中医药治疗绝经后骨质疏松症的实验研究进展
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4针灸实验研究
针灸疗法通过刺激人体相应的脸穴，激发机体经络之气， 协调运行，促进机体发挥内在的调节能力，达到防治PMOP 的目的㈣。如研究发现针刺肾俞、足三里能明显升高股骨、 胫骨密度，降低血清ALP活性，并证实其调节机制可能与 Wn切-catenin通路有关鲍圣涌等网釆用“双固一通” 针法治疗PMOP大鼠，选穴“关元”“足三里” “肾俞” “膈 俞”“大杼”，发现“双固一通”针法能显著提高大鼠腰椎和 股骨生物力学指标，包括最大载荷、弹性模量、极限强度等， 提示该法在改善骨组织的生物力学结构方面具有较好的疗效。 还有研究发现，针刺去势大鼠双侧肾俞、脾俞、足三里及大 椎穴，能显著提高全身BMD和肌肉含量，降低脂肪与E2含 量及双侧股四头肌肌球蛋白重链蛋白的表达，具有良好的调 节作用閤。艾灸在防治PMOP中可发挥防治骨质疏松、强体、 抗衰的作用，如有研究在艾灸去势大鼠“关元”“足三里”肾 俞”后发现，艾灸能显著提髙大鼠血清E2、OC水平，降低 尿钙与肌酹的比值，对PMOP发挥明显的防治作用閃。随 着越来越多动物实验的深入开展，针灸通过调节内分泌、体 液循环途径调节骨代谢相关蛋白和细胞因子的表达，改善骨 结构的作用己逐步被证实，在PMOP的防治中显示出独特的 潜力。
【关键词】绝经后骨质疏松症；中医药；动物实验；进展 [Abstract] Postmenopausal osteoporosis is one of the most common types of primary osteoporosis, which is mainly characterized by chronic body pain, restricted movement, bone deformation and even fractures. In recent years, the incidence of PMOP has been on the rise, seriously threatens women's life and health. TCM has unique advantages in the treatment of PMOP, and certain progress has been made in experimental research. In this article, the experimental researches on the treatment of PMOP in TCM in recent years were summarized from the aspects of animal modeling, single medicine, compound prescription and acupuncture and moxibustion therapies, in order to provide more references for the clinical prevention and treatment of PMOP. [Keywords] Postmenopausal osteoporosis; TCM; Animal experiments; Review doi:10.3969?j.issn.l674-7860.2021.10.048
此外，还有研究釆用猴、兔、狗等动物进行PMOP的造 模，如有研究采用去势法建立食蟹猴PMOP模型，术后1个 月食蟹猴血清E2水平、碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, ALP), CTX-I明显升高，BMD明显降低，骨体积分数、骨 小梁厚度及数量明显减少，分离度增大，进而表明雌性食蟹 猴去势后因雌激素降低引起的骨质疏松与人PMOP的各项 指标相符，具有良好的代表性冏。另有研究显示，8个月龄 新西兰家兔在去势20周后，腰椎及右股骨BMD明显降低， 抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate Resistant Acid Phosphatase, TRACP)明显升高，BALP明显降低，血清核因子kB受体活 化因子配体(RANKL)水平明显升高，而给予蔗糖铁注射又 进一步增强上述差异，导致骨质疏松加重固。因此，釆用去
