N NaOH调节pH值至7.0。
6.用0.45 m滤膜过滤除去杂质。
7.室温避光保存。
注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。
变黄时也可使用，但变黑时不要使用。
溴乙锭(10 mg/ml)组份浓度10 mg/ml溴乙锭配制量100 ml配制方法 1.称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。
2.加入去离子水100 ml，充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。
3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。
4.溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml。
注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。
Agarose凝胶配制方法 1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。
2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。
3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。
注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。
4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。
加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。
小心摇动锥形瓶。
使琼脂糖充分均匀熔化。
此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔化。
什么叫PCR反应体系
什么叫PCR反应体系？多聚酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，它能以极少量的DNA为模板快速复制出上百万份的DNA拷贝，而这一过程的发生和完成需要一系列的物质条件，这些物质条件共同组成了PCR反应体系。
PCR反应体系主要由缓冲液、模板、dNTP，耐热DNA聚合酶、引物及其特定的反应条件。
与细胞内DNA复制相比，PCR反应体系中没有解旋酶，而是通过90～95℃的高温使DNA变性解链；PCR 反应体系中也没有添加A TP，是由dNTP释放外侧的两个磷酸基团而提供能量；PCR反应体系中的引物不是RNA片段，而通常为一段特定的DNA单链；PCR反应体系中的DNA 聚合酶不是常见的普通DNA聚合酶，而是热稳定性很强的耐热DNA聚合酶。
缓冲液除了提供一定的pH缓冲能力外，还有一些有助于反应进行的成分。
PCR反应缓冲液通常采用10mmol/L的Tris-HCl（pH8.3～9.0，室温）缓冲液体系，它是两性离子缓冲剂，其中含有可激活DNA聚合酶活性中心的Mg2＋, Mg2＋浓度高低还可显著影响PCR扩增产物的特异性。
此外，缓冲液中还含有50mmol/L的K＋,有利于引物与模板的退火。
有些缓冲液中还加入明胶或血清蛋白（100μg/mL）及去污剂（如Tween20等），对Taq DNA聚合酶起稳定作用。
模板中含有待扩增的DNA，其数量直接影响扩增效果。
对于一般PCR扩增，104～107个模板分子可以达到满意的效果。
除了模板数量外，模板的纯度也非常重要，不能有其他DNA、太多的蛋白质的污染，特别是其他DNA的污染，即使是痕量DNA，也会导致非特异性产物的产生。
dNTP（脱氧核苷三磷酸）为dA TP、dCTP、dGTP和dTTP4种脱氧核苷三磷酸的混合物。
dNTP溶于pH为7.0的NaOH贮存液中，最初的贮存液可稀释到10mol/L，分装后存放在-20℃冰箱保存中。
10×电泳转移缓冲液使用说明
10×电泳转移缓冲液使用说明
货号：D1060
规格：500mL
保存：室温保存，有效期1年。
产品简介：
10×电泳转移缓冲液是用于蛋白印迹实验（Western blotting）中湿法以及半干法电泳转膜的缓冲试剂。
10×电泳转移缓冲液按常规方法配制而成，为10×浓缩液，不含SDS和甲醇，便于储存、操作简便。
组份浓度：250mM Tris，1.92M Glycine
使用说明：
电泳转移缓冲液为10×浓缩液，临用前按下述步骤稀释：
1.取100mL的10×电泳转移缓冲液，加入200mL无水甲醇混匀。
2.加入蒸馏水或去离子水，定容至1L，混匀后即可使用。
3.新配制的1×电泳转移缓冲液工作液室温可保存两周左右。
4.10×电泳转移缓冲液不含SDS，蛋白分子量较大或者疏水性较强时，为增加转膜效果，可适当添加少量SDS（参考工作浓度为0.025-0.1%）。
注意事项：
1.10×电泳转移缓冲液为高倍浓缩液，环境温度较低时可能会有结晶析出，可加热助溶，待溶解完全后再行稀释使用；密封保存，防止污染。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴手套操作。
相关试剂：
A101030%Acr/Bis(29:1)
P1300SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
P10154×蛋白上样缓冲液（含DTT）
T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液
P1305考马斯亮蓝染色套装（染色液+脱色液）PR1600预染低分子量蛋白MARKER。
琼脂糖凝胶的主要性能指标
注意事项：
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制胶和加样过程中要防治气泡的产生。 紫外光对人眼有害，观察时加盖玻璃罩，观察时间不宜太长。 EB具有强诱变性，可致癌。必须戴手套操作，严格注意防护。 加样时，Tip头不宜插入样品孔太深，也不要穿破胶孔壁，否则样品渗漏或DNA 带型不整齐。 配胶和灌电泳槽需使用同一批缓冲液。因为pH 或离子强度很小的差别也会在凝 胶前部造成紊乱，影响DNA 片段的泳动。 梳板的选用 一般每个制胶模具均配有多个齿型不同的梳板，梳齿宽厚，形成的点 样容积较大，用于DNA 片段回收实验等；相反，梳齿窄而薄，形成的点样容积就 较小，用于PCR产物、酶切产物鉴定等。一般来说，上样量小时尽量选择薄的梳 板制胶，此时电泳条带致密清晰，便于结果分析。 凝胶一定要加热熔解完全，均匀，可以对着光亮的地方看看清澈不清澈 ； 一般情况下，梳子越薄而长，条带越好看 ； 上样量不宜过多，会造成条带的相互挤压； 如果点样孔多余，将样点到中间，尽量避免边缘效应 ，中间电场比较均匀 ； 做胶的缓冲液和跑胶的缓冲液浓度应该一致； 加样时不要太快，让其自然沉底，均匀分布在电泳孔内 ； 电泳开始时可以采用低电压使其跑出孔后，再调高电压。
