实验常用试剂、缓冲液的配制方法.

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实验常用试剂、缓冲液的配制方法
1、1M Tris-HCl □组份浓度 1 M Tris-HCl (pH7.4,7.6,8.0)□配制量 1L
□配置方法 1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

pH值浓HCl 7.4 约70mL 7.6 约60mL 8.0 约42mL
4. 将溶解定容至1L。

5. 高温高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5 M Tris-HCl □组份浓度 1.5 M Tris-HCl (pH8.8)□配制量 1L
□配置方法 1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。

2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调pH值至8.8。

4. 将溶液定容至1L。

5. 高温高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变
化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10×TE Buffer □组份浓度 100 mM Tris-HCl,10 mM EDTA (pH 7.4,7.6,
8.0)□配制量 1L
□配置方法 1. 量取下列溶液,置于1L烧杯中。

1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4,7.6,8.0) 100mL 500 mM EDTA(pH8.0) 20mL
2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水,均匀混合。

3. 将溶液定至1L后,高温高压灭菌。

4. 室温保存。

4、3 M 醋酸钠□组份浓度 3 M 醋酸钠(pH5.2)□配制量 100mL
□配置方法 1. 称取40.8gNaOAc•3H2O置于100~200mL烧杯中,加入约40mL的去离子水搅拌溶解。

2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。

3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。

4. 高温高压灭菌后,室温保存。

5、PBS Buffer □组份浓度 137 mM NaCl,2.7mM KCl,10 mM
Na2HPO4,2 mM KH2PO4 □配制量 1L
□配置方法 1. 称量下列试剂,置于1L烧杯中。

NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 滴加HCl将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1L。

4. 高温高压灭菌后,室温保存。

注意:上述PBS Buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mM CaCl2
和0.5 mM MgCl2。

6、10 M醋酸铵□组份浓度 10 M醋酸铵□配制量 100mL
□配置方法 1. 称量77.1g醋酸铵置于100~200 mL烧杯中,加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100mL。

3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。

4.密封瓶口于室温保存。

注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。

7、Tris- HCl平衡苯酚□配置方法
1. 使用原料:大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。

但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。

同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。

因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

2. 操作注意:苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。

所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。

3. 苯酚平衡:因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上,苯酚平衡操作方法如下:
①液化苯酚应贮存于-20℃,此时的苯酚呈现结晶状态。

从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。

②加入羟基喹啉(8-Quinolinol)至终浓度0.1%。

该化合物是一种还原剂、RNA 酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,
同时因其呈黄色。

有助于方便识别有机相。

③加入等体积的1M Tris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。

④重复操作步骤③。

⑤加入等体积的0.1M Tris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。

⑥重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相。

⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

8、苯酚/氯仿/异戊醇□配置方法
1. 说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)。

氯仿可使蛋白(25 :24 :1)质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2. 配置方法:将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)均匀混合后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

9、10%(W/V)SDS □组份浓度 10%(W/V)SDS □配制量 100mL
□配置方法 1.称量10g高纯度的SDS置于100~200mL烧杯中,加入约80mL的去离子水,68℃加热溶解。

2. 滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。

3. 将溶液定容至100mL后,室温保存。

10、2 N NaOH □组份浓度2N NaOH □配制量100mL □配置方法
1.量取80mL去离子水置于100~200mL塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。

2. 称取8g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。

3. 待NaOH完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至100mL。

4. 将溶液转移至塑料容器中后,室温保存。

11、2.5 N HCl □组份浓度2.5 N HCl □配制量 100mL
□配置方法 1. 在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸(11.6N),均匀混合。

2. 室温保存。

12、5 M NaCl □组份浓度5 M NaCl □配制量 1L
□配置方法 1. 称取292.2g NaCl置于1L烧杯中,加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至1L后,适量分成小份。

3. 高温高压灭菌后,4℃保存。

13、20%(W/V)Glucose □组份浓度 20%(W/V)Glucose □配制量 100mL
□配置方法 1. 称取20g Glucose置于100~200mL烧杯中,加入约80mL的去离子水后,搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至100mL。

3. 高温高压灭菌后,4℃保存。

14、Solution I □组份浓度 25 mM Tris-HCl(pH8.0),10mM
EDTA,50mM Glucose
(质粒提取用)□配制量 1L
□配置方法 1. 量取下列溶液,置于1L烧杯中。

