ABTS缓冲液(pH5.0)
缓冲液配制操作规程
目的：建立缓冲液的配制操作规程,使配制操作规范化。
范围：缓冲液的配制操作。
责任人：QC员、QC主管。
内容：1磷酸盐缓冲液（PH6.8）：取0.2mol/L磷酸二氢钾液250ml，加0.2mol/l 氢氧化钠溶液118ml，用水稀释至1000ml，摇匀，即得。
2醋酸缓冲液（PH4.0）：冰醋酸286ml与50%氢氧化钠溶液1ml，置1000ml 量瓶中，加蒸馏水900ml振摇。
用冰醋酸或50%氢氧化钠溶液调PH至4.0，再用蒸馏水稀释到刻度。
3磷酸盐缓冲液（PH5.0）：取磷酸二氢钾13.6g，加水溶解后稀释到2000ml，用8mol/L氢氧化钾溶液调节PH值至5.0±0.1)。
4磷酸盐缓冲液（PH7.0）：取磷酸二氢钾3.02g与磷酸氢二钾6.2g，加水溶解成1000ml。
5磷酸盐缓冲液（PH7.4）：取磷酸二氢钠2.280g磷酸氢二钠11.50g,加水至1000ml，即得。
6磷酸盐缓冲液（PH7.8）：甲液：取磷酸氢二钠35.9g,加水溶解，并稀释至500ml。
乙液：取磷酸二氢钠2.76g,加水溶解，并稀释至100ml。
取上述甲液91.5ml与乙液8.5ml混合，摇匀，即得。
7醋酸盐缓冲液（PH3.5）：取醋酸铵25g，加水25ml溶解后，加7mol/L盐酸溶液38ml，用2mol/L盐的溶液或5mol/L氨溶液准确调节PH 值至3.5（电位法指示），用水稀释至100ml，即得。
8酸盐缓冲液（PH6.0）：取磷酸氢二钾2g与磷酸二氢钾8g加水使成1000ml，滤过，在115℃灭菌30分钟。
9磷酸盐缓冲液（PH7.8）：取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g，加水使成1000ml，滤过，在115℃灭菌30分钟。
缓冲液配制操作规程编号ZL-C-703版次：01第 2 页共 2 页10磷酸盐缓冲液PH10.5) ：取磷酸氢二钾35g，加10mol/L氢氧化钾溶液2ml，加水使成1000ml，滤过，在115℃灭菌30分钟。
最全常用缓冲液配方及缓冲范围
最全常用缓冲液配方及缓冲范围缓冲液是一种能够维持溶液pH值相对稳定的溶液。
它可以减少酸碱反应的影响，使物质在酸碱环境中保持稳定。
在生命科学实验室和工业生产中，常用的缓冲液有许多种。
下面是最常用的一些缓冲液配方及其缓冲范围。
1. Phosphate缓冲液：Phosphate缓冲液通常由磷酸二氢盐和磷酸氢二盐组成。
它的pH范围为2.1-7.4，在生物化学和细胞生物学实验中得到广泛应用。
配方1：-0.1M磷酸二氢盐，pH2.0-2.8-0.2M磷酸氢二盐，pH5.8-7.4配方2：-0.1M磷酸二氢盐，pH2.1-3.1-0.2M磷酸氢二盐，pH5.6-7.42. Tris缓冲液：Tris缓冲液由三羟甲基氨基甲烷（Tris）和其酸盐组成。
它的pH范围为7-9，在分子生物学和生化实验中广泛使用。
配方：- 1 M Tris HCl，pH 7.4-9.0- 1 M Tris base，pH 7.0-9.23.MES缓冲液：MES缓冲液是一种针对中性pH值（5.5-6.7）的缓冲液，常用于细胞生物学和酶活性实验。
配方：-0.1MMES，pH5.5-6.74.HEPES缓冲液：HEPES缓冲液是一种适用于细胞培养和酶活性实验的缓冲液，其pH 范围为6.8-8.2配方：-0.1MHEPES，pH6.8-8.25.CAPS缓冲液：CAPS缓冲液是一种适用于生化实验的缓冲液，其pH范围为9.7-11.1配方：-0.1MCAPS，pH9.7-11.1这些是最常用的缓冲液配方及其缓冲范围，可以根据实验的需要选择合适的缓冲液。
需要注意的是，在配制缓冲液时应使用高纯度的化学品，并根据实验要求精确控制缓冲液的pH值。
此外，在实验过程中应注意缓冲液的保存和稳定性，以确保实验结果的准确性。
不同pH值磷酸缓冲液的配置之欧阳地创编
不同PH值磷酸缓冲液得配置酸盐缓冲液(pH2.0)甲液:取磷酸16.6ml，加水至1000ml，摇匀。
乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。
取上述甲液72.5ml与乙液27.5ml混合，摇匀，即得。
磷酸盐缓冲液(pH2.5)取磷酸二氢钾100g，加水800ml，用盐酸调节pH至2.5,用水稀释至1000ml，记得。
磷酸盐缓冲液(pH5.0)取0.2mol/L磷酸二氢钠溶液一定量,用氢氧化钠试液调节pH值至5.0，即得。
磷酸盐缓冲液(pH5.8)取磷酸二氢钾8.34g与磷酸氢二钾0.87g,加水溶解成1000ml，即得。
磷酸盐缓冲液(pH6.5)取磷酸二氢钾0.68g,加0.1mol/L氢氧化钠溶液15.2ml，用水稀释至100ml，即得。
磷酸盐缓冲液(pH6.6)取磷酸二氢钠 1.74g、磷酸氢二钠 2.7g与氯化钠1.7g，加水溶解成400ml，即得。
