优秀研究生答辩幻灯片
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Jin LY, Xu JM, He ZB, et al. [Ef ulinastain on the expression of hemeoxyg
1 in oleic acid-induced acute lung in rats]. Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xu
2007, 32(4):6
内毒素引起肺损伤
K, Takano H, Yanagisawa R, et al. dative role of urinary trypsin r in acute lung injury induced by ysaccharide. Int J Mol Med, 2005, 029-1033
研究背景
Research Objective
本研究通过建立兔单肺通气致肺损 伤模型，拟探讨单肺通气诱发肺损伤时 肺组织线粒体转录因子A表达的变化及 乌司他丁的干预效应，为临床防治单肺 通气诱发急性肺损伤提供理论依据。
研究背景
研究目的
材料与方法
结果
讨论
结论
材料与方法 Materials and methods 动物选择及分 组
Gothard J. Lung injury after thoracic surgery and one-lung ventilation. Curr Opin Anaesthesioli, 2006, 19(1):5-10
研究背景
Research Background
开胸手术中
手术操作
萎陷侧肺快速复张
与O组肺组织
相比较，U组肺组
织mtTFA表达升
U组
高
结果
Result
DL DR OL OR UL
The expression level of lung tissue mtTFA was measured by
2
mtTFA表达
western blot in different groups.
UR 结果表明：与D 组相比，O组肺组 织mtTFA表达降
Fukuoh A, Kang D . Methods for assessing binding of mitochondrial transcription factor A (TFAM) to DNA. Methods Mol Biol, 2009, 1760(2):87-101
减轻油酸引起肺
Research Background
乌司他丁是分
乌司他丁含有
离纯化成年男
143个氨基酸
性尿液得到的 蛋白水解酶抑
乌司他丁
Ulinastain
的糖蛋白，主 要通过肾脏代
制剂。
谢, 给药后12
Inoue K, Takano H, Yanagisawa R, et al. Antioxidative role of urinary trypsin inhibitor in acute lung injury induced by lipopolysaccharide. Int J Mol Med, 2005, 16(6):1029-1033
ac a
abc ab
left right
D
O
U
ComCpoaGmrreouppwaCirotehmwlepiftathrleDunwgith O
结果
Result
各组肺组织病理学结果
compare with lung injury scores in groups
400
350
300
250
200
150
0
T0
T1
T2
T3
Time
结果
Result
各组兔肺组织SOD活性和MDA含量的比较
SOD activity of lung tissue MDA assaying of lung tissue
Compare with SOD activity of lung tissue in group
100.00
14
90.00 80.00 70.00 60.00 50.00 40.00 30.00 20.00 10.00
a ac
ab abc
12
10
8 left 6 right
4
2
0.00
0
D
O
U
CompCaoremGrwopCupiaothrmelepwfaittrhleuDnwgith O
Compare with MDA assaying of lung tissue in groups.
讨论
Discussion
单肺通气诱发肺损伤模型的建立
研根动究据脉表文血明献氧，合氧对指合肺数指泡比数结较<构：3、0O0肺组m间、mH质Ug组水(1通m肿m气增H结厚g束=、0时.肺1氧3泡3 内 k渗合P出a指)时、数即出<3可血00认、m为m炎发H性g生细，肺胞提损浸示伤润氧。程饱度和进下行降评，分出，现>轻3分微为 重的度低损氧伤血症。 本肺研组究织结病果理表学明损：，伤O光评组镜分、下：U单光组肺镜通通下气气单结后肺束肺通时组气氧织后合大肺指部组数分 <肺织3泡0大0结m部m构分H消肺g失泡，，结提肺构示泡消通腔失气内，结渗肺束出泡时，腔氧出内饱血渗和多出下，降间出，质血出增多现厚轻 微明，的显间低，质氧炎增血性厚症细明。胞显聚，集炎。性细胞聚集。
h可通过尿和 粪便排泄。
al. [Effect of n of acid-induced Zhong Nan Ban, 2007,
Dzierzbicki al. The
induced rear cerevisiae mtD (EndoG/ExoG
inactivation
