多指标综合评分法优选黄芪三七合剂提取工艺

多指标综合评分法优选黄芪三七合剂提取工艺
兰杨1张仕瑾1王娅俐1郭廷东1唐志立1谢席胜2
1•川北医学院第二临床医学院四川省南充市中心医院药学部个体化药物治疗南充市重点实验室，四川南充637000；
2•川北医学院第二临床医学院四川省南充市中心医院肾内科，四川南充637000
［摘要］目的以多指标综合评分法结合正交设计优选黄芪三七合剂提取工艺。

方法以处方中有效成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸、人参皂苷Rg1含量以及浸膏得率的综合评分为评价指标，采用正交试验考察加水倍数、提取时间、提取次数对综合评分的影响。

结果优选的提取工艺为加10倍量水，提取4次，每次30min遥在此条件下，得到毛蕊异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸、人参皂苷Rg1平均含量均值分别为0.61、1.51、26.23mg/g,浸膏得率为
41.02%,RSD分别为0.94%、1.38%\1.20%、0.71%("=3)。

结论优选的工艺稳定可行,可作为该制剂的提取工艺。

［关键词］黄芪三七合剂;多指标综合评分；正交设计；毛蕊异黄酮葡萄糖苷；阿魏酸;人参皂苷Rg1；浸膏得率［中图分类号］R284.2［文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2021)04(a)-0023-04
Optimization of extraction process of Astragalus and Radix Notoginseng by multi index comprehensive score method
LAN Yang ZHANG Shijin'WANG Yali'GUO Tingdong TANG Zhili1XIE Xisheng2
1.Nanchong Key Laboratory of Individualized Drug Therapy,Department of Pharmacy,the Second Clinical Medical
College of North Sichuan Medical College Nanchong Central Hospital,Sichuan Province,Nanchong637000,Chi­na; 2.Department of Nephrology,the Second Clinical Medical College of North Sichuan Medical College Nanchong Central Hospital,Sichuan Province,Nanchong637000,China
[Abstract]Objective To optimize the extraction process of Astragalus and Radix Notoginseng by multi index compre­hensive score method combined with orthogonal design.Methods The contents of isoflavone glucoside,ferulic acid, ginsenoside Rg1in the prescription and the comprehensive score of extract yield were used as evaluation indexes.The effects of water multiple,extraction time and extraction times on the comprehensive score were investigated by orthogo­nal test.Results The optimal extraction process was to add ten times of water,extract four times,30min each time.
Under these conditions,the average content of isoflavone glucoside,ferulic acid,ginsenoside Rg1were0.61, 1.51,
26.23mg/g respectively,and the and extract yield was41.02%、and the RSD was0.94%、1.38%、1.20%、0.71%、re­
spectively(n=3).Conclusion The optimized process is stable and feasible,which can be used as the extraction pro­cess of this preparation.
[Key words]Astragalus and Radix Notoginseng;Multi index comprehensive score;Orthogonal design;Calycosin gluco­side;Ferulic acid;Ginsenoside Rg1;Extraction rate
黄芪三七合剂处方是四川省南充市中心医院肾内科谢席胜主任医生根据益气养血、活血利水、健脾助运治法结合多年临床经验总结得到的临床验方，该方由黄芪、三七、当归、牛膝、昆布、慧苡仁、山药、甘草等八味中药组成,临床用于治疗3耀4期慢性肾脏病，对［基金项目］四川省科技计划项目(21ZDYF2053)；四川省中医药管理局中医药科研专项(2018JC037、2018YY007)；四川省教育厅科研计划项目(18ZB0223)；四川省南充市首批重点实验室建设项目(NCKL201711)；四川省南充市市校合作科研专项(NSMC20170109、18SXHZ0453、19SXHZ0346)；川北医学院科研发展计划项目(CBY18-A-YB32)。

［作者简介］兰杨(1992.10-),男，硕士;研究方向：院内制剂开发。

［通讯作者］谢席胜(1966.4-),女，博士，主任医师；研究方向：中西医结合治疗肾脏病基础与临床研究。

改善慢性肾脏病患者临床症状以及延缓病情向终末期发展具有显著疗效［1-2］。

已有文献报道［3-5］,黄芪中活性成分毛蕊异黄酮葡萄苷具有抗炎、抗病毒、免疫抑制的作用;当归中阿魏酸抗氧化能力较强,能有效地清除多种自由基，同时还具有抗血栓、抗病毒、免疫调节等多种药理活性;三七中人参皂苷Rg1具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、保护肾脏的作用。