磷酸盐缓冲液(含胰酶)(pH6.8)取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解,用0.1mol/L 氢氧化钠溶液调节pH值至6.8；另取胰酶10g，加水适量使溶解，将两液混合后,加水稀释至1000ml，即得。
磷酸盐缓冲液(pH6.8)取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml，用水稀释至1000ml，摇匀，即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.0)取磷酸二氢钾0.68g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液29.1ml，用水稀释至100ml，即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.2)取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液50ml与0.2mol/L氢氧化钠溶液35ml，加新沸过的冷水稀释至200ml，摇匀，即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.3)取磷酸氢二钠1.9734g与磷酸二氢钾0.2245g,加水使溶解成1000ml，调节pH值至7.3，即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.4)取磷酸二氢钾1.36g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液79ml，用水稀释至200ml，即得。
常用缓冲液配方及缓冲范围
常用缓冲液配方及缓冲范围缓冲液是一种水溶液，其中含有在酸性或碱性条件下能够保持pH稳定的化学物质。
缓冲液广泛应用于生物化学、分子生物学、生物技术和医学等领域的实验和研究中。
下面是一些常用的缓冲液配方及其应用范围。
1. Tris缓冲液Tris缓冲液是一种中性缓冲液，常用于生物化学和分子生物学实验。
它的配方通常为：- 10 mM Tris base-1mMEDTA-向溶剂中调整pH至7.4Tris缓冲液可用于DNA和RNA的电泳、酶反应、细胞培养等实验中。
2.PBS缓冲液PBS（磷酸盐缓冲液）是一种常用的生物学缓冲液，具有缓冲能力强和与生物体液成分相似的特点。
它的配方通常为：-137mMNaCl-2.7mMKCl-10mMNa2HPO4-2mMKH2PO4-向溶剂中调整pH至7.4PBS缓冲液可用于细胞培养、免疫荧光染色、蛋白质凝胶电泳等实验中。
3.TAE缓冲液TAE（三乙酸缓冲液）是一种常用的核酸电泳缓冲液，其配方为：- 40 mM Tris base-20mM醋酸-1mMEDTA-向溶剂中调整pH至8.0TAE缓冲液可用于DNA和RNA的琼脂糖凝胶电泳，如聚丙烯酰胺凝胶电泳（）和琼脂糖凝胶电泳（agarose gel electrophoresis）。
4. Tris-HCl缓冲液Tris-HCl缓冲液是一种常用的酸性或碱性缓冲液。
它的配方基于Tris缓冲液，在Tris缓冲液基础上调整pH的方法是在配方中加入稀盐酸或稀氢氧化钠。
例如，对于Tris-HCl缓冲液的配方为：- 50 mM Tris base-向溶剂中加入HCl调整pH至所需的值（通常为7.2至9.0）Tris-HCl缓冲液可用于酶反应、蛋白质组学研究、PCR等实验中。
这只是一些常用的缓冲液配方，根据不同实验需求和物质稀释要求，还有其他许多缓冲液的配方。
对于缓冲液的选择，关键在于根据实验要求选取适当的缓冲体系，并对缓冲液中所需的化学物质浓度、pH值等进行精确调整。
ABTS法测酶活
ABTS 法测酶活
1、先配制0.1mol/L 的醋酸-醋酸钠缓冲液（pH =4.0）；
2、再配制0.5mmol/L 的ABTS ；（0.5mmol/L ABTS ：0.27434g ABTS 加入到1L 纯水中溶解即可。
（分子量为548.67））
3、在无菌的环境中提取1mL 的粗酶液，放入EP 管内；
4、用离心机对其离心（8000转2分钟），取上一定量的上清液，用醋酸-醋酸钠缓冲液进行稀释一定的倍数；
5、取一定量的ABTS 试剂，和稀释后的酶液分别在不同的试管内进行水浴（40℃，10min ）；也将比色皿冲洗干净放在干燥箱里，温度调到40℃；
6、尽量保持在40℃的温度下混合ABTS 和稀释后的酶液（比例1:1），当两种液体混合时开始计时，记录下第30s 和90s 两个时间点分光光度计的显示数（λ=420nm ）；
7、定义1 个酶活力单位用每分钟1μmol 的ABTS 被转化所需的酶量。
（原理是ABTS 被Lac 氧化，氧化产物的消光系数ε为3.6×104（mol/L ）-1·cm -1），所以酶活的换算按照下列公式：
t 10
6.31043
∆∆⨯⨯⨯D 酶液总体积反应液总体积。
ABTS 自由基清除能力检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4571