研究背景
Research Background
结果
Result
各组兔一般情况比较
D组、O组及U组兔体重分别为（2.2±0.6）kg 、 （ 2.4±0.8）kg及（2.4±0.5）kg，各组兔体重差异无统计 学意义（P＞0.05）。
D组、O组及U组兔通气过程心率为（211±10）次/min、 （209±8）次/min及（208±8）次/min，平均动脉压为（ 44±4）mm Hg 、（40±6）mm Hg及（39±4）mm Hg ， 各组兔心率、平均动脉压差异无统计学意义（P＞0.05） 。
材料与方法 Materials and methods 模型建立与标本采集
Double lungsvenlilation 自On制e l双un腔gs 气ven管lila插tio管n Ulinastain intervention
DD组组双及肺O组通在气通3h气，即O组刻和静U脉组注左射肺等通量气生2 h后再U双组肺通通气气即1 刻h 静 。理通盐气水参参照通。文数气献：双结肺束通后气开时胸V，T取为双24侧m肺l、尖单部肺组通织气。脉VT注为射12乌m司l、他 FiO210游150志(4%)坚: 2,，4姚5-尚通24龙8气, 李进频. 三率种兔40单肺次通/气m模i型n，的比I较:E. 中为国1实:验2动。物学丁报, 520007,kU/kg
根据文献，单肺通气模型动物种类
：
健 2.5康kg雄，性常大规白分兔笼T24喂w只o养，lu。体n由g重s河v2e北.0n～医lila科ti大on
学实验动物中心提供
One lungs venlilation
本实验选用国内外研究单肺通气最常用的动物：新西兰大白兔
Ulinastain intervention
材料与方法 Materials and methods
观 察 指 标 及检 测 方 法
于血通气气分开析始动即脉刻血（氧分T0）压、，通计气算1氧h合（指T1数）、通气 2HhE（染T色2）观、察通肺气组结织束病即理刻学（损T伤3）评采分集动脉血 多聚 取肺尖部组织置入4℃ 4%多聚甲醛固定，常
甲醛
研究背景
Research Background
翻译
线粒体呼吸链功能蛋白
线粒体基因（ mtDNA）
mtDNA是线 蛋转粒白录体线和转翻粒功录译因体能线子转蛋粒A录白体因的呼子重吸A要链（启功m动能tT子蛋F。A白）其的是高细m表胞tD达核N可A外使转重m录要t翻D遗N译传A线数物粒量质体增结加构， 对维持mtDNA稳定具有重要意义。
低；
1.5GAPDH
与O组左侧肺
1
左肺 右肺
组织相比，O组右 侧肺组织mtTFA 表达降低；
Western blot结果以密度扫描分析：采用美国 Bandscan与5.O0软组件肺对组织
Westernblot结果进行定量分析，灰度值以累积光密相度比值（较I，ODU）组表肺示组，
结0.5果通过以下公式计算：
免规疫脱组水化、法石检蜡测包兔埋肺、组切织片mtTFA表达
化学比色法检测肺组织SOD活性和MDA含量 取肺尖部组织装入冻存管，液氮冻存24h后转 液氮 −W8e0s℃te冰rn箱bl保ot存法检测兔肺组织mtTFA表达
研究背景
研究目的
材料与方法
结果
讨论
结论
结果
Result
各组兔一般情况比较 各时间点氧合指数比较 各组兔肺组织病理学改变以及肺损伤评分 各组兔肺组织超氧化物歧化酶（SOD）和丙 二醛（MDA）的含量 各组兔肺组织中mtTFA的含量
研究背景
Research Background
线粒体基因 （mtDNA） 线 粒 体
线粒体是参细与胞细内胞氧能自量由代基谢增的多重，要首细先胞攻器击，线线粒粒体体基功因能。障碍可导致组织缺氧。
Ruchko M, Gorodnya O, LeDoux SP, et al. Mitochondrial DNA damage triggers mitochondrial dysfunction and apoptosis in oxidantchallenged lung endothelial cells. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol, 2005, 288(3):L530-535
织mtTFA表达升
高。
0
mtTFA蛋白半定量
=
mtTFA蛋白累积光密度值 GAPDH的累积光密度值
与免疫组化法 测定mtTFA结果
D组
O组
U组
一致。
研究背景
研究目的
材料与方法
结果
讨论
结论
讨论
Discussion
单肺通气诱发肺损伤模型的制备 单肺通气致肺损伤的机制 肺损伤时肺组织脂质过氧化反应及与mtTFA关系 乌司他丁减轻肺损伤机制
100
50
0
D组
O组
U组
1、长时间单肺通 气肺组织病理学 损伤评分升高。
右肺 2、与单肺通气组 左肺 比较，乌司他丁
组肺组织病理学 损伤评分下降。
结果
Result
免疫组化法测定各组肺组织mtTFA表达
400 350 300 250 200 150 100
50 0
D组
O组
结果表明：与D组 相比，O组肺组织 左肺 mtTFA表达降低 右肺 ；
1h 2h 3h
长时间单肺通气
急性肺损伤
FiO2：50 %60 7
吸入高浓度氧
研究背景
Research Background
单肺通气诱发肺损伤的机制
细胞内氧自由基增多可介导 IL-1、TNF-α等前炎性因子 增多，使中性粒细胞募集诱 发炎症反应。
中性粒细胞可释放髓过氧化 物酶（MPO），MPO主要功 能是利用过氧化氢和氯离子 产生次氯酸盐（HOCl），并 形成具有氧化能力的自由基