本方以汤剂的形式在临床上使用,由于慢性肾脏病患者需长期服药,汤剂煎煮麻烦，储藏和携带不便。

因此，为提高患者顺应性，同时保证临床疗效，在不改变原汤剂物质基础的前提下，将其开发成服用方便、疗效稳定的合剂。

本实验以人参皂苷Rg1、毛蕊异黄酮葡萄苷、阿魏酸三者的含量及浸膏得率的综合评分为评价指标，采用正交试验优选提取工艺参数,为该制剂后续研究奠定基础遥CHINA MEDICAL HERALD Vol.18No.10April2021|23
1材料1.1仪器
LC-16高效液相色谱仪(日本岛津公司冤; TGL-
18M 台式高速冷冻离心机(盐城市凯特实验仪器有限 公司)；BP211D 电子分析天平(精密度十万分之一，北
京赛多利斯)。

1.2试药与试剂
阿魏酸对照品(批号：110773-201915)、毛蕊异黄 酮葡萄糖苷对照品(批号：111920-201907)、人参皂苷 Rg1对照品(批号：110703-202034 )均购自中国食品
药品检定研究院;实验所用饮片均购自四川省中药饮 片有限公司，由四川省南充市中心医院药学部郭廷东
主任中药师鉴定,均符合2015版《中华人民共和国 药典)'6'相关项下要求。

乙腈为色谱纯,水为蒸馏水,
其余试剂均为分析纯。

2方法与结果2.1毛蕊异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸及人参皂苷Rg1含
量测定方法
2.1.1色谱条件 参考相关文献[7-9],色谱柱为SHIMADZU-
GL inertsil 5(4.6 mmx150 mm,5 滋m)；以 乙月青(A)-
0.1%磷酸水(B)作为流动相,梯度洗脱：0~18 min,
19% A ；18~25 min,19%~24% A ；25~55 min,24% A ；
55~60 min,24%~19% A ；检测波长:毛蕊异黄酮葡萄糖 苷(260 nm),阿魏酸(320 nm),人参皂苷 Rg1 (203 nm)；
柱温：35益;流速：1 mL/min ;进样量：10滋L 。

2.1.2对照品溶液的制备 精密称定毛蕊异黄酮葡萄
糖苷对照品、阿魏酸对照品、人参皂苷Rg1对照品适 量，置100 mL 容量瓶中，加甲醇制成每1 mL 含毛蕊
异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸、人参皂苷Rg1分别为463、
112.3,92.6滋g 的混合对照品溶液。

2.1.3供试品溶液的制备 精密吸取正交试验项下提
取液10 mL 至25 mL 容量瓶中，用75 %甲醇稀释至刻
度，摇匀，滤过，即得。

2.1.4线性关系考察 精密吸取“2.1.2”项下混合对照
品溶液1、2、4、6、8、10 滋L,按“2.1.1”项下色谱条件进
样分析。

以进样量为横坐标(X ),峰面积(Y )为纵坐标
进行线性回归，得线性范围和回归方程。

见表1o 结果
显示各成分在进样范围内与峰面积呈良好线性关系。

(n v m )
曽=
(HVE)
胃
®时间渊min]
b(260m)
6 ' i ' 10 15 20 2^ 30 « 40 6 4 10 15 20 2^ 30 40
时间(min ) 时间(min )
a :混合对照品；
b 、
c 、
d :供试品。

1:毛蕊异黄酮葡萄糖苷；2:阿魏酸；3:人参皂苷Rg1
图1混合对照品、供试品高效液相色谱图
表1线性范围和回归方程
成分
线性范围(滋g)
回归方程r 值
毛蕊异黄酮葡萄糖苷0.0463~0.4630 Y =二 325 014X-2722
0.9999
阿魏酸0.1123~1.1230 Y =二 2 272 236X-89640.9998人参皂苷Rg1
0.0926~0.9260 Y =352 314X-848
0.9998
2.2评价指标
以处方中有效成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷、阿魏 酸、人参皂苷Rg1的含量以及浸膏得率的综合评分为
指标,根据方剂君臣佐使的配伍理念以及各指标在处
方中的相对重要性分配权重系数，各指标权重系数依
24 CHINA MEDICAL HERALD Vol. 18 No. 10 April 2021
次设为。