ABTS自由基清除能力检测试剂盒说明书货号：UPLC-MS-4571规格：100T/48S微量法产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体80mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体40mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×1支2-8℃保存试剂三液体20μL×1支2-8℃保存试剂四液体 1.5mL×1支-20℃保存试剂五粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前加入1mL蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂可分装后保存，-20℃可保存四周，避免反复冻融；2、试剂三工作液的配制：液体置于试剂瓶内EP管中。
临用前根据样本量按试剂三（μL）：蒸馏水（mL）=1μL:12mL的比例配成试剂三工作液，现用现配，用多少配多少，尽量在4h之内用完；3、试剂四工作液的配制：可先将试剂四-20℃分装保存。
临用前根据样本量按试剂四：试剂一（V:V）=1:9的比例配成试剂四工作液，现配现用，用不完的试剂放于-20℃可保存两周。
4、试剂五：粉剂置于试剂瓶内玻璃瓶中，含有5mg维生素C，临用前加入2.8mL提取液，充分振荡溶解；配成10mmol/L维生素C溶液，用于阳性对照。
2-8℃可保存两周。
5、ABTS工作液的配制：临用前根据试验所需量按试剂一：试剂二：试剂三工作液（V:V:V）=76:5:4的比例配成ABTS工作液，现用现配，室温避光保存，务必在30分钟内使用。
产品说明：ABTS法可用于亲水性和亲脂性物质抗氧化能力测定，是使用最广泛的间接检测方法。
ABTS经氧化后生成稳定的蓝绿色阳离子ABTS自由基，在405nm或734nm处有最大吸收峰。
被测物质加入ABTS自由基溶液后，所含抗氧化成分能与ABTS自由基发生反应而使反应体系褪色，405nm的吸光度下降，在一定范围内其吸光度的变化与自由基被清除的程度成正比。
各种缓冲液的配制方法
各种缓冲液的配制方法缓冲液是一种用于调节溶液酸碱度（pH值）的溶液，它可以稳定溶液的pH值，满足实验的需要。
不同实验需要使用不同pH值的缓冲液，因此配制方法也会有所不同。
下面将介绍常见的几种缓冲液的配制方法。
1.磷酸盐缓冲液：磷酸盐缓冲液是最常用的一种缓冲液，在生物化学和分子生物学实验中广泛应用。
配制方法：-0.2M磷酸盐酸（pH2.5）：用稀磷酸（H3PO4）溶液调节酸度至所需pH值。
-0.2M磷酸盐盐（pH2.5）：用0.2M磷酸钠（Na2HPO4）溶液调节碱度至所需pH值。
-混合上述两种液体，按体积比例混合即可配制所需pH值的磷酸盐缓冲液。
2.乙酸缓冲液：乙酸缓冲液常用于酶催化反应的研究和生物制剂的稳定。
配制方法：-0.1M乙酸酸（pH3.6）：用浓烧碱（CH3COOH）溶液调节酸度至所需pH值。
-0.1M乙酸盐（pH3.6）：用0.1M乙酸钠（CH3COONa）溶液调节碱度至所需pH值。
-混合上述两种液体，按体积比例混合即可配制所需pH值的乙酸缓冲液。
3.碳酸氢盐缓冲液：碳酸氢盐缓冲液常用于生命科学实验中。
配制方法：-0.1M碳酸酸（pH6.0）：用稀碳酸（H2CO3）溶液调节酸度至所需pH 值。
-0.1M碳酸盐（pH6.0）：用0.1M碳酸氢钠（NaHCO3）溶液调节碱度至所需pH值。
-混合上述两种液体，按体积比例混合即可配制所需pH值的碳酸氢盐缓冲液。
4. Tris缓冲液：Tris缓冲液是一种多用途的缓冲液，在生物化学和分子生物学研究中广泛应用。
配制方法：- 0.1 M Tris酸（pH 8.0）：用三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液调节酸度至所需pH值。
- 0.1 M Tris盐（pH 8.0）：用0.1 M Tris盐溶液调节碱度至所需pH值。
- 混合上述两种液体，按体积比例混合即可配制所需pH值的Tris缓冲液。
配制缓冲液时需要准备所需浓度的酸液和盐液，然后根据所需pH值逐渐调整酸度和碱度至目标值。
常用的单克隆抗体检测方法
常用的单克隆抗体检测方法通过杂交瘤技术制备单克隆抗体，在杂交瘤制备完成后，需要对抗体进行一个检测，本文介绍了几种常用的抗体检测的方法（1）免疫酶技术免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性和酶对底物显色反应的高效催化作用有机结合而成的免疫学技术。
由于它特异性强，灵敏度高，现已广泛用于筛选和鉴定单抗。
①器材和试剂a、包被缓冲液：碳酸盐缓冲液：取0.2mol/L Na2CO3 8ml，0.2mol/L NaHCO3 17ml 混合，再加75ml蒸馏水，调PH至9.6。
Tris-HCl缓冲液（PH8.0，0.02mol/L）：取0.1mol/L Tris 100ml，0.1mol/L HCl 58.4ml混合，加蒸馏水至1000ml。