电泳缓冲液
电泳缓冲液是指在进行电泳时所使用的缓冲溶液，用以稳定体系 酸碱度。常见的核酸电泳缓冲液有：TAE、TBE、TPE和MOPS等。
作用 ：
①缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时正极与负 极都会发生电解反应，正极发生的是氧化反应，负极发生的是还原反 应，长时间的电泳将使正极变酸，负极变碱。一个好的缓冲系统应有 较强的缓冲能力，使溶液两极的pH保持基本不变。 ②电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性，以利于DNA分 子的迁移，例如，一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的钠离子 ，钠离子的浓度太低时电泳速度变慢；太高时就会造成过大的电流使 胶发热甚至熔化。 ③电泳缓冲液还有一个组分是EDTA，加入浓度为1-2mmol/L，目的是螯 合Mg2+ 等离子，防止电泳时激活DNA酶，此外还可防止镁离子与核酸 生成沉淀。
标准的PCR反应体系
标准的PCR反应体系PCR的反应体积一般有：10、20、25、40、50、100μl（一般不要低于10μl，体积过少会影响扩增效率及产物得率）PCR反应体系与反应条件--------------------------------------------------------------------------------标准的PCR反应体系：10×扩增缓冲液10ul4种dNTP混合物各200umolL引物各10～100mol模板DNA 01～2ugTqDNA聚合酶25ug2+ 15mmolL加双或三蒸水至100ulPCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和g2+引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。
理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
设计引物应遵循以下原则：①引物长度：15-30b，常用为20b左右。
②引物扩增跨度：以200-500b为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。
ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度01～1umol或10～100mol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
分子生物学常用缓冲液、试剂和贮存液的配制
分子生物学常用缓冲液、试剂和贮存液的配制1、6*Loading Buffer（DNA电泳用，50ml配方）组分浓度：100mM EDTA, 40%(V/V) 蔗糖, 0.05%（W/V）xylene cyanol FF, 0.05%（W/V）溴酚蓝配制方法：称取25mg溴酚蓝，25mg xylene cyanol FF，5ml 0.5MEDTA，加入约20ml去离子水，加热搅拌，充分溶解，加入20g蔗糖，去离子水定容至50ml。
2、10*PBS（pH7.2～7.4，分子克隆推荐配方）组分浓度：NaCl 137 mmol/L，KCl 27 mmol/L，Na2HPO4 100 mmol/L，KH2PO4 20 mmol/L配置方法：用800ml去离子水溶解80 g NaCl, 2 g KCl，14.4 g Na2HPO4和2.4 g KH2PO4。
用盐酸调节pH 至7.4，加水定容至1 L，高温高压灭菌，室温保存。
3、20*SSC （pH约7.0）组分浓度：300 mmol/L 柠檬酸三钠，3 mol/L 氯化钠配制方法：称取柠檬酸三钠·2H2O 88.23 g，氯化钠175.3 g，加入800 ml去离子水充分溶解，用14 N HCl 调pH为7.0，去离子水定容至1 L，高温高压灭菌后室温保存。
4、10*Tris-甘氨酸转膜液（pH约8.3）1 L组分浓度：0.25 M Tris，1.92 M 甘氨酸配制方法：甘氨酸144.13 g，Tris 30.29 g，去离子水溶解定容至1 L。
使用前，100 ml 10*转膜液，加入200 ml甲醇，700 ml去离子水成为1*转膜液5、10*Tris-甘氨酸-SDS 电泳缓冲液（SDS-PAGE电泳缓冲液，pH约8.6）组分浓度：0.25 M Tris，1.92 M 甘氨酸，1%（W/V）SDS配制方法：称取30.29 g Tris，,144.13 g甘氨酸，5 g SDS，加入800 ml去离子水搅拌溶解，定容至1 L，常温保存。
MasterAmp 10X PCR 增强剂说明书
ManualMasterAmp 10X PCR Enhancer For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.MasterAmp 10X PCR Enhancer is part of the Epicentre™ product line,known for its unique genomics kits, enzymes, and reagents which offerhigh quality and reliable performance.21. IntroductionThe MasterAmp 10X PCR Enhancer (with betaine)* substantially improves the specificity and yield of PCR amplification reactions, especially templates containing a high GC content or secondary structure.1 MasterAmp PCR Enhancer (with betaine) lowers the melting temperature of GC-richregions to a temperature more similar to AT regions. This results in destabilisation of double-stranded regions, limiting DNA polymerase pausing, thereby increasing amplification yields. The MasterAmp PCR Enhancer (with betaine) can be used with a wide variety of DNA polymerases. MasterAmp 10X PCR Enhancer (with betaine) is available in a 10 mL size.2. Product designations and kit componentsManual MasterAmp 10X PCR EnhancerMasterAmp 10XPCR Enhancerwith Betaine 10 mL ME81210MasterAmp 10X PCR Enhancer (with Betaine)SS000026-D310 mLProductKit size Reagent description Catalogue number Part number Volume 3. Product specificationsStorage: Store only at -20 °C in a freezer without a defrost cycle.Quality control: MasterAmp 10X PCR Enhancer is function-tested in a PCR containing: 200 μM dNTPs, 300 ng human genomic DNA, 12.5 pmol of each Apo E primer and 1.25 U AmpliTherm™ DNA polymerase in 10 mM Tris-HCl (pH 8.3), 50 mM CaCl 2 and 1.5 mM MgCl 2 to produce a 268-bp amplification product.Contaminating activity assays: MasterAmp 10X PCR Enhancer is free of detectable DNAexonuclease, endonuclease and ribonuclease activities.4. Reference1. Weissensteiner T and Lanchbury JS, 1996, BioTechniques 21, 1102.5. Further supportIf you require any further support, please do not hesitate to contact our Technical Support Team: ************************.*Use of betaine in DNA polymerase reactions, including, but not limited to use for PCR or DNA sequencing, is covered by U.S. Patent No. 6,270,962, European Patent No. 0742838, German Patent No. DE4411588C1 and other patents or patent applications in the U.S. and other countries that are either assigned or exclusively licensed to LGC Biosearch Technologies™. Purchase of a product from Biosearch Technologies that contains betaine and a thermostable DNA polymerase is accompanied by a limited nonexclusive license for the purchaser to use the purchased product solely for life science research, whether the purchaser performs research in a not-for-profit or a for-profit organisation. However, if the product does not contain a thermostable DNA polymerase in addition to betaine, all for-profit organisations require a license from Biosearch Technologies in order to use betaine or a product that contains betaine in DNA polymerase reactions for research applications, and not-for-profit organisations require a license if the product, the research or the result of the research is transferred to or obtained for or on behalf of a for-profit organisation. Licenses are also available to use of betaine in DNA polymerase reactions for human or animal diagnostics, screening or other fields of use. Please contact Biosearch Technologies for information related to such licenses.For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.All trademarks and registered trademarks mentioned herein are the property of their respective owners. All other trademarks and registered trademarks are the property of LGC and its subsidiaries. Specifications, terms and pricing are subject to change. Not all products are available in all countries. Please consult your local sales representative for details. No part of this publication may be reproduced or transmitted in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, recording or any retrieval system, without the written permission of the copyright holder. © LGC Limited, 2023. All rights reserved. GEN/946/EK/0123@LGCBiosearch。