优秀研究生答辩幻灯片.ppt
目录
Contents
研究背景
研究目的
材料与方法
结果
讨论
结论
研究背景
Research Background
单肺通气( one -lung ventilation，OLV) 的应用已有50多年的历史，是指患者 经支气管导管仅利用单侧肺( 非术侧 肺) 进行通气的方法。主要目的是提 供良好的手术视野，避免患侧肺对健 侧肺的污染，减少呼吸运动对手术操 作的干扰，随着外科技术的发展， OLV 已广泛应用于心胸外科及脊柱手 术的麻醉。
单肺通气诱发肺损伤模型制备成功
结果
Result
各时间点氧合指数比较
oxygenation index
Compare with oxygenation index in groups
600
500
400
300 Compare with T0
200 100
ac
ac
abc
D
ac
O
U
Compare with T0 Compare with D
单肺通气 诱发急性 肺损伤时
乌司他丁 具有减轻
肺损伤
肺组织产生 炎症反应和 氧化应激
？ 导致线粒体
基因受损线 粒体功能
障碍
是否与 mtTFA有关 尚不清楚
清除 氧自由基 和减轻 炎症反应
？ 抑制
水解酶活性 保护线粒体
其机制 是否与
mtTFA有关 尚不清楚
研究背景
研究目的
材料与方法
结果
讨论
结论
研究目的
1 in oleic acid-induced acute lung in rats]. Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xu
2007, 32(4):6
内毒素引起肺损伤
K, Takano H, Yanagisawa R, et al. dative role of urinary trypsin r in acute lung injury induced by ysaccharide. Int J Mol Med, 2005, 029-1033
研究背景
Research Objective
本研究通过建立兔单肺通气致肺损 伤模型，拟探讨单肺通气诱发肺损伤时 肺组织线粒体转录因子A表达的变化及 乌司他丁的干预效应，为临床防治单肺 通气诱发急性肺损伤提供理论依据。
研究背景
研究目的
材料与方法
结果
讨论
结论
材料与方法 Materials and methods 动物选择及分 组
Gothard J. Lung injury after thoracic surgery and one-lung ventilation. Curr Opin Anaesthesioli, 2006, 19(1):5-10
研究背景
Research Background
开胸手术中
手术操作
萎陷侧肺快速复张
与O组肺组织
相比较，U组肺组
织mtTFA表达升
U组
高
结果
Result
DL DR OL OR UL
The expression level of lung tissue mtTFA was measured by
2
mtTFA表达
western blot in different groups.
UR 结果表明：与D 组相比，O组肺组 织mtTFA表达降
Fukuoh A, Kang D . Methods for assessing binding of mitochondrial transcription factor A (TFAM) to DNA. Methods Mol Biol, 2009, 1760(2):87-101
减轻油酸引起肺
Research Background
乌司他丁是分
乌司他丁含有
离纯化成年男
143个氨基酸
性尿液得到的 蛋白水解酶抑
乌司他丁
Ulinastain
的糖蛋白，主 要通过肾脏代
制剂。
谢, 给药后12
Inoue K, Takano H, Yanagisawa R, et al. Antioxidative role of urinary trypsin inhibitor in acute lung injury induced by lipopolysaccharide. Int J Mol Med, 2005, 16(6):1029-1033
ac a
abc ab
left right
D
O
U
ComCpoaGmrreouppwaCirotehmwlepiftathrleDunwgith O
结果
Result
各组肺组织病理学结果
compare with lung injury scores in groups
400
350
300
250
200
150
0
T0
T1
T2
T3
Time
结果
Result
各组兔肺组织SOD活性和MDA含量的比较
SOD activity of lung tissue MDA assaying of lung tissue
Compare with SOD activity of lung tissue in group
100.00
14
90.00 80.00 70.00 60.00 50.00 40.00 30.00 20.00 10.00
a ac
ab abc
12
10
8 left 6 right
4
2
0.00
0
D
O
U
CompCaoremGrwopCupiaothrmelepwfaittrhleuDnwgith O
Compare with MDA assaying of lung tissue in groups.