b、洗涤缓冲液（PH7.2的PBS）：KH2PO4 0.2g，KCl 0.2g，Na2HPO4·12H2O 2.9g，NaCl 8.0g，Tween-20 0.5ml，加蒸馏水至1000ml。
c、稀释液和封闭液：牛血清白蛋白（BSA）0.1g，加洗涤液至100ml；或用洗涤液将小牛血清配成5-10%使用。
d、酶反应终止液（2mol/L H2SO4）：取蒸馏水178.3ml，滴加浓硫酸（98%）21.7ml。
e、底物缓冲液（PH5.0，磷酸盐-柠檬酸缓冲液）：取0.2mol/L Na2HPO4 25.7ml，0.1ml/L柠檬酸24.3ml，再加50ml蒸馏水。
柠檬酸溶液及配成的底物缓冲液不稳定，易形成沉淀，因此一次不宜配制过多。
f、底物使用液：OPD底物使用液（测490nm的OD值）：OPD 5mg，底物缓冲液10ml，3% H2O20.15ml。
TMBS或TMB底物使用液（测450nm的OD值）：TMBS或TMB（1mg/ml）1.0ml，底物缓冲液10ml，1% H2O2 25ul。
ABTS底物使用液（测410nm的OD值）：ABTS 0.5mg，底物缓冲液1ml，3% H2O2 2ul。
abts检测原理
abts检测原理宝子们！今天咱们来唠唠ABTS检测原理这个超有趣的事儿。
ABTS呀，它是一种可用于检测抗氧化活性的试剂呢。
想象一下，在一个小小的化学世界里，ABTS就像一个特别的小侦探。
它原本是一种蓝绿色的溶液哦。
这个溶液里的ABTS分子就像是一群整装待发的小士兵，每个分子都有着自己独特的结构和性质。
当我们要检测某个东西的抗氧化能力的时候呢，就把这个待检测的样品，比如说可能是一种植物提取物，或者是某种营养补充剂，放进ABTS溶液里。
如果这个样品具有抗氧化性，那就像是这个样品里有一群超级英雄。
这些超级英雄呢，会和ABTS小士兵发生反应。
抗氧化物质会把ABTS小士兵从原本的蓝绿色状态变成另一种颜色，一般是变成绿色或者无色。
这就好比超级英雄把小士兵的蓝绿色制服给换了，或者直接让小士兵隐身了一样，超级神奇呢！那为啥会这样呢？这是因为抗氧化物质具有提供电子或者氢原子的能力。
ABTS分子呢，在溶液里是一种阳离子自由基的状态，它特别渴望得到电子或者氢原子来让自己变得更稳定。
当抗氧化物质出现的时候，就慷慨地把电子或者氢原子给了ABTS阳离子自由基。
这个过程就像是一场慷慨的赠予仪式。
ABTS得到了这些电子或者氢原子之后，它的化学结构就发生了变化，从而导致颜色也跟着改变啦。
而且呀，这个颜色变化的程度和抗氧化物质的抗氧化能力是成正比的哦。
如果我们放进ABTS溶液里的样品抗氧化能力特别强，那ABTS溶液的颜色就会变得特别淡，甚至完全无色。
就像超级英雄的力量特别强大，一下子就把所有的ABTS小士兵都改变了状态。
相反，如果样品的抗氧化能力比较弱，那ABTS溶液的颜色可能只是稍微变浅一点，从蓝绿色变成浅绿色这样。
我们还可以通过一些仪器，像分光光度计来精确地测量ABTS溶液颜色变化前后在特定波长下的吸光度。
根据吸光度的变化值，就能准确地算出这个样品的抗氧化活性啦。
这就像是给超级英雄们的能力打分一样，吸光度变化大的，抗氧化能力得分就高，变化小的，得分就低。
常用的单克隆抗体检测方法
常用的单克隆抗体检测方法通过杂交瘤技术制备单克隆抗体，在杂交瘤制备完成后，需要对抗体进行一个检测，本文介绍了几种常用的抗体检测的方法（1）免疫酶技术免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性和酶对底物显色反应的高效催化作用有机结合而成的免疫学技术。
由于它特异性强，灵敏度高，现已广泛用于筛选和鉴定单抗。
①器材和试剂a、包被缓冲液：碳酸盐缓冲液：取0.2mol/L Na2CO3 8ml，0.2mol/L NaHCO3 17ml 混合，再加75ml蒸馏水，调PH至9.6。
Tris-HCl缓冲液（PH8.0，0.02mol/L）：取0.1mol/L Tris 100ml，0.1mol/L HCl 58.4ml混合，加蒸馏水至1000ml。
b、洗涤缓冲液（PH7.2的PBS）：KH2PO4 0.2g，KCl 0.2g，Na2HPO4·12H2O 2.9g，NaCl 8.0g，Tween-20 0.5ml，加蒸馏水至1000ml。
c、稀释液和封闭液：牛血清白蛋白（BSA）0.1g，加洗涤液至100ml；或用洗涤液将小牛血清配成5-10%使用。
d、酶反应终止液（2mol/LH2SO4）：取蒸馏水178.3ml，滴加浓硫酸（98%）21.7ml。
e、底物缓冲液（PH5.0，磷酸盐-柠檬酸缓冲液）：取0.2mol/L Na2HPO4 25.7ml，0.1ml/L柠檬酸24.3ml，再加50ml蒸馏水。
柠檬酸溶液及配成的底物缓冲液不稳定，易形成沉淀，因此一次不宜配制过多。
f、底物使用液：OPD底物使用液（测490nm的OD值）：OPD 5mg，底物缓冲液10ml，3% H2O20.15ml。
TMBS或TMB底物使用液（测450nm的OD值）：TMBS或TMB（1mg/ml）1.0ml，底物缓冲液10ml，1% H2O2 25ul。