核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法
三、核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50×TAE Buffer (pH8.5)组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 1 L配制方法3.加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。
4.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。
10×TBE Buffer (pH8.3)组份浓度890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA配制量 1 L配制方法3.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。
10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer组份浓度200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.称41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。
2.加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。
3.使用2 N NaOH调节pH值至7.0。
6.用0.45 m滤膜过滤除去杂质。
7.室温避光保存。
注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。
变黄时也可使用，但变黑时不要使用。
溴乙锭(10 mg/ml)组份浓度10 mg/ml溴乙锭配制量100 ml配制方法 1.称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。
2.加入去离子水100 ml，充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。
3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。
4.溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml。
注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。
Agarose凝胶配制方法 1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。
2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。
3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。
注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。
4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。
加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。
小心摇动锥形瓶。
使琼脂糖充分均匀熔化。
此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔化。
核酸电泳相关试剂 缓冲液的配制方法
核酸电泳相关试剂缓冲液的配制方法核酸电泳相关试剂缓冲液的配制方法核酸电泳相关试剂.缓冲液的配制方法核酸电泳有关试剂、缓冲液的酿制方法50×taebuffer(ph8.5)组份浓度2mtris-醋酸，100mmedta酿制量1l酿制方法1.称量下列试剂，置于1l烧杯中。
2.向烧杯中重新加入约800ml的去离子水，充份烘烤熔化。
3.重新加入57.1ml的乙酸，充份烘烤。
4.加去离子水将溶液定容至ll后，室温保存。
10×tbebuffer(ph8.3)组份浓度890mmtris-硼酸，20mmedta配制量1l配制方法1.秤以下试剂，放在ll烧杯中。
2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定容至ll 后，室温保存。
10×mops(3-吗啉基丙磺酸)buffer组份浓度200rnmmops，20mmnaoac，10mmedta配制量1l配制方法1.表示41.8gmops，放在1l烧杯中。
2.加约700mldepc处理水，搅拌溶解。
3.使用2nnaoh调节ph值至7.0。
4.再向溶液中加入下列试剂。
5.用depc处置水将溶液定容至1l。
6.用0.45m滤膜过滤器除去杂质。
7.室温贮藏留存。
注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。
变黄时也可使用，但变黑时不要使用。
溴乙锭(10mg/ml)组份浓度10mg/ml溴乙锭配制量100ml配制方法1.秤1g溴乙锭，重新加入至100ml容器中。
2.加入去离子水100ml，充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。
3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。
4.溴乙锭的工作浓度为0.5g/ml。
特别注意：溴乙锭就是一种致癌物质，必须小心操作方式。
agarose凝胶配制方法1.酿制适度的电泳及制胶用的缓冲液(通常就是0.5×tbe或1×tae)。
2.根椐新制胶量及凝胶浓度，精确秤琼脂糖粉，重新加入适度的锥形瓶中。
PCR 各种缓冲液的配方
PCR 各种缓冲液的配方1. 电泳缓冲液50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液终浓度配制1L溶液成分2mol/L Tris碱 242g1mol/L 冰乙酸 57.1 mlEDTA （pH＝8.0） 18.622g （200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0））水补足1L2. 5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris碱54g445 mmol/L 硼酸盐 27.5g 硼酸10 mmol/L EDTA 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）水补足1L染料1％溴酚蓝（bromophenol blue）加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。