3复方中药实验研究
多味中药灵活配伍，辨证施治，可对PMOP发挥中药方 剂整体、综合的疗效。
如研究显示呵，与模型组相比，淫羊董和女贞子配伍 灌服能提高去势大鼠血清中转化生长因子-仇(Transforming Growth Factor-^1, TGF-^1)的含量，上调骨组织中转化生长 因子 妁/Smads家族蛋白(TGF-01/Smads)信号通路的表达, 同时下调骨组织中Smad7的mRNA和蛋白表达，且两者配伍 组对各指标的调节作用均优于单用。同样，在闵愈等阴研究 中发现，二至丸可显著改善去卵巢骨质疏松症大鼠的骨代谢 异常，包括增加骨量、提升骨载荷量及修复骨微结构，并推 测其机制与调控趋化素有关。另有研究观察了六味地黄汤对 PMOP模型大鼠的早期干预作用，与模型组比较，六味地黄 汤组可以提高模型大鼠BMD值及血清E2、钙、磷水平，明 显减少骨小梁断裂和髓腔内脂肪细胞的比例，减少模型大鼠
CJCM中医临床研究2021年第13卷第10期
势法对多种动物进行PMOP造模，均能取得满意的模型，然 而，由于成本高、周期长等原因，骨质疏松症造模研究中最 常用的动物仍为大鼠。
2单味中药实验研究
在基础研究中，单味中药提取物有应用方便、不良反应 小的优势，对PMOP显示出令人满意的疗效。如有研究探讨 了积雪草酸提取液抑制PMOP大鼠的作用，结果显示，与模 型组相比，中\高剂量积雪草酸组BMD、骨体积分数、骨小 梁数量、骨小梁厚度、ALP显著升高，结构模型指数显著降 低，对去卵巢大鼠骨质疏松显示出良好的抑制作用何。赵亮 等冋釆用盐炙杜仲提取物治疗去卵巢骨质疏松大鼠，并观 察对骨代谢生化指标的影响，结果显示，与模型组相比，杜 仲高剂量组大鼠血清ALP和OC显著升高，TRACP显著降 低，表明杜仲提取物可通过改善血清骨转换水平，促进成骨 细胞分化，促进骨形成，治疗骨质疏松症，之后对大鼠全身、 股骨和椎骨的BMD的检测也进一步证实其对PMOP的确切 疗效。芹菜素是一种来源于芫花、卷柏等植物中的黄酮类化 合物，属植物类的雌激素，具有抗病毒、抗炎、抗氧化等功 效问。研究显示，给予去势大鼠皮下注射芹菜素，大鼠骨密度 及钙、磷浓度均较模型组显著改善，血清PINP和0-CTX的水 平显著降低，提示一定剂量的芹菜素具有抗骨质疏松效果何。 此外，葛根素也是植物性雌激素的一种，研究显示，葛根素 能明显提高PMOP大鼠模型的护骨素(Osteoprogerin, OPG) 分泌，降低RANKL和ALP水平，发挥雌激素样作用，进而 有效促进骨质形成、钙化作用，可用于PMOP的治疗叫呵。 另有研究显示，肥胖与PMOP间存在密切的联系，高脂饮食 能降低卵巢切除大鼠的BMD和胫骨最大载荷，引起骨质量 及骨的微观结构的破坏，而巴戟天醇提取物能够抑制骨量流 失，维持骨的正常微观结构，提高骨的最大载荷，在肥胖伴 PMOP患者中显示出潜在的应用前景两。以上说明，中药提 取物以其高效低毒的生物学特性在PMOP实验中显示出重要 作用，今后仍需加大中药有效成分的研究与，开发更多有效 成分，充分发挥中药在PMOP中的疗效。
苏 奇i张文贤”王 斌1严其凯1赵建伟1 (1.甘肃中医药大学，甘肃 兰州，730101； 2.甘肃省中医院，甘肃 兰卅，730050)
中图分类号：R274 文献标识码：A 文章编号：1674-7860 (2021) 10-0146-03 证型：BG
【摘 要】绝经后骨质疏松症(Postmenopausal Osteoporosis, PMOP)是原发性骨质疏松症最常见的类型之一，主要以慢性 周身疼痛、活动受限、骨骼变形甚至骨折为特点。近年来PMOP的发病率呈上升趋势，严重威胁女性的生命健康。中医药在治 疗PMOP方面具有独特的优势，实验研究方面取得一定进展。本文从实验研究的动物造模、单味药物、复方及针炎疗法等方面 就近年来中医药治疗PMOP的实验研究做一综述，以期为临床PMOP的中医药防治提供参考。