ABTS底物使用液（测410nm的OD值）：ABTS 0.5mg，底物缓冲液1ml，3% H2O2 2ul。
ELISA方法详细过程及步骤
ELISA方法详细过程及步骤ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。
它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。
此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。
(一)原理ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。
由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。
在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。
即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。
比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。
(二)操作步骤方法一用于检测未知抗原的双抗体夹心法:1.包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。
在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。
次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。
(简称洗涤，下同)。
2.加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。
然后洗涤。
(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3.加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度) 0.1ml。
37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
4.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
5.终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。
也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
abts抗氧化实验步骤
abts抗氧化实验步骤ABTS抗氧化实验步骤引言：抗氧化实验是研究食物、药物或其他化合物抵抗氧化应激的能力的重要方法之一。
ABTS（2,2'-联氨基二(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)）是一种常用的抗氧化实验试剂，通过测定其与自由基的反应来评估物质的抗氧化能力。
本文将介绍ABTS抗氧化实验的步骤。
一、实验前准备1. 准备所需试剂和仪器：ABTS、过氧化氢、乙酸乙酯、磷酸盐缓冲液、离心管、离心机、分光光度计等。
2. 预热分光光度计：将分光光度计设定在所需的波长（通常为734 nm），并预热至稳定状态。
二、制备ABTS溶液1. 称取适量ABTS粉末，并加入适量磷酸盐缓冲液，溶解后稀释至所需浓度（通常为7 mM）。
2. 加入相同体积的过氧化氢溶液（通常为 2.45 mM），混匀后静置室温下30分钟，使ABTS与过氧化氢反应生成自由基。
三、样品预处理1. 根据需要，将待测样品（食物、药物或其他化合物）制备成适当的浓度溶液。
2. 对样品进行必要的预处理，如过滤、离心等，以去除杂质。
四、测定抗氧化能力1. 取适量ABTS溶液，并加入等体积的样品溶液，混匀后静置室温下反应一段时间（通常为6分钟）。
2. 将反应液倒入离心管中，离心5分钟使样品沉淀。
3. 取上清液，用离心机离心5分钟，以去除残留的样品颗粒。
4. 用预热好的分光光度计测定上清液的吸光度（OD值）。
5. 测定空白对照组，即只加入样品溶液的ABTS溶液的吸光度。
6. 根据所测得的吸光度计算样品的抗氧化能力。
一般来说，吸光度越低，抗氧化能力越强。
五、数据分析1. 计算样品的抗氧化能力指数（TEAC值），通常使用标准曲线法或对照差法。
2. 根据所使用的方法，将样品的TEAC值转化为抗氧化能力指数单位，如mmol TE/100 g。
六、结果与讨论1. 根据实验结果，评估样品的抗氧化能力。
2. 结果的解释应结合样品的特性和实验条件，进行合理的讨论。
结论：ABTS抗氧化实验是一种常用的评估物质抗氧化能力的方法，通过测定样品与ABTS自由基的反应来评估其抗氧化活性。
酶活的测定方法