用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。
3. 凝胶上样液（gel loading solutions）6×碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠 300ul 10N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA 120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）18％聚蔗糖（400型） 1.8g0.15％溴甲酚绿 15mg0.25％二甲苯青FF 25mg水 10ml4. 6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15％溴酚蓝 1.5ml 1％溴酚蓝0.15％二甲苯青FF 1.5ml 1％二甲苯青FF5 mmol/L EDTA 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）15％聚蔗糖（400型） 1.5g水补足到10ml5.6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.25％溴酚蓝 2.5ml 1％溴酚蓝0.25％二甲苯青FF 2.5ml 1％二甲苯青FF15％聚蔗糖（400型） 1.5g水补足到10ml6.6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15％溴酚蓝 1.5ml 1％溴酚蓝0.15％二甲苯青FF 1.5ml 1％二甲苯青FF5 mmol/L EDTA 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）50％甘油3ml水 3.9ml7. 6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15％溴酚蓝 1.5ml 1％溴酚蓝0.15％二甲苯青FF 1.5ml 1％二甲苯青FF5 mmol/L EDTA 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）40％聚蔗糖 4g水补足到10ml8.10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.2％溴酚蓝20mg0.2％二甲苯青FF 20mg200 mmol/L EDTA 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 0.1％SDS 100ul 10％ SDS50％甘油 5ml水补足到10ml。
聚合酶链式反应（PCR）基本操作步骤[技巧]
![聚合酶链式反应（PCR）基本操作步骤[技巧]](https://img.taocdn.com/s3/m/05fc1b582a160b4e767f5acfa1c7aa00b52a9de8.png)
聚合酶链式反应（PCR）聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，为最常用的分子生物学技术之一。
典型的PCR由（1）高温变性模板；（2）引物与模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。
其主要步骤是：将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。
PCR能快速特异扩增任何已知目的基因或DNA片段，并能轻易在皮克（pg）水平起始DNA混合物中的目的基因扩增达到纳克、微克、毫克级的特异性DNA 片段。
因此，PCR技术一经问世就被迅速而广泛地用于分子生物学的各个领域。
它不仅可以用于基因的分离、克隆和核苷酸序列分析，还可以用于突变体和重组体的构建，基因表达调控的研究，基因多态性的分析，遗传病和传染病的诊断，肿瘤机制的探索，法医鉴定等诸多方面。
通常，PCR在分子克隆和DNA分析中有着以下多种用途：(1) 生成双链DNA中的特异序列作为探针；(2) 由少量mRNA生成 cDNA文库；(3) 从cDNA中克隆某些基因；(4) 生成大量DNA以进行序列测定；(5) 突变的分析；(6) 染色体步移；(7) RAPD、AFLP、RFLP等DNA多态性分析等。
一、试剂准备1. DNA模版2．对应目的基因的特异引物3．10×PCR Buffer4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM5．Taq酶二、操作步骤1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5 μldNTP mix （2mM） 4 μl引物1（10pM） 2 μl引物2（10pM） 2 μlTaq酶（2U/μl） 1 μlDNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl加ddH2O至 50 μl视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
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PCR 扩增缓冲液(10×,pH8.3)
简介：
Tris(三羟甲基氨基甲烷)为弱碱，分子式为C 4H 11NO 3，相对分子量为121.14, 在25℃下pKa 为8.1，Tris 缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0～9.2之间，用来作为各种缓冲液的基础成分，调节酸碱度。
PCR 扩增缓冲液(10×,pH8.3)由Tris-HCl 缓冲液(pH8.3)、Mg 2+、500mM KCl 等组成，经高压灭菌处理，作为Taq 酶等扩增酶类的反应缓冲液。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 按实验具体要求操作。
2、 PCR 扩增缓冲液(10×,pH8.3)工作浓度。
注意事项：
1、 注意避免反复冻融，否则扩增效率容易下降。
2、 并且避免微生物污染。
3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
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