1M Tris-HCl(pH8.0) 25mL 0.5 M EDTA(pH8.0) 20mL 20%Glucose(1.11M) 45mL dH2O 910mL 2. 高温高压灭菌后,4℃保存。

3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A(20mg/mL)。

15、Solution II □组份浓度 250mM NaOH, 1%(W/V)SDS (质粒提取用)□配制量 500mL
□配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。

10%SDS 50mL 2N NaOH 50mL 2. 加灭菌水定容至500mL,充分混匀。

3. 室温保存。

此溶液保存时间最好不要超过一个月。

注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌。

16、Solution III □组份浓度 3M KOAc,5M CH3COOH (质粒提取用)□配制量500mL
□配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。

KOAc 147g CH3COOH 57.5mL 2. 加入300mL去离子水后搅拌溶解。

3. 加去离子水将溶液定容至500mL。

4. 高温高压灭菌后,4℃保存。

17、0.5M EDTA □组份浓度0.5 M EDTA (pH8.0) □配制量 1L
□配置方法 1. 称取186.1g Na2EDTA•2H2O,置于1L烧杯中。

2. 加入约800mL
的去离子水,充分搅拌。

3. 用NaOH调节pH值值8.0(约20g NaOH)。

注意:pH值至8.0时,EDTA才能完全溶解。

4. 加去离子水将溶液定容至1L。

5. 适量分成小份后,高温高压灭菌。

6. 室温保存。

18、1 M DTT □组份浓度1 M DTT □配制量 20mL
□配置方法 1. 称取3.09g DTT,加入到50mL塑料离心管内。

2. 加20mL的0.01 M 的NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。

3. 适量分成小份后,-20℃保存。

19、10mM ATP □组份浓度10mM ATP □配制量20mL
□配置方法 1. 称取121mg Na2ATP•3H2O,加入到50mL塑料离心管内。

2. 加20mL的25mM Tris-HCl(pH8.0),搅拌溶解。

3. 适量分成小份,-20℃保存。

分子生物学实验常用培养基的配制方法
1、Ampicillin □组份浓度 100mg/ml Ampicillin (100mg/ml)□配制量 50mL
□配置方法 1. 称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。

2. 加入40mL灭菌水,充分混合溶解后,定容至50mL。

3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。

4. 小份分装(1mL/份)后,-20℃保存。

2、IPTG □组份浓度 24mg/mL IPTG (24mg/mL)□配制量 50mL
配置方法 1. 称量1.2g IPTG置于50mL离心管中。

2. 加入40mL灭菌水,充分混合溶解后,定容至50mL。

3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。

4. 小份分装(1mL/份)后,-20℃保存。

3、X- Gal □组份浓度 20mg/mL X- Gal (20mg/mL)□配制量 50mL
□配置方法 1. 称取1g X-Gal置于50mL离心管中。

2. 加入40mL DMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后,定容至50mL。

3. 小份分装(1mL/份)后,-20℃保存。

4、LB培养基□组份浓度 1%(W/V)Tryptone,0.5%(W/V)Yeast Extract,1%(W/V)NaCl □配制量 1L
□配置方法 1. 称量下列试剂,置于1L烧杯中
Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 滴加5N NaOH(约0.2mL),调节pH值至7.0。

4. 高温高压灭菌后,4℃保存。

5、LB/Amp培养基□组份浓度 1%(W/V) Tryptone 0.5%(W/V) Yeast Extract 1%(W/V)NaCl 0.1mg/mL Ampicillin □配制量 1L
□配置方法 1. 称量下列试剂,置于1L烧杯中 Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 滴加5N NaOH(约
0.2mL),调节pH值至7.0。

4. 加去离子水将培养基定容至1L。

5. 高温高压灭菌后,冷却至室温。

6. 加入1mL Ampicillin(100mg/mL)后均匀混合。

7. 4℃保存。

6、TB培养基□组份浓度 1.2%(W/V) Tryptone 2.4%(W/V) Yeast Extract
0.4%(V/V)Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 □配制量 1L
□配置方法 1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17M KH2PO4,0.72M
K2HPO4)100mL。