酶活测试及试剂1 木素过氧化物酶（Lip）：3ml反应体系：①0.1mol/L酒石酸缓冲液(pH3.0) 1.5mL；②10mmol/L藜芦醇1.0mL；③粗酶液0.4mL；④10mmol/L H202 0.1mL启动反应，25℃反应3min。
于310nm测其光密度，以1.0mL缓冲液代替藜芦醇作空白对照，定义每分钟使1μmol的藜芦醇氧化成藜芦醛所需的酶量为一个酶活力单位(U)，藜芦醛的摩尔吸光系数9 300 mol-1cm-1。
0.1mol/L酒石酸缓冲液(pH3.0)：配0.1mol/L的酒石酸和酒石酸钠溶液各100mL，然后分别取出部分混合均匀至pH值为3.0。
（酒石酸：分子量75，0.1mol/L溶液为7.5g/L。
酒石酸钠：分子量230，0.1mol/L溶液为23g/L）10mmol/L藜芦醇：1.682g藜芦醇添加到1L水中即可（试剂藜芦（3,4-Dimethoxybenzyl alcohol）的分子量为168.19）10mmol/L H202（按1L计算）：称取1.13g过氧化氢试剂加入到1L纯水中即可（原试剂含30% H202）2 锰过氧化物酶（MnP）：3ml反应体系：① 0.05mol/L琥珀酸缓冲液（丁二酸）(pH4.5) 2.0mL；②15mmol/LMnSO4 0.5mL；③粗酶液0.4mL；④10mmol/L H202 0.1mL启动反应，37℃反应3min。
240nm测吸光值变化。
三价锰离子的吸光系数为8100 M−1 cm−1）0.05mol/L琥珀酸缓冲液（丁二酸）(pH4.5)：配0.05mol/L的琥珀酸和琥珀酸钠溶液各100mL，然后分别取出部分混合均匀至pH值为4.5。
（琥珀酸：分子量118.09，0.05mol/L 溶液为5.9g/L。
琥珀酸钠：分子量270.15，0.05mol/L溶液为13.5g/L）15mmol/L MnSO4（按1L计算）：2.535g硫酸锰加入到1L纯水中溶解即可。
实验室常用缓冲液配置方案
实验室常用缓冲液配置方案实验室里，各种缓冲液就像是实验操作的基石，有了它们，实验才能顺利进行。
今天，我就来和大家分享一下，我积累十年的实验室常用缓冲液配置经验，保证你一看就懂，一学就会！一、磷酸盐缓冲液（PBS）PBS，这可是实验室的“老熟人”了。
配置方法如下：1.称取8克NaCl，0.2克KCl，1.44克Na2HPO4，0.24克KH2PO4，放入烧杯中。
2.加入800毫升去离子水，用玻璃棒搅拌至溶解。
3.用pH计调整溶液至7.4。
4.定容至1000毫升，过滤，分装，灭菌。
二、Tris缓冲液Tris缓冲液，用途广泛，特别是在蛋白质实验中，是不可或缺的。
1.称取121.1克Trisbase，放入烧杯中。
2.加入800毫升去离子水，用玻璃棒搅拌至溶解。
3.用浓HCl调整溶液至所需pH值。
4.定容至1000毫升，过滤，分装，灭菌。
三、醋酸缓冲液醋酸缓冲液，主要用于微生物实验和细胞培养。
1.称取5.7克NaAc·3H2O，放入烧杯中。
2.加入800毫升去离子水，用玻璃棒搅拌至溶解。
3.用冰醋酸调整溶液至所需pH值。
4.定容至1000毫升，过滤，分装，灭菌。
四、甘氨酸缓冲液甘氨酸缓冲液，适用于蛋白质电泳等实验。
1.称取15.1克甘氨酸，放入烧杯中。
2.加入800毫升去离子水，用玻璃棒搅拌至溶解。
3.用NaOH调整溶液至所需pH值。
4.定容至1000毫升，过滤，分装，灭菌。
五、氨水缓冲液氨水缓冲液，主要用于微生物实验。
1.量取100毫升浓氨水，放入烧杯中。
2.加入800毫升去离子水，搅拌均匀。
3.用浓HCl调整溶液至所需pH值。
4.定容至1000毫升，过滤，分装，灭菌。
六、硼酸缓冲液硼酸缓冲液，适用于核酸实验。
1.称取12.4克硼酸，放入烧杯中。
2.加入800毫升去离子水，用玻璃棒搅拌至溶解。
3.用NaOH调整溶液至所需pH值。
4.定容至1000毫升，过滤，分装，灭菌。
七、EDTA缓冲液EDTA缓冲液，主要用于金属离子螯合实验。
ELISA方法的及步骤
ELISA方法的及步骤(一) 原理ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。
由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。
在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。
即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。
比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。
(二) 操作步骤方法一用于检测未知抗原的双抗体夹心法:1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。
在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。
次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。