PMOP是指绝经后由于卵巢功能减退，雌激素及相关内 分泌改变引起的骨密度(Bone Mineral Density, BMD)降低 和骨微结构受损，导致骨脆性和骨折风险增加的骨代谢性疾 病叫主要表现为慢性周身疼痛，活动受限，甚者出现骨骼变 形、驼背、身高变矮及骨折等。研究显示，我国骨质疏松症 患者已超7 000万人，其中PMOP约占80%,且随着老龄化 的加快，PMOP患者数量呈逐年上升的趋势叫 成为我国普 遍存在的公共卫生问题。PMOP的确切病理生理学机制尚未 完全阐明，现代医学大多以补钙、雌激素替代及调节内分泌 等治疗为主，虽能取得一定的疗效，但周期长、费用高、不 良反应多，严重影响了患者治疗的依从性，如雌激素的应用 增加乳腺癌患病风险等內。PMOP属于中医学“骨痿”“骨 枯”''腰痛”等范畴，如《素问•萎论篇》:“肾主身之骨髓…… 肾气热，则腰脊不举，骨枯而髓减，发为骨萎。”即所谓肾主 骨生髓，肾精充盛，骨髓才能有所化生，骨骼坚固有力；肝 主筋，可约束骨骼，脾主运化，能荣养四肢关节；绝经后妇 女各脏腑功能衰减，天癸竭，以致肾虚则髓空骨枯，肝虚则 筋骨失濡，脾虚则肌肉失养，最终导致骨痿不用旳。根据其 不同的病因病机给予多层次、多角度的辨证施治，具有疗效 好、性价比高、不良反应少等优势眄近年来，中医药在防 治PMOP的基础实验研究中取得了丰富的成果。本文综述了 中医药在防治PMOP实验研究中的进展，以期为临床防治提 供参考。
1 PMOP动物模型的造模方法
建立标准、科学的模型，能为PMOP研究提供可靠的实
验依据，目前研究中多釆用双侧卵巢切除法，又称去势法, 最初由Saville于1969年首次开展，并沿用至今；动物多釆 用大鼠，以SD和Wistar为主，因其卵巢被切除后，雌二醇 (Estradiol, E2)水平明显降低，高转换型骨量减少，骨强度 下降，其机制与人类绝经后骨丢失的状态相似，且大鼠有着 成本低、易饲养、重复性好的优势，一般术后2个月即能达 到PMOP状态，且随着月龄的增加，骨质疏松的病理表现更 为突出固。如研究显示％卵巢切除术后10周，大鼠腰椎、 股骨BMD显著下降，术后3个月，血清骨钙素(Osteocalcin, OC)、I 型前胶原氨基端前肽(N-terminal Propeptide of type I Precollagen, PINP)显著降低，I 型胶原 C 端肽(CTX- I ) 显著升高，并伴有腰椎骨小梁结构明显塌陷、骨间距增宽、 骨小梁变细等病理改变，表明去势造模法能有效模拟人类 PMOP状态，有着良好的骨生，最终延缓PMOP的发生发展四。王剑等⑷在 研究中釆用骨组织Runt相关转录因子2 (Runx2)、成骨细胞 特异性转录因子Osterix启动子甲基化水平评估了鹿茸中药 复方对PMOP大鼠的疗效，与模型组比较，鹿茸中药复方组 第1〜6腰椎骨密度明显升高，骨组织Runx2启动子-955〜 -456 bp CpGl、CpG3甲基化水平以及Osterix启动子-1 082〜 -583 bp CpGl甲基化水平明显降低，故推测鹿茸中药复方可 通过降低骨组织Runx2、Osterix启动子甲基化水平发挥防治 PMOP的作用。此外，有研究认为PMOP病机是以肾虚为本， 并与脾虚、血瘀相互夹杂，釆用补肾健脾活血方治疗去势大 鼠，能明显增高BMD、最大载荷及刚度，提高骨形成蛋白 (BMP2)、Smadl、Runx2、OPG基因和蛋白表达水平，从而 发挥防治PMOP的功效上述实验均通过检测不同的指标, 如信号通路、血清指标、甲基化水平、基因表达水平等，验 证了中药复方在PMOP治疗中的作用，然而由于复方成分复 杂，药物在体内的信号调节机制发挥多种协同作用，也有待 于今后更深入的探索研究。
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Clinical Journal of Chinese Medicine 2021 Vdl.(13) No.10
中医药治疗绝经后骨质疏松症的实验研究进展