讨论
Discussion
单肺通气诱发肺损伤模型的建立
研根动究据脉表文血明献氧，合氧对指合肺数指泡比数结较<构：3、0O0肺组m间、mH质Ug组水(1通m肿m气增H结厚g束=、0时.肺1氧3泡3 内 k渗合P出a指)时、数即出<3可血00认、m为m炎发H性g生细，肺胞提损浸示伤润氧。程饱度和进下行降评，分出，现>轻3分微为 重的度低损氧伤血症。 本肺研组究织结病果理表学明损：，伤O光评组镜分、下：U单光组肺镜通通下气气单结后肺束肺通时组气氧织后合大肺指部组数分 <肺织3泡0大0结m部m构分H消肺g失泡，，结提肺构示泡消通腔失气内，结渗肺束出泡时，腔氧出内饱血渗和多出下，降间出，质血出增多现厚轻 微明，的显间低，质氧炎增血性厚症细明。胞显聚，集炎。性细胞聚集。
h可通过尿和 粪便排泄。
al. [Effect of n of acid-induced Zhong Nan Ban, 2007,
Dzierzbicki al. The
induced rear cerevisiae mtD (EndoG/ExoG
inactivation
研究背景
Research Background
结果
Result
各组兔一般情况比较
D组、O组及U组兔体重分别为（2.2±0.6）kg 、 （ 2.4±0.8）kg及（2.4±0.5）kg，各组兔体重差异无统计 学意义（P＞0.05）。
D组、O组及U组兔通气过程心率为（211±10）次/min、 （209±8）次/min及（208±8）次/min，平均动脉压为（ 44±4）mm Hg 、（40±6）mm Hg及（39±4）mm Hg ， 各组兔心率、平均动脉压差异无统计学意义（P＞0.05） 。
材料与方法 Materials and methods 模型建立与标本采集
Double lungsvenlilation 自On制e l双un腔gs 气ven管lila插tio管n Ulinastain intervention
DD组组双及肺O组通在气通3h气，即O组刻和静U脉组注左射肺等通量气生2 h后再U双组肺通通气气即1 刻h 静 。理通盐气水参参照通。文数气献：双结肺束通后气开时胸V，T取为双24侧m肺l、尖单部肺组通织气。脉VT注为射12乌m司l、他 FiO210游150志(4%)坚: 2,，4姚5-尚通24龙8气, 李进频. 三率种兔40单肺次通/气m模i型n，的比I较:E. 中为国1实:验2动。物学丁报, 520007,kU/kg
根据文献，单肺通气模型动物种类
：
健 2.5康kg雄，性常大规白分兔笼T24喂w只o养，lu。体n由g重s河v2e北.0n～医lila科ti大on
学实验动物中心提供
One lungs venlilation
本实验选用国内外研究单肺通气最常用的动物：新西兰大白兔
Ulinastain intervention
材料与方法 Materials and methods
观 察 指 标 及检 测 方 法
于血通气气分开析始动即脉刻血（氧分T0）压、，通计气算1氧h合（指T1数）、通气 2HhE（染T色2）观、察通肺气组结织束病即理刻学（损T伤3）评采分集动脉血 多聚 取肺尖部组织置入4℃ 4%多聚甲醛固定，常
甲醛
研究背景
Research Background
翻译
线粒体呼吸链功能蛋白
线粒体基因（ mtDNA）
mtDNA是线 蛋转粒白录体线和转翻粒功录译因体能线子转蛋粒A录白体因的呼子重吸A要链（启功m动能tT子蛋F。A白）其的是高细m表胞tD达核N可A外使转重m录要t翻D遗N译传A线数物粒量质体增结加构， 对维持mtDNA稳定具有重要意义。
低；
1.5GAPDH
与O组左侧肺
1
左肺 右肺
组织相比，O组右 侧肺组织mtTFA 表达降低；
Western blot结果以密度扫描分析：采用美国 Bandscan与5.O0软组件肺对组织
Westernblot结果进行定量分析，灰度值以累积光密相度比值（较I，ODU）组表肺示组，
结0.5果通过以下公式计算：
免规疫脱组水化、法石检蜡测包兔埋肺、组切织片mtTFA表达