(简称洗涤，下同)。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。
然后洗涤。
(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。
37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。
也可测O·D 值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
方法二用于检测未知抗体的间接法：用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。
ABTS溶液的配置-ABTS溶液的配制方法-李熙灿-Xican Li
1ABTS +·溶液的配置方法：实验流程图李熙灿（广州中医药大学, 2017.10）【前言】ABTS +·自由基(亦称ABTS +·自由基离子)，并不是一个现成的试剂，无法购买。
只能通过购买粉末状ABTS 二铵盐，便将其氧化，得到ABTS +·自由基。
其反应可表示如下：N SO 3S -NH 4+C 2H 5N NNSSO 3-NH 4+C 2H 5ABTS 二铵盐(MW. 548.7)2,2′-Azino-bis(3-ethylbenzo-thiazoline-6-sulfonic acid diammonium salt)K 2S 2O 8N SO 3S -NH 4+C 2H 5N NNSSO 3-NH 4+C 2H 5- eABTS自由基图1 ABTS 二铵盐被氧化成ABTS +·自由基清除的反应式氧化剂通常是过二硫酸钾（K 2S 2O 8）。
ABTS +·自由基在734nm 处有最大吸收，所以，通常用A 734nm 来表反映ABTS +·自由基的浓度。
具体配制过程如下： 【实验流程图】图3 ABTS +·自由基清除实验流程图【文献】Xican Li, Qian Jiang, Tingting Wang, Jingjing Liu, Dongfeng Chen. Comparison of the Antioxidant Effects of Quercitrin and Isoquercitrin: Understanding the Rol e of the 6″-OH Group. Molecules 2016, 21(9), 1246; doi:10.3390/mol ecul es21091246【说明】1. 不论是用什么稀释，都要保证纯度,否则,有严重干扰.用不纯的水、回收的溶剂、以及质量不过关的“分析纯”试剂，都不行。
abts实验原理
abts实验原理宝子！今天咱们来唠唠ABTS实验原理这个超有趣的事儿。
ABTS啊，它其实是一种化学试剂呢。
你可以把它想象成一个超级敏感的小侦探，专门用来探寻抗氧化剂的秘密。
ABTS本身最初是一种阳离子自由基，也就是它带有正电荷，而且还很不稳定，就像一个精力超级充沛、到处乱蹦跶的小毛球。
那这个ABTS阳离子自由基是怎么来的呢？这就需要用到氧化剂啦，就像给它注入了一股超强的能量。
这个氧化剂把普通的ABTS变成了ABTS阳离子自由基，这时候的ABTS阳离子自由基是蓝绿色的哦，颜色可鲜亮啦。
现在，抗氧化剂要登场啦。
抗氧化剂就像是超级英雄，来拯救这个不稳定的ABTS 阳离子自由基啦。
抗氧化剂有个特殊的本事，就是能够给这个自由基提供电子。
你想啊，自由基它不稳定就是因为它缺电子，就像一个饿坏了的小怪兽，到处找吃的（电子）。
抗氧化剂就大方地把自己的电子分给这个自由基，就像给小怪兽喂食一样。
当抗氧化剂把电子给了ABTS阳离子自由基之后呢，神奇的事情就发生了。
这个ABTS阳离子自由基得到电子就变得稳定了，它的颜色也会发生变化呢。
从原来那种蓝绿色会慢慢变浅，这就像是小怪兽吃饱了，不再那么张牙舞爪，颜色也没那么鲜亮了。
我们就可以通过检测这个颜色的变化来知道抗氧化剂的能力啦。
如果抗氧化剂很厉害，给的电子多，那这个ABTS阳离子自由基的颜色就会变得很浅很浅；要是抗氧化剂能力一般，那颜色就不会变得那么明显。
就好比两个超级英雄，一个超级强大，一下子就能把小怪兽安抚得服服帖帖，另一个能力弱一点，小怪兽还是有点小脾气，颜色就还会比较深一点。
而且啊，我们还有专门的仪器来检测这个颜色变化的程度呢。
这个仪器就像是一个超级眼睛，能够很精准地看到颜色到底变了多少。
然后根据这个变化的程度，就能算出抗氧化剂的抗氧化能力啦。
是不是很神奇呀？在实际做这个ABTS实验的时候，也有很多小细节要注意呢。
比如说，这个ABTS 阳离子自由基的制备得很精确，要是氧化剂加多了或者加少了，那这个ABTS阳离子自由基就不是我们想要的那种状态啦。
ABTS缓冲液(pH5.0)
北京雷根生物技术有限公司
ABTS 缓冲液(pH5.0)
简介：
ABTS 缓冲液(pH5.0)主要由磷酸盐、乙酸钠等组成，pH5.0，是ABTS 反应的缓冲液，进而在酶标仪上读A 405吸光度值。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、根据实验具体要求操作。