2.称取下列试剂,置于1L烧杯中。

Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL
3. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。

4. 加去离子水将培养基定容至1L 后,高温高压灭菌。

5. 待溶液冷却至60℃以下时,加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。

6. 4℃保存。

7、TB/Apm培养基□组份浓度 1.2%(W/V) Tryptone 2.4%(W/V) Yeast Extract 0.4%(V/V) Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 0.1mg/mL Ampicillin □配制量1L □配置方法
1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17M KH2PO4,0.72M K2HPO4)100mL。

溶解
2.31g KH2PO4和2.54g K2HPO4于90mL的去离子水中,搅拌溶解后,加去离子水定容至100mL,高温高压灭菌。

2. 称取下列试剂,置于1L烧杯中。

Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。

4. 加去离子水将培养基定容至1L后,高温高压灭菌。

5. 待溶液冷却至60℃以下时,加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mL Ampicillin(100mg/mL)。

6. 均匀混合后4℃保存。

8、SOB培养基□组份浓度 2%(W/V) Tryptone 0.5%(W/V) Yeast Extract
0.05%(W /V)NaCl 2.5mM KCl 10mM MgCl2 □配制量1L □配置方法
1. 配制250mM KCl溶液。

在90mL的去离子水中溶解1.86g KCl后,定容至
100mL。

2. 配制2M MgCl2溶液。

在90mL的去离子水中溶解19g MgCl2后,定容至
100mL,高温高压灭菌。

3. 称取下列试剂,置于1L烧杯中。

Tryptone 20g Yeast Extract 5g NaCl 0.5g 4. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。

5 量取10mL 250 mM KCl溶液,加入到烧杯中。

6. 滴加5N NaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0。

7. 加入去离子水将培养基定容至1L。

8. 高温高压灭菌后,4℃保存。

9. 使用前加入5mL灭菌的2M MgCl2溶液。

9、SOC培养基□组份浓度 2%(W/V) Tryptone 0.5%(W/V) Yeast Extract 0.05%(W /V) NaCl 2.5mM KCl 10mM MgCl2 20mM 葡萄糖□配制量100mL □配置方法
1. 配制1M葡萄糖溶液。

将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中,充分溶解后定容至100mL,用0.22μm滤膜过滤除菌。

2. 向100mL SOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL,均匀混合。

3. 4℃保存。

10、2×YT培养基□组份浓度 1.6%(W/V)Tryptone, 1%(W/V)Yeast Extract,0.5%(W/V)NaCl □配制量 1L
□配置方法 1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。

Tryptone 16g Yeast Extract 10g NaCl 5g 2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 滴加1N KOH,调节pH值至7.0。

4. .加水离子水将培养基定容至1L。

5. 高温高压后,4℃保存。

11、Φb×broth培养基□组份浓度 2%(W/V)Tryptone, 0.5%(W/V)Yeast Extract,0.5%(W/V)MgSO4•7H2O □配制量 1L
□配置方法 1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。

Tryptone 20g Yeast Extract 5g MgSO4•7H2O 5g 2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 滴加1N KOH,调节pH值至7.5。

4. .加水离子水将培养基定容至1L。

5. 高温高压后,4℃保存。

12、NZCYM培养基□组份浓度 0.5%(W/V) Yeast Extract 0.1%(W/V)Casamino Acid 1%(W /V) NZ胺 0.5%(W /V) NaCl 0.2%(W /V)
MgSO4•7H2O □配制量 1L
□配置方法 1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。

Yeast Extract 5g Casamino Acid 1g NZ胺10g NaCl 5g MgSO4•7H2O 2g 2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 滴加5N NaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0。

4. .加水离子水将培养基定容至1L。

5. 高温高压后,4℃保存。

13、NZYM培养基□组份浓度 0.5%(W/V) Yeast Extract 1%(W /V) NZ胺0.5%(W /V) NaCl 0.2%(W /V)MgSO4•7H2O □配置方法 NZYM培养基除不含Casamino Acid(酪蛋白氨基酸)外,其他成份与NZCYM培养基相同。

14、NZM培养基□组份浓度 1%(W /V) NZ胺 0.5%(W /V) NaCl 0.2%(W /V)MgSO4•7H2O □配置方法 NZM培养基除不含Yeast Extract(酵母提取物)外,其他成份与NZYM培养基相同。