点、。

.？、。

.？、。

』""。

综合评分=毛蕊异黄酮葡
萄糖苷含量/毛蕊异黄酮葡萄糖苷最大含量x0.5x
100+阿魏酸含量/阿魏酸最大含量x0.2x100+人参皂
苷Rg1/人参皂苷Rg1最大含量x0.2x100+浸膏得率/
最大浸膏得率x0•1x100o
2.3浸膏得率的测定
取正交试验项下提取液50 mL,置已干燥至恒重
的蒸发皿中(A J,水浴蒸干，105益干燥3 h,置干燥器
中冷却至室温，立即称定质量(A 2)，浸膏得率=半煞
x
U x100%,A 为处方药材质量,U 为提取液体积［14-17］o
2.4正交试验优选提取工艺参数
在前期单因素试验基础上,选择加水倍数、提取
时间、提取次数作为正交试验考察因素，因素水平见 表2,试验结果见表3,方差分析见表4o 试验结果采
用SPSS 17.0软件进行统计分析，由表4方差分析结果 显示C 因素具有显著性(P < 0.05),A 、B 因素均无显 著性,为了降低生产成本和提高生产效率,确定最佳 提取工艺条件为A 2B 1C 3，即加10倍量水，提取4次，
每次 30 min ［18-20］o
表3正交试验设计及结果
表2正交试验因素水平
水平加水倍数A (倍)提取时间B(h)
提取次数C (次)
1
7
0.52210 1.033
13
1.5
4
表4方差分析结果
编号A B C 毛蕊异黄 酮葡萄糖 苷(mg/g)
阿魏酸(mg/g)
人参皂 苷Rg1
(mg/g)
浸膏得率
(%)
综合
评分 (分)111
10.34 1.1219.1628.8962.762
122
0.41 1.0819.8433.4569.4031330.57
1.4225.1241.52
92.39
421
2
0.46 1.5425.1936.884.135223
0.53 1.56
24.29
39.9490.02
6
2
310.37 1.1818.8130.8266.11731
3
0.63
1.5526.6840.34
99.7283210.41 1.2521.89
33.0973.059
3
32
0.58
1.55
23.98
39.69
93.57
K 1224.55246.60201.92K 240.26232.47247.10
K
266.33252.07282.13R 41.78
19.6080.21
注:F O .O5(2,2)=19.00；F O .O 1(2,2)=99.00
方差来源(离差平方和)SS
自由度均方(MS)
F 值
P 值
A 297.042148.52
7.87> 0.05B 68.21234.11
1.81
> 0.05C
1078.002539.0028.56
< 0.05
D (误差)67.95
2
33.97
2.5验证试验
按上述优选的提取工艺重复3次,依法测定毛蕊
异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸、人参皂苷Rg1含量及浸膏
得率。

结果，毛蕊异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸、人参皂苷
Rg1平均含量分别为0.61,1.51,26.23 mg/g,RSD 分别
为 0.94%、1.38%、1.20%，浸膏得率均值为 41.02%,
RSD 为0.71%,综合评分均值为97.74,RSD 为0.09%, 结果显示优选的工艺参数稳定、重复性较好，可作为
黄芪三七合剂的提取工艺。

3 讨论
中药复方常以多组分、多靶点共同发挥疗效，以
单一组分或成分为指标来筛选工艺难以反应复方的
整体功效［21-23］o 目前，多指标综合评分法已广泛应用于
中药复方制剂的提取、成型工艺筛选,通过对多个指
标成分赋予客观权重系数,计算综合评分,较单一成 分评价指标更能全面客观的评价工艺优劣［24-27］o 毛蕊
异黄酮葡萄糖苷为君药黄芪中有效成分,阿魏酸、人
参皂苷Rg1分别为臣药当归、三七中有效成分，浸膏 得率影响后续成型工艺。

根据方剂君臣佐使的配伍理
念以及各指标在处方中的相对重要性,故将四者权重 系数依次设为0.5、0.2、0.2、0.1。

验证结果显示，工艺
合理可行。

本研究建立了多波长同时测定毛蕊异黄酮
葡萄糖苷、阿魏酸、人参皂苷Rg1三者含量的方法，试
验过程中对比了等度洗脱和梯度洗脱两种方式，对照
品色谱中两种洗脱方式各目标峰分离度均较好,等度
洗脱时供试品色谱中目标峰与杂质分离度小于1.5,
不符合分析要求，故选择梯度洗脱。

同时，考察了甲
醇-磷酸水系统、乙腈-磷酸水系统,结果乙腈-磷酸水
系统峰型更好,经反复调整流动相比例及多次试验,
最终确定了文中色谱条件，方法学验证结果显示所建 方法准确度高、重复性好,可用于三者含量同时测定。

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