A review on experimental research on treating postmenopausal osteoporosis in TCM
针灸疗法通过刺激人体相应的脸穴，激发机体经络之气， 协调运行，促进机体发挥内在的调节能力，达到防治PMOP 的目的㈣。如研究发现针刺肾俞、足三里能明显升高股骨、 胫骨密度，降低血清ALP活性，并证实其调节机制可能与 Wn切-catenin通路有关鲍圣涌等网釆用“双固一通” 针法治疗PMOP大鼠，选穴“关元”“足三里” “肾俞” “膈 俞”“大杼”，发现“双固一通”针法能显著提高大鼠腰椎和 股骨生物力学指标，包括最大载荷、弹性模量、极限强度等， 提示该法在改善骨组织的生物力学结构方面具有较好的疗效。 还有研究发现，针刺去势大鼠双侧肾俞、脾俞、足三里及大 椎穴，能显著提高全身BMD和肌肉含量，降低脂肪与E2含 量及双侧股四头肌肌球蛋白重链蛋白的表达，具有良好的调 节作用閤。艾灸在防治PMOP中可发挥防治骨质疏松、强体、 抗衰的作用，如有研究在艾灸去势大鼠“关元”“足三里”肾 俞”后发现，艾灸能显著提髙大鼠血清E2、OC水平，降低 尿钙与肌酹的比值，对PMOP发挥明显的防治作用閃。随 着越来越多动物实验的深入开展，针灸通过调节内分泌、体 液循环途径调节骨代谢相关蛋白和细胞因子的表达，改善骨 结构的作用己逐步被证实，在PMOP的防治中显示出独特的 潜力。
【关键词】绝经后骨质疏松症；中医药；动物实验；进展 [Abstract] Postmenopausal osteoporosis is one of the most common types of primary osteoporosis, which is mainly characterized by chronic body pain, restricted movement, bone deformation and even fractures. In recent years, the incidence of PMOP has been on the rise, seriously threatens women's life and health. TCM has unique advantages in the treatment of PMOP, and certain progress has been made in experimental research. In this article, the experimental researches on the treatment of PMOP in TCM in recent years were summarized from the aspects of animal modeling, single medicine, compound prescription and acupuncture and moxibustion therapies, in order to provide more references for the clinical prevention and treatment of PMOP. [Keywords] Postmenopausal osteoporosis; TCM; Animal experiments; Review doi:10.3969?j.issn.l674-7860.2021.10.048
此外，还有研究釆用猴、兔、狗等动物进行PMOP的造 模，如有研究采用去势法建立食蟹猴PMOP模型，术后1个 月食蟹猴血清E2水平、碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, ALP), CTX-I明显升高，BMD明显降低，骨体积分数、骨 小梁厚度及数量明显减少，分离度增大，进而表明雌性食蟹 猴去势后因雌激素降低引起的骨质疏松与人PMOP的各项 指标相符，具有良好的代表性冏。另有研究显示，8个月龄 新西兰家兔在去势20周后，腰椎及右股骨BMD明显降低， 抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate Resistant Acid Phosphatase, TRACP)明显升高，BALP明显降低，血清核因子kB受体活 化因子配体(RANKL)水平明显升高，而给予蔗糖铁注射又 进一步增强上述差异，导致骨质疏松加重固。因此，釆用去