15、一般固体培养基的□配置方法 1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基,在高温高压灭菌前,加入下列试剂中的一种。

配制 Agar(琼脂:铺制平板用)
15g/L Agar(琼脂:配制顶层琼脂用) 7g/L Agarose(琼脂糖:铺制平板用) 15 g/L Agarose(琼脂糖:配制顶层琼脂用) 7g/L 2. 高温高压灭菌后,带上手套取出培养基,摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀(此时培养基温度很高,小心烫伤)。

3. 待培养基冷却至50~60℃时,加入热不稳定物质(如抗生素),摇动容器充分混匀。

4. .铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养皿)。

16、LB/Amp/X-Gal/IPTG □组份浓度 1%(W /V) Tryptone
平板培养基 0.5%(W/V) Yeast Extract 1%(W/V) NaCl 0.1mg/mL Ampicillin 0.5%(W /V) IPTG 0.04mg/mL X-Gal 1.5%(W /V)Agar □配制量 1L
□配置方法 1. 称取下列试剂,置于1L烧杯中。

Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 滴加5N NaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0。

4. 加水离子水将培养基定容至1L后,加入15gAgar。

5. 高温高压灭菌后,冷却至60℃左右。

6. 加入1mL Ampicillin(100mg/mL)、1mL IPTG(24mg/mL)、2mL X-Gal
(20mg/mL)后均匀混合。

7. 铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养基)。

8. 4℃保存平板。

17、TB/Amp/X-Gal/IPTG □组份浓度
1.2%(W /V) Tryptone
平板培养基 2.4%(W/V) Yeast Extract 0.4%(W/V) Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 0.1mg/mL Ampicillin 0.024mg/mL IPTG 0.04mg/mL X-Gal 1.5%(W /V)Agar □配制量 1L
□配置方法 1.配制磷酸盐缓冲液(0.17M KH2PO4,0.72M K2HPO4)100mL。

2. 称取下列试剂,置于1L烧杯中。

Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。

4. 加水离子水将培养基定容至1L后,加入15gAgar。

5. 高温高压灭菌后,冷却至60℃左右。

6. 加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mL Ampicillin (100mg/mL)、1mL IPTG(24mg/mL)、2mL X-Gal(20mg/mL)后均匀混合。

7. 铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养基)。

8. 4℃保存平板。

生物化学实验常用试剂的配制方法
1、0.5mol/L氢氧化钠溶液□组份浓度0.5mol/L □配制量2L □配置方法 1.准确称取氢氧化钠40g。

2.用去离子水溶解并稀释至2L。

2、0.5mol/L盐酸溶液□组份浓度0.5mol/L □配制量2L □配置方法 1.准确量取盐酸83.4mL。

2.用去离子水稀释至2L。

4、0.2%葡萄糖标准溶液□组份浓度 0.2%□配制量 1L
□配置方法 1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中,在70℃干燥2小时。

2.干燥器中冷却至室温,重复干燥,冷却至恒重。

3.准确称取葡萄糖2.000g。

4.用去离子水溶解并定容至1L 5.于4℃保存。

5、250μg/mL牛血清□组份浓度250μg/mL 白蛋白标准液□配制量 2L
□配置方法 1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白。

2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L。

3.4℃保存。

6、Folin试剂甲
□配置方法 1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水中,加入50g无水碳酸钠,溶解,待用。

2.称取0.5g酒石酸钾钠,溶于80mL去离子水中,加入0.25g硫酸铜•5水,溶解。

3.将1:2:去离子水按20:4:1的比例混合即可。

4. 4℃保存,可用一周。

7、Folin试剂乙□配置方法
1.在500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠•2水25.0359g,钼酸钠•2水6.2526g,去离子水175mL,85%磷酸1
2.5mL,浓盐酸25mL,充分混合。

2.回流10小时,再加硫酸锂37.5g,去离子水12.5mL及数滴溴。

3.然后开口沸腾15min,以驱除过量的溴,冷却后定容到250mL。

4.于棕色瓶中保存,可使用多年
注意:上述制备地Folin试剂乙地贮备液浓度一般在2mol/L左右,几种操作方案都是把Folin试剂乙稀释至1mol/L的浓度作为应用液,我们这时是把贮备液于使用前稀释18 倍,使之浓度为0.1mol/L略高。

