反相高效液相色谱法测定非洛地平缓释片的含量

反相高效液相色谱法测定非洛地平缓释片的含量目的：建立反相高效液相色谱法测定非洛地平缓释片含量的方法。

方法：
采用Shim-pack CLC-ODS 十八烷基硅烷键合硅胶柱(6.0 mm×150 mm，5 μm)，流动相为0.025 mol/L磷酸二氢钾［用磷酸调节pH至（3.00±0.05)］-乙腈-甲醇（32∶45∶23），流速为1.0 ml/min，检测波长为238 nm，柱温为35℃。

结果：在5～100 μg/ml浓度范围内，非洛地平峰面积与浓度呈良好的线性关系，r=0.999 5，平均回收率为99.75%，RSD为0.71%，且非洛地平与其他杂质峰的分离度均符合要求。

结论：本方法简便、专属性强、准确可靠，可用于非洛地平缓释片的质量控制。

[Abstract] Objective:To establish a practical reversed-phase HPLC method to determine Felodipine Sustained-release Tablets. Methods:The Shim-pack CLC-ODS C18 column(6.0 mm×150 mm, 5 μm) was adopted.The mobile phase was a mixture of 0.025 mol/L dibasic potassium phosphate［pH to （3.00±0.05）by phosphoric acid］-acetonitrile-methanol(32∶45∶23) with a flow rate of 1.0 ml/min,the detection wavelength was set at 238 nm and the column temperature was maintained at 35℃. Results:The calibration curves were linear within the range of 5-100 μg/ml(r=0.999 5),the average recovery was 99.75% with a RSD of 0.71%.The resolution between the respective peaks of Felodipine and the other components were conformed to the requirements. Conclusion:This method is simple,sensitive,accurate,and suitable for the quality control of Felodipine Sustained-release Tablets.
[Key words] RP-HPLC; Felodipine Sustained-release Tablets; Content determination; Quality control
非洛地平缓释片为二氢吡啶类的钙通道阻滞剂，可单独或与其他抗高血压药物联合用于高血压的治疗。

此药与尼群地平和其他钙通道阻滞剂可逆性地竞争二氢吡啶结合位点，可阻断血管平滑肌和人工培养的兔心房细胞的电压依赖性Ca2+电流，并阻断K+诱导的鼠门静脉挛缩。

体外研究表明，其对血管平滑肌选择性抑制作用强于对心肌的作用。

本品可使外周血管阻力下降从而降低血压，在动物和人体内的观察中发现，该药能降低外周血管阻力从而产生轻度利尿作用，可减低肾血管阻力而不影响肾小球滤过。

国家食品药品监督管理局的标准中，测定非洛地平缓释片含量的方法为紫外可见分光光度法，检测波长为361 nm[1]。

本文参照《中国药典》2005年版，采用反相高效液相色谱法测定非洛地平缓释片的含量，本方法简便、专属、准确、可靠、精密度和稳定性均良好[2]。

1仪器与试药
1.1 仪器
Waters2695型高效液相色谱仪(美国Waters公司)；Waters 2996型PDA检测器；Empower数据处理系统。

1.2 试药
非洛地平缓释片(合肥立方制药有限公司，批号为070407、080323、080422、080516、080522)；非洛地平对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100717-200501，100.0％，使用前不需要干燥处理)；乙腈、甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾、磷酸为分析纯；水为超纯水（南京易普易达科技发展有限公司纯水机）。

2方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为Shim-pack CLC-ODS十八烷基硅烷键合硅胶柱(6.0 mm×150 mm，5 μm)；流动相为0.025 mol/L磷酸二氢钾［用磷酸调节pH值至（3.00±0.05)］-乙腈-甲醇（32∶45∶23）；流速为1.0 ml/min；检测波长为238 nm；柱温为35℃；进样量为20 μl。

理论塔板数按非洛地平峰计算不低于2 000。

2.2 溶液的制备
2.2.1对照品溶液的制备取非洛地平对照品适量，精密称定，置100 ml容量瓶中，加流动相适量振摇、溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取适量置容量瓶中，加流动相制成1 ml含10 μg非洛地平的溶液，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于非洛地平10 mg)，置100 ml容量瓶中，加流动相适量，振摇溶解15 min，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤；精密量取续滤液适量置容量瓶中，加流动相制成1 ml含10 μg非洛地平的溶液，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.3空白对照溶液的制备以相同的处方比例，制得不含非洛地平的空白样品，按“2.2.2”项下方法制成空白对照溶液。

2.3 干扰试验
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液以及空白对照溶液各20 μl按“2.1”中色谱条件注入液相色谱仪进行分析。

结果表明，供试品色谱图中呈现与非洛地平对照品保留时间相应的色谱峰，且空白对照无干扰。

见图1。

2.4 线性关系的考察
精密称取非洛地平对照品25 mg，置100 ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；精密量取对照品贮备液1、1、2、4、6、8、10 ml分别置50、25、25、25、25、25、25 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，进样，记录峰面积。

以对照品浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标进行线性回归，得回归方程为A=2.654×102 C＋1.462，r=0．999 5。

结果表明
非洛地平在5～100 μg/ml范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验
精密量取线性关系考察项下的对照品贮备液1、2、6 ml，分别置25 ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，在上述色谱条件下，分别连续进样5次，记录色谱图。

结果峰面积的RSD(n=5)分别为0.70％、0.16％、0.37％，表明本方法精密度良好。

2.6 稳定性试验
将对照品溶液及供试品溶液室温放置，分别在0、1、2、4、6、8 h进样20 μl 测定1次，结果表明对照品溶液及供试品溶液在8 h内峰面积无明显变化，RSD 均小于1.5％，表明溶液在8 h内基本稳定。

2.7 重复性试验
精密称取同批号样品(批号为080323)6份，按“2.2.2”项下方法操作，制得6份供试品溶液，各吸取20 μl进样，计算含量，RSD为0.77％，结果表明重现性较好。

2.8 回收率试验
精密称取同一己知含量的样品(批号为080323)适量，加流动相制成1 ml含0.5 mg非洛地平的溶液，精密量取2 ml共6份,分别加入50 ml容量瓶中，再分别精密加入上述对照品贮备液(252 μg/ml)1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml，照“2.2.2”项下操作，并按“2.1”中色谱条件进行测定。

结果见表1，测得平均回收率为99.75％，RSD为0.71％(n=6)。

表 1 回收率试验
2.9 样品测定
按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，进样测定非洛地平缓释片(批号为070407、080323、080422、080516、080522)中非洛地平的含量，结果见表2。

5批样品中非洛地平的标示百分含量均在95.0％~105.0％范围内，RSD均小于1.5％,并与UV法测定的结果进行比较。

结果见表2。

表 2 样品测定结果
3 讨论
取非洛地平对照品溶液在200～400 nm波长范围内进行紫外扫描，在238 nm、361 nm波长处均有最大吸收，经比较选择238 nm作为测定波长，在该波长
处检测灵敏度高(A238约为A361的2.9倍)，且重现性好。

国家食品药品监督管理局标准中，测定非洛地平缓释片含量的方法为紫外分光光度法(检测波长为361 nm)[1]，此方法测定时，辅料和包衣材料均有可能产生吸收叠加而干扰测定。

本文所述反相高效液相色谱法简便、专属，不受辅料及其他成分影响，可用于非洛地平缓释片的质量控制。

[参考文献]
[1]国家食品药品监督管理局标准（试行）[S].YBH07522004.
[2]国家药典委员会.中国药典[S].二部.北京:化学工业出版社,2005.。