3复方中药实验研究
多味中药灵活配伍，辨证施治，可对PMOP发挥中药方 剂整体、综合的疗效。
如研究显示呵，与模型组相比，淫羊董和女贞子配伍 灌服能提高去势大鼠血清中转化生长因子-仇(Transforming Growth Factor-^1, TGF-^1)的含量，上调骨组织中转化生长 因子 妁/Smads家族蛋白(TGF-01/Smads)信号通路的表达, 同时下调骨组织中Smad7的mRNA和蛋白表达，且两者配伍 组对各指标的调节作用均优于单用。同样，在闵愈等阴研究 中发现，二至丸可显著改善去卵巢骨质疏松症大鼠的骨代谢 异常，包括增加骨量、提升骨载荷量及修复骨微结构，并推 测其机制与调控趋化素有关。另有研究观察了六味地黄汤对 PMOP模型大鼠的早期干预作用，与模型组比较，六味地黄 汤组可以提高模型大鼠BMD值及血清E2、钙、磷水平，明 显减少骨小梁断裂和髓腔内脂肪细胞的比例，减少模型大鼠
CJCM中医临床研究2021年第13卷第10期
势法对多种动物进行PMOP造模，均能取得满意的模型，然 而，由于成本高、周期长等原因，骨质疏松症造模研究中最 常用的动物仍为大鼠。
2单味中药实验研究
在基础研究中，单味中药提取物有应用方便、不良反应 小的优势，对PMOP显示出令人满意的疗效。如有研究探讨 了积雪草酸提取液抑制PMOP大鼠的作用，结果显示，与模 型组相比，中\高剂量积雪草酸组BMD、骨体积分数、骨小 梁数量、骨小梁厚度、ALP显著升高，结构模型指数显著降 低，对去卵巢大鼠骨质疏松显示出良好的抑制作用何。赵亮 等冋釆用盐炙杜仲提取物治疗去卵巢骨质疏松大鼠，并观 察对骨代谢生化指标的影响，结果显示，与模型组相比，杜 仲高剂量组大鼠血清ALP和OC显著升高，TRACP显著降 低，表明杜仲提取物可通过改善血清骨转换水平，促进成骨 细胞分化，促进骨形成，治疗骨质疏松症，之后对大鼠全身、 股骨和椎骨的BMD的检测也进一步证实其对PMOP的确切 疗效。芹菜素是一种来源于芫花、卷柏等植物中的黄酮类化 合物，属植物类的雌激素，具有抗病毒、抗炎、抗氧化等功 效问。研究显示，给予去势大鼠皮下注射芹菜素，大鼠骨密度 及钙、磷浓度均较模型组显著改善，血清PINP和0-CTX的水 平显著降低，提示一定剂量的芹菜素具有抗骨质疏松效果何。 此外，葛根素也是植物性雌激素的一种，研究显示，葛根素 能明显提高PMOP大鼠模型的护骨素(Osteoprogerin, OPG) 分泌，降低RANKL和ALP水平，发挥雌激素样作用，进而 有效促进骨质形成、钙化作用，可用于PMOP的治疗叫呵。 另有研究显示，肥胖与PMOP间存在密切的联系，高脂饮食 能降低卵巢切除大鼠的BMD和胫骨最大载荷，引起骨质量 及骨的微观结构的破坏，而巴戟天醇提取物能够抑制骨量流 失，维持骨的正常微观结构，提高骨的最大载荷，在肥胖伴 PMOP患者中显示出潜在的应用前景两。以上说明，中药提 取物以其高效低毒的生物学特性在PMOP实验中显示出重要 作用，今后仍需加大中药有效成分的研究与，开发更多有效 成分，充分发挥中药在PMOP中的疗效。
苏 奇i张文贤”王 斌1严其凯1赵建伟1 (1.甘肃中医药大学，甘肃 兰州，730101； 2.甘肃省中医院，甘肃 兰卅，730050)
中图分类号：R274 文献标识码：A 文章编号：1674-7860 (2021) 10-0146-03 证型：BG
【摘 要】绝经后骨质疏松症(Postmenopausal Osteoporosis, PMOP)是原发性骨质疏松症最常见的类型之一，主要以慢性 周身疼痛、活动受限、骨骼变形甚至骨折为特点。近年来PMOP的发病率呈上升趋势，严重威胁女性的生命健康。中医药在治 疗PMOP方面具有独特的优势，实验研究方面取得一定进展。本文从实验研究的动物造模、单味药物、复方及针炎疗法等方面 就近年来中医药治疗PMOP的实验研究做一综述，以期为临床PMOP的中医药防治提供参考。