这种稀释18倍后的Folin 试剂乙就是上文称之为的“应用液”。

Folin试剂乙贮备液浓度的标定,一般是以酚酞为指示剂。

用Folin试剂乙去滴定1mol/L左右的标准氢氧化钠溶液,当溶液颜色由红变为紫灰,再突然变成墨绿即为终点,如果用氢氧化钠去滴定Folin试剂乙,终点不太好掌握,溶液地颜色是由浅黄变为浅绿,再变为灰紫色为终点。

8、DNS 试剂
□配置方法 1.取3,5-二硝基水杨酸10g,加入2mol/L氢氧化钠溶液200mL。

(3,5-二硝基水杨酸试剂) 2.将3,5-二硝基水杨酸溶解,然后加入酒石酸钾钠300g。

3. 待其完全溶解,用去离子水稀释至2000mL,棕色瓶保存。

9、5%蔗糖溶液□组份浓度 5%□配制量 1L
□配置方法称取蔗糖50g,用去离子水溶解定容至1L。

10、0.1mol/L蔗糖溶液□组份浓度0.1mol/L □配制量 1L
□配置方法称取蔗糖34.230g,用去离子水溶解并定容至1L。

11、20%乙酸溶液□组份浓度 20%□配制量 1.2L
□配置方法量取冰乙酸300mL,用去离子水稀释至1200mL。

12、30%(W/V)Acrylamide
□组份浓度 30%(W/V)Acrylamide 0.05%□配制量 1L
□配置方法 1.称量下列试剂,置于1L烧杯中 Acrylamide 290g BIS 10g
2.向烧杯中加入约600mL的去离子水,充分搅拌溶解
3.加入去离子水将溶液定容至1L,用0.45μm滤膜滤去杂质。

4.于棕色瓶中4℃保存。

注意:丙稀铣胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用有积累性,配制时应戴手套等。

聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为有可能含有少量的未聚合成份。

13、40%(W/V)Acrylamide
□组份浓度 40%(W/V)Acrylamide 0.05%□配制量 1L
□配置方法 1.称量下列试剂,置于1L烧杯中 Acrylamide 380g BIS 20g
2.向烧杯中加入约600mL的去离子水,充分搅拌溶解
3.加入去离子水将溶液定容至1L,用0.45μm滤膜滤
去杂质。

4.于棕色瓶中4℃保存。

注意:丙稀铣胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用有积累性,配制时应戴手套等。

聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为有可能含有少量的未聚合成份。

14、10%(W/V)过硫酸铵□组份浓度 10%(W/V)过硫酸铵□配制量 10mL
□配置方法 1.称取1g过硫酸铵。

2.加入10mL的去离子水后搅拌溶解。

3.贮存于4℃。

注意:10%过硫酸胺溶液在4℃保存时间可使用2周左右,超过期限会失去催化作用。

15、考马斯亮蓝R-250染色液
□组份浓度 0.1%(W/V)考马斯亮蓝R-250,25%(V/V)异丙醇, 10%(V/V)冰醋酸□配制量 1L
□配置方法 1.称取1g考马斯亮蓝R-250,置于1L烧杯中。

2.量取250mL的异丙醇加入上述烧杯中,搅拌溶解。

3.加入100mL的冰乙醋酸,均匀搅拌。

4.加入650mL的去离子水,均匀搅拌。

5.用滤纸出去颗粒物质后,室温保存。

16、考马斯亮蓝染色脱色液
□组份浓度 10%(V/V)醋酸,5%(V/V)乙醇□配制量 1L
□配置方法 1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。

醋酸 100mL 乙醇 50mL dH2O 850mL 2.充分混合后使用。

17、凝胶固定液
□组份浓度 50%(V/V)甲醇,10%(V/V)醋酸 (SDS-PAGE银氨染色用) □配制量100L □配置方法 1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。

甲醇 500mL 醋酸 100mL dH2O 400mL 2.均匀混合后室温保存。

18、凝胶处理液
□组份浓度 50%(V/V)甲醇,10%(V/V)戊二醛 (SDS-PAGE银氨染色用) □配制量1L □配置方法 1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。