化学比色法检测肺组织SOD活性和MDA含量 取肺尖部组织装入冻存管，液氮冻存24h后转 液氮 −W8e0s℃te冰rn箱bl保ot存法检测兔肺组织mtTFA表达
研究背景
研究目的
材料与方法
结果
讨论
结论
结果
Result
各组兔一般情况比较 各时间点氧合指数比较 各组兔肺组织病理学改变以及肺损伤评分 各组兔肺组织超氧化物歧化酶（SOD）和丙 二醛（MDA）的含量 各组兔肺组织中mtTFA的含量
研究背景
Research Background
线粒体基因 （mtDNA） 线 粒 体
线粒体是参细与胞细内胞氧能自量由代基谢增的多重，要首细先胞攻器击，线线粒粒体体基功因能。障碍可导致组织缺氧。
Ruchko M, Gorodnya O, LeDoux SP, et al. Mitochondrial DNA damage triggers mitochondrial dysfunction and apoptosis in oxidantchallenged lung endothelial cells. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol, 2005, 288(3):L530-535
织mtTFA表达升
高。
0
mtTFA蛋白半定量
=
mtTFA蛋白累积光密度值 GAPDH的累积光密度值
与免疫组化法 测定mtTFA结果
D组
O组
U组
一致。
研究背景
研究目的
材料与方法
结果
讨论
结论
讨论
Discussion
单肺通气诱发肺损伤模型的制备 单肺通气致肺损伤的机制 肺损伤时肺组织脂质过氧化反应及与mtTFA关系 乌司他丁减轻肺损伤机制
100
50
0
D组
O组
U组
1、长时间单肺通 气肺组织病理学 损伤评分升高。
右肺 2、与单肺通气组 左肺 比较，乌司他丁
组肺组织病理学 损伤评分下降。
结果
Result
免疫组化法测定各组肺组织mtTFA表达
400 350 300 250 200 150 100
50 0
D组
O组
结果表明：与D组 相比，O组肺组织 左肺 mtTFA表达降低 右肺 ；
1h 2h 3h
长时间单肺通气
急性肺损伤
FiO2：50 %60 7
吸入高浓度氧
研究背景
Research Background
单肺通气诱发肺损伤的机制
细胞内氧自由基增多可介导 IL-1、TNF-α等前炎性因子 增多，使中性粒细胞募集诱 发炎症反应。
中性粒细胞可释放髓过氧化 物酶（MPO），MPO主要功 能是利用过氧化氢和氯离子 产生次氯酸盐（HOCl），并 形成具有氧化能力的自由基
优秀研究生答辩幻灯片.ppt
目录
Contents
研究背景
研究目的
材料与方法
结果
讨论
结论
研究背景
Research Background
单肺通气( one -lung ventilation，OLV) 的应用已有50多年的历史，是指患者 经支气管导管仅利用单侧肺( 非术侧 肺) 进行通气的方法。主要目的是提 供良好的手术视野，避免患侧肺对健 侧肺的污染，减少呼吸运动对手术操 作的干扰，随着外科技术的发展， OLV 已广泛应用于心胸外科及脊柱手 术的麻醉。
单肺通气诱发肺损伤模型制备成功
结果
Result
各时间点氧合指数比较
oxygenation index
Compare with oxygenation index in groups
600
500
400
300 Compare with T0
200 100
ac
ac
abc
D
ac
O
U
Compare with T0 Compare with D
单肺通气 诱发急性 肺损伤时
乌司他丁 具有减轻
肺损伤
肺组织产生 炎症反应和 氧化应激
？ 导致线粒体
基因受损线 粒体功能
障碍
是否与 mtTFA有关 尚不清楚
清除 氧自由基 和减轻 炎症反应
？ 抑制
水解酶活性 保护线粒体
其机制 是否与
mtTFA有关 尚不清楚
研究背景
研究目的
材料与方法
结果
讨论
结论
研究目的