注意事项：
1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 4个月有效。
相关：
编号 名称 CT0010 Storage ABTS 缓冲液(pH5.0) 100ml RT 使用说明书 1份 编号 名称 CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁) CC0130 胰蛋白酶-EDTA 溶液(0.25%:0.02%) CS0001 ACK 红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer) DC0032 Masson 三色染色液 NR0003 Lezol(总RNA 提取试剂) PW0053 Western 抗体洗脱液(碱性) TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD 比色法)。
ELISA所需缓冲液的配方
一、做ＥLISA确定抗原最佳包被浓度,做方阵滴定具体怎么做呢?选择好一份已知为阳性与阴性背景得标本,将您得抗原用1＊CＢ PH=9、6或1＊PB ＰＨ＝7、4进行倍比稀释(8个条件)后加入９6孔板每孔1０0ul。
(一般包被浓度100ng抗原或抗体／孔,最优包被条件需进行试验选择)4度过夜取出后甩干,加入20％NBS封闭每孔２０0ul、３７度2h热封,甩去后拍干即可。
将您HＲP或ＡP标记得抗原或二抗用酶标稀释液进行稀释(倍比稀释4个梯度)即可。
棋盘滴定就就是板酶交叉,同时带上阳性、阴性通过试验确定最佳P/N得包被搭配E得试验2。
抗原与抗体最佳工作浓度得确定抗原抗体反应要求在最适比例条件下进行,EＬＩSＡ反应试剂多,其工作浓度不同对结果影响较大,因此必须对包被抗原(抗体)与酶标抗体(抗原)进行最佳工作浓度得滴定与选择,以达到最佳得测定条件。
1)方阵(棋盘)滴定法选择包被抗原得工作浓度用包被液将抗原作一系列稀释(1:5０~l:800)后,按行进行包被、洗涤。
按列分别加入用稀释液１:１00稀释得强阳性、弱阳性、阴性参考血清及稀释液(作空白对照),保温,洗涤。
加工作浓度酶标抗体,洗涤,加底物显色,加酸终止反应后读取Ａ值、选择强阳性参考血清A值;为０.8左右,阴性参考血清Ａ值<０.1得包被抗原稀释度为工作浓度。
方阵(棋盘)法选择包被抗体与酶标抗体得工作浓度将抗体用包被液稀释为１0mg／L、lmｇ/L、0、1mg／Ｌ三个浓度按行包被,每一个浓度包被三行(每行3孔),分别在每个浓度包被得第一、二、三行中分别加入强阳性抗原,弱阳性抗原与阴性对照,将酶标抗抗体用稀释液稀释为1:l ００0、l:500０、l:1000０三个浓度,分别加入每个浓度包被得第一、二、三列中、加底物显色,加酸终止反应,分别读取A值。
以强阳性抗原液A值在0.8左右,阴性参考Ａ值〈０.１得条件为最适条件。
据此选择包被抗体与酶标抗体得最佳工作浓度、二、ELISA最适工作浓度得选择及标准化操作1最适工作浓度得选择ﻫ1。
常用的单克隆抗体检测方法
常用的单克隆抗体检测方法通过杂交瘤技术制备单克隆抗体，在杂交瘤制备完成后，需要对抗体进展一个检测，本文介绍了几种常用的抗体检测的方法〔1〕免疫酶技术免疫酶技术是将抗原抗体反响的特异性和酶对底物显色反响的高效催化作用有机结合而成的免疫学技术。
由于它特异性强，灵敏度高，现已广泛用于筛选和鉴定单抗。
①器材和试剂a、包被缓冲液：碳酸盐缓冲液：取0.2mol/L Na2CO3 8ml，0.2mol/L NaHCO3 17ml 混合，再加75ml蒸馏水，调PH至9.6。
Tris-HCl缓冲液〔PH8.0，0.02mol/L〕：取0.1mol/L Tris 100ml，0.1mol/L HCl 58.4ml混合，加蒸馏水至1000ml。
b、洗涤缓冲液〔PH7.2的PBS〕：KH2PO4 0.2g，KCl 0.2g，Na2HPO4·12H2O 2.9g，NaCl 8.0g，Tween-20 0.5ml，加蒸馏水至1000ml。
c、稀释液和封闭液：牛血清白蛋白〔BSA〕0.1g，加洗涤液至100ml；或用洗涤液将小牛血清配成5-10%使用。
d、酶反响终止液〔2mol/L H2SO4〕：取蒸馏水178.3ml，滴加浓硫酸〔98%〕21.7ml。
e、底物缓冲液〔PH5.0，磷酸盐-柠檬酸缓冲液〕：取0.2mol/L Na2HPO4 25.7ml，0.1ml/L柠檬酸24.3ml，再加50ml蒸馏水。
柠檬酸溶液及配成的底物缓冲液不稳定，易形成沉淀，因此一次不宜配制过多。
f、底物使用液：OPD 底物使用液〔测490nm的OD值〕：OPD 5mg，底物缓冲液10ml，3% H2O2 0.15ml。
TMBS或TMB底物使用液〔测450nm的OD值〕：TMBS或TMB〔1mg/ml〕1.0ml，底物缓冲液10ml，1% H2O2 25ul。
ABTS底物使用液〔测410nm的OD值〕：ABTS 0.5mg，底物缓冲液1ml，3% H2O2 2ul。