甲醇 50mL 戊二醛 10mL dH2O 40mL 2. 均匀混合后室温保存。

19、凝胶染色液
□组份浓度 0.4%(W/V)硝酸银,1%(V/V)浓氨水, (SDS-PAGE银氨染色用) 0.04%(W/V)氢氧化钠□配制量 100L
□配置方法 1.量取下列试剂,加入100~200mL试剂瓶中。

20%硝酸银 2mL 浓氨水 1mL 4%氢氧化钠 1mL dH2O 96mL
2.均匀混合。

该溶液应为无色透明状。

如氨水浓度过低时溶液会呈现混浊状,此时应补加浓氨水,直至透明。

3.本染色液应现用现配,不宜保存。

20、显影液□组份浓度 0.005%(V/V)柠檬酸,0.02%(V/V)甲醛 (SDS-PAGE银氨染色用) □配制量 1L
□配置方法 1.称取下列试剂,置于1L试剂瓶中。

柠檬酸 50mg 甲醛 0.2mL 2.加入1L去离子水后,摇动混合后溶解。

3.室温保存。

21、45%乙醇溶液□组份浓度 45%□配制量 1L
□配置方法量取无水乙醇450mL,加入去离子水550mL,混匀。

22、5%的十二烷基硫酸钠溶液□组份浓度 5%(W/V)□配制量 0.1L
配置方法:称取5.0g十二烷基硫酸钠,溶于100mL4%的乙醇溶液中。

23、三氯甲烷-异戊醇混合试剂
配置方法取500mL三氯甲烷试剂,加入21mL异戊醇试剂,混匀。

24、1.6%乙醛溶液□组份浓度 1.6%□配制量 0.1L
□配置方法取47%乙醛3.4mL,用去离子水定容至100mL。

25、二苯胺试剂
□配置方法 1.称取二苯胺试剂0.8g,溶解于180mL冰乙酸中, 2.再加入8mL高氯酸混匀。

3. 临用前加入0.8mL 1.6%乙醛溶液。

注意:配制完成后试剂应为无色。

26、15%三氯乙酸溶液□组份浓度 15%□配制量 2L
□配置方法称取三氯乙酸300g,用去离子水溶解定容至2000mL。

27、1%谷氨酸溶液□组份浓度 1%□配制量 0.5L
□配置方法 1.称取5g谷氨酸,先用适量得用去离子水溶解。

2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。

3. 最后用去离子水定容至0.5L。

28、1%丙酮酸溶液□组份浓度1%□配制量 0.5L
□配置方法 1.称取5g丙氨酸,先用适量得用去离子水溶解。

2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。

3. 最后用去离子水定容至0.5L。

29、0.1%的碳酸氢钾溶液□组份浓度 0.1%□配制量 0.5L
□配置方法称取碳酸氢钾0.5g,用去离子水溶解定容至0.5L。

30、0.05%的碘乙酸溶液□组份浓度 0.05%□配制量 0.25L
□配置方法称取0.125g碘乙酸,用去离子水溶解定容至0.25L。

31、Locke氏溶液□配制量 2L
配置方法称取18g氯化钠,0.84g氯化钾, 48g氯化钙,0.3g碳酸氢钠,2g葡萄糖,用去离子水溶解定容至2000mL。