PMOP是指绝经后由于卵巢功能减退，雌激素及相关内 分泌改变引起的骨密度(Bone Mineral Density, BMD)降低 和骨微结构受损，导致骨脆性和骨折风险增加的骨代谢性疾 病叫主要表现为慢性周身疼痛，活动受限，甚者出现骨骼变 形、驼背、身高变矮及骨折等。研究显示，我国骨质疏松症 患者已超7 000万人，其中PMOP约占80%,且随着老龄化 的加快，PMOP患者数量呈逐年上升的趋势叫 成为我国普 遍存在的公共卫生问题。PMOP的确切病理生理学机制尚未 完全阐明，现代医学大多以补钙、雌激素替代及调节内分泌 等治疗为主，虽能取得一定的疗效，但周期长、费用高、不 良反应多，严重影响了患者治疗的依从性，如雌激素的应用 增加乳腺癌患病风险等內。PMOP属于中医学“骨痿”“骨 枯”''腰痛”等范畴，如《素问•萎论篇》:“肾主身之骨髓…… 肾气热，则腰脊不举，骨枯而髓减，发为骨萎。”即所谓肾主 骨生髓，肾精充盛，骨髓才能有所化生，骨骼坚固有力；肝 主筋，可约束骨骼，脾主运化，能荣养四肢关节；绝经后妇 女各脏腑功能衰减，天癸竭，以致肾虚则髓空骨枯，肝虚则 筋骨失濡，脾虚则肌肉失养，最终导致骨痿不用旳。根据其 不同的病因病机给予多层次、多角度的辨证施治，具有疗效 好、性价比高、不良反应少等优势眄近年来，中医药在防 治PMOP的基础实验研究中取得了丰富的成果。本文综述了 中医药在防治PMOP实验研究中的进展，以期为临床防治提 供参考。
1 PMOP动物模型的造模方法
建立标准、科学的模型，能为PMOP研究提供可靠的实
验依据，目前研究中多釆用双侧卵巢切除法，又称去势法, 最初由Saville于1969年首次开展，并沿用至今；动物多釆 用大鼠，以SD和Wistar为主，因其卵巢被切除后，雌二醇 (Estradiol, E2)水平明显降低，高转换型骨量减少，骨强度 下降，其机制与人类绝经后骨丢失的状态相似，且大鼠有着 成本低、易饲养、重复性好的优势，一般术后2个月即能达 到PMOP状态，且随着月龄的增加，骨质疏松的病理表现更 为突出固。如研究显示％卵巢切除术后10周，大鼠腰椎、 股骨BMD显著下降，术后3个月，血清骨钙素(Osteocalcin, OC)、I 型前胶原氨基端前肽(N-terminal Propeptide of type I Precollagen, PINP)显著降低，I 型胶原 C 端肽(CTX- I ) 显著升高，并伴有腰椎骨小梁结构明显塌陷、骨间距增宽、 骨小梁变细等病理改变，表明去势造模法能有效模拟人类 PMOP状态，有着良好的骨生，最终延缓PMOP的发生发展四。王剑等⑷在 研究中釆用骨组织Runt相关转录因子2 (Runx2)、成骨细胞 特异性转录因子Osterix启动子甲基化水平评估了鹿茸中药 复方对PMOP大鼠的疗效，与模型组比较，鹿茸中药复方组 第1〜6腰椎骨密度明显升高，骨组织Runx2启动子-955〜 -456 bp CpGl、CpG3甲基化水平以及Osterix启动子-1 082〜 -583 bp CpGl甲基化水平明显降低，故推测鹿茸中药复方可 通过降低骨组织Runx2、Osterix启动子甲基化水平发挥防治 PMOP的作用。此外，有研究认为PMOP病机是以肾虚为本， 并与脾虚、血瘀相互夹杂，釆用补肾健脾活血方治疗去势大 鼠，能明显增高BMD、最大载荷及刚度，提高骨形成蛋白 (BMP2)、Smadl、Runx2、OPG基因和蛋白表达水平，从而 发挥防治PMOP的功效上述实验均通过检测不同的指标, 如信号通路、血清指标、甲基化水平、基因表达水平等，验 证了中药复方在PMOP治疗中的作用，然而由于复方成分复 杂，药物在体内的信号调节机制发挥多种协同作用，也有待 于今后更深入的探索研究。
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Clinical Journal of Chinese Medicine 2021 Vdl.(13) No.10
中医药治疗绝经后骨质疏松症的实验研究进展
A review on experimental research on treating postmenopausal osteoporosis in TCM