32、0.2mol/L的丁酸溶液□组份浓度 0.2mol/L □配制量1L □配置方法 1.量取18mL正丁酸试剂。

2.用1mol/L的氢氧化钠中和。

3.再用去离子水定容至1L。

33、0.1mol/L的硫代硫酸钠溶液□组份浓度 0.1mol/L □配制量 10L
□配置方法称248.17g硫代硫酸钠,用去离子水溶解并定至10L。

34、0.1mol/L 的碘溶液□组份浓度0.1mol/L □配制量1L □配置方法 1.称取碘12.7g和碘化钾
25g。

2.用去离子水溶解并定容至1L。

3.用0.1mol/L的硫代硫酸钠标定。

35、10%氢氧化钠溶液□组份浓度 10%□配制量 2L
□配置方法称取200g氢氧化钠,用去离子水溶解并定容至2L。

36、10%盐酸溶液□组份浓度 10%□配制量 0.2L
□配置方法量取浓盐酸49.3mL,用去离子水定至0.2mL。

37、0.1%标准丙氨酸溶液□组份浓度 0.1%□配制量 0.5L
□配置方法称取丙氨酸0.5g,用去离子水溶解并定容至0.5mL。

38、0.1%标准谷氨酸溶液□组份浓度 0.1%□配制量 0.5L
□配置方法称取谷氨酸0.5g,用去离子水溶解并定容至500mL。

39、0.1%水合茚三酮乙醇溶液□组份浓度 0.1%□配制量 1L
□配置方法称取1g水合茚三酮试剂,溶于1000mL无水乙醇中。

40、酚溶液
□配置方法在大烧杯中加入80mL去离子水,再加入300g 苯酚,在水浴中加热搅拌、混合至苯酚完全溶解。

将该溶液倒入盛有200mL去离子水的1000mL分液漏斗内,轻轻振荡混合,使其成为乳状液。

静止7~10小时,乳状液变成两层透明溶液,下层为被水饱和的酚溶液,放出下层,贮存于棕色瓶中备用。

41、
0.5%淀粉溶液□组份浓度 0.5%□配制量 0.1L
□配置方法称取淀粉0.5g,用去离子水溶解定容至0.1L。

42、对羟基联苯试剂配置方法称取对羟基联苯1.5g,溶于100mL0.5%氢氧化钠溶液中,配制成
1.5%的溶液。

若对羟基联苯颜色较深,应用丙酮
或无水乙醇重结晶,放置时间较长后,会出项针状结晶,应摇匀后使用。

生物化学实验常用缓冲液的配制方法
1、0.2 mol/L 磷酸缓冲液□组份浓度 0.2mol/L
(pH 6.0)□配制量 1L
□配置方法 1. 称取磷酸氢二钠•12水 8.82 g。

2. 称取磷酸二氢钠•2水 27.34g。

3. 用去离子水溶解并定容至1L。

室温保存。

注意:此为母液,使用时稀释40倍使用。

2、洗脱液□组份浓度 0.15mol/L (含0.15mol/L氯□配制量 10L
化钠的0.005mol/L □配置方法 1.称取氯化钠87.66g。

pH 6.0的磷酸缓冲液) 2. 用0.2mol/L pH6.0的
磷酸缓冲液250mL溶解。

3. 用去离子水稀释至10 L。

室温保存。

3、0.3mol/L磷酸缓冲液□组份浓度
0.3mol/L (pH7.8)□配制量 0.5L
□配置方法 1.准确称取磷酸氢二钠•12水49.150g。

2.磷酸二氢钠•2水2.000g。

3. 用去离子水溶解并定容至0.5L。

室温保存。

注意:此为母液,使用时稀释10倍使用。

4、0.2mol/L乙酸缓冲液□组份浓度 0.2mol/L (pH4.6)□配制量2L □配置方法 1.准确称取乙酸钠•3水54.44g。

2. 加入23mL冰乙酸,溶解。

3. 用去离子水溶解并定容至2L。

4℃保存。

5、0.2mol/L磷酸-柠檬酸□组份浓度0.2mol/L 缓冲液□配制量各1L (pH 2.6、
4.6、6.6)
□配置方法 1. 母液A(0.2mol/L的Na2HPO4溶液):称取Na2HP O4•12水143.256g,用去离子水定容至2L。

2. 母液B(0.1mol/L的柠檬酸溶液):称取柠檬酸•1水42.028g 用去离子水溶解定容至2L。

3. pH2.6、
4.6、6.6的三种缓冲液如下表配制: pH值 A(mL) B(mL) 2.6 109.0 891.0 4.6 467.5 532.5 6.6 727.5 272.5 4. 按上表混匀后,4℃保存。

6、
20×SSC 缓冲液□配制量 1L
(pH7.0)□配置方法 1.准确称取175.2g氯化钠。

2.准确称取88.2g柠檬酸钠•2水。

3.溶解于800mL去离子水中。

4.加入数滴10mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。

5.加去离子水定容至1L。

注意:按实验需要可分装后高压灭菌。

10×SSC、5×SSC、1×SSC可由20×SSC做相应稀释得到。

7、0.15mol/L氯化钠- □组份浓度 0.15mol/L 乙二胺四乙酸二钠□配制量 1L
缓冲液□配置方法 1.准确称取氯化钠8.77g。

(pH8.0) 2. 称取乙二胺四乙酸二钠37.2g。

3. 溶于800mL去离子水中。

4.用固体的氢氧化钠调pH值为8.0。

5.加去离子水定容至1L。

8、1/15mol/L的磷酸盐□组份浓度 0.15mol/L 缓冲液□配制量 1L (pH7.6)□配置方法
1.溶液甲(1/15mol/L的KH2PO4溶液):称取KH2PO4 9.078g,用去离子水溶解定容至1L。

2. 溶液乙(1/15mol/L的Na2HPO4溶液):称取Na2HPO4• 2水11.876g(或磷酸氢二钠•12水2
3.894g)用去离子水溶解定容至1L。

3.pH7.6磷酸盐缓冲液:将①和②按1.4:8.6比例混合即可。

9、5×Tris-GlycineBuffer □组份浓度 0.125M Tris,1.25M Glycine,0.5%(w/v)SDS
(SDS-PAGE电泳缓冲液)□配制量1L □配置方法 1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。

Tris 15.1g Glycine 94g SDS 5.0g 2.加入约800mL的去离子水,搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至1L后,室温保存。

10、5×SDS-PAGE □组份浓度 250mM Tris-HCl(pH6.8) Loading Buffer 10%(W/V) SDS 0.5%(W/V) BPB 50%(V/V)甘油 5%(W/V)β-巯基乙醇□配制量 5mL
□配置方法 1.量取下列试剂,置于10mL塑料离心管中。

1M Tris-HCl 1.25mL SDS 0.5g BPB 25mg 甘油 2.5mL 2.加入去离子水溶解后定容至5mL。

3.小份(500μl/份)分装后,于室温保存。

4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。

5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右生物化学实验常用柱料数据及性质 1、DEAE阴离子交换纤维素(1)纤维素的处理
取纤维素干品用蒸馏水浸泡,充分溶涨并搅拌均匀,
过夜。

次日再搅匀,静止30min留下沉集部分(重复3次),用真空泵抽干。

然后用适量的0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸泡30min,抽干,蒸馏水洗至中性;再用适量的0.5mol/L的盐酸溶液浸泡30min,抽干,蒸馏水洗至中性;重复用
0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸泡30min,抽干,蒸馏水洗至中性。

最后用
0.005mol/L pH6.0的磷酸缓冲液浸泡待用。

(2)纤维素的重生
回收的纤维素先用0.5mol/L氯化钠-0.5mol/L氢氧化钠
溶液浸泡,再按上述(1)操作处理,即可再次投入使用。

(3)纤维素的保存
回收后,用0.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡30min后,蒸
馏水洗至中性,抽干,于鼓风干燥箱中60℃烘干后,保存。

2、SephadexG型葡聚糖凝胶
(1)凝胶的特性要点
葡聚糖G后面的数字代表不同的交联度,数值越大交联度越小,吸
水量越大。

其数值大致为吸水量X的10倍。

Sephadex对碱和弱酸稳定(在
0.1mol/L盐酸中可以浸泡1~2小时)。

在中性时可以高压灭菌。

不同型号中又有颗粒粗细之分。

颗粒粗的分离效果差,流速快。

颗粒越细分离效果越好,但流速也越慢。

交联葡聚糖工作时的pH稳定在2~11的范围内。

葡聚糖G型凝胶分离的分子量分级范围为700~8×105。

SephadexG型葡聚糖凝胶的数据见下表。

*本表数值取自Pharmacia Biotech Biodirectory 1996。

**为2.6×30cm层析柱在25℃用蒸馏水测定之值。

D=Darcy’s law (2)凝胶的溶胀*
G系交联葡聚糖凝胶亲水性强,只能在水中溶胀(仅有少量的有机溶剂也可以使之溶胀),有机溶剂或含有有机溶剂较多的水溶液会改变其孔隙,使之收缩失去或降低凝胶的分离能力。

在水中溶胀时如在室温则需要较长时间,才能达到充分溶胀的程度,但可煮沸到100℃,以缩短其溶胀时间。

见下表 Sephadex G型葡聚糖凝胶溶胀所需时间。

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