6 植物组织培养实验二PPT课件
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植物组织培养常规技术幻灯片PPT
（3）确定最佳的取材时期 。 （4）内部已污染的材料弃之不用 。 2. 材料表面灭菌 （1）对灭菌剂的要求 （2）常用灭菌剂种类 （3）灭菌方法
常用外表灭菌剂的使用及其效果
种类
酒精 升汞 漂白粉 次氯酸钠 次氯酸钙
使用浓度 （%）
70-75 0.1-0.2 饱和上清液 2-10 9-10
灭菌时间 （分）
使用超净工作台应注意的问题
超净工作台不应安装在尘埃太多的地方。
在使用前应预热30-40分钟。
操作前应先将实验材料和操作器械、药品等物品事 先放入台内，不要中途拿进。
台面上放置的东西不宜太多，特别是注意不要把东 西迎面堆的太高，以免挡住气流。
定期检查，更换过滤器。
〔六〕接种器械的灭菌
❖灭菌方法 灼烧灭菌法：
离心机
〔五〕驯化移植室
❖ 用途：主要用于试管苗的驯化和移栽；也可用于 母株的预栽培。
❖ 设施：室内应备有弥雾装置、荫棚、移植床〔苗 床〕、恒温恒湿控制仪、光照调节装置等设施以 及培养土、培养盆〔钵〕、育苗盘等器材。
❖ 驯化移植室1、2
二、常用仪器设备与器械
〔一〕常用仪器设备： 超净工作台 ；高压蒸汽灭菌锅 ；冰箱 ；烘箱 ； 天平 ；蒸馏水器 ；酸度计 ；摇床与转床 ；光照 培养箱
20~50
15
75~150
20
250~500
25
1000
30
1500
35
2000
40
121℃ 122℃ 120℃
排汽一 定舒缓， 以免造成 培养基沸 腾，沾染 瓶塞引起 污染。
负压过滤器
〔三〕植物材料消毒
1．减少材料带菌的防范措施 （1）取材前对母株的预处理 ：减少带菌机会，改善生理
常用外表灭菌剂的使用及其效果
种类
酒精 升汞 漂白粉 次氯酸钠 次氯酸钙
使用浓度 （%）
70-75 0.1-0.2 饱和上清液 2-10 9-10
灭菌时间 （分）
使用超净工作台应注意的问题
超净工作台不应安装在尘埃太多的地方。
在使用前应预热30-40分钟。
操作前应先将实验材料和操作器械、药品等物品事 先放入台内，不要中途拿进。
台面上放置的东西不宜太多，特别是注意不要把东 西迎面堆的太高，以免挡住气流。
定期检查，更换过滤器。
〔六〕接种器械的灭菌
❖灭菌方法 灼烧灭菌法：
离心机
〔五〕驯化移植室
❖ 用途：主要用于试管苗的驯化和移栽；也可用于 母株的预栽培。
❖ 设施：室内应备有弥雾装置、荫棚、移植床〔苗 床〕、恒温恒湿控制仪、光照调节装置等设施以 及培养土、培养盆〔钵〕、育苗盘等器材。
❖ 驯化移植室1、2
二、常用仪器设备与器械
〔一〕常用仪器设备： 超净工作台 ；高压蒸汽灭菌锅 ；冰箱 ；烘箱 ； 天平 ；蒸馏水器 ；酸度计 ；摇床与转床 ；光照 培养箱
20~50
15
75~150
20
250~500
25
1000
30
1500
35
2000
40
121℃ 122℃ 120℃
排汽一 定舒缓， 以免造成 培养基沸 腾，沾染 瓶塞引起 污染。
负压过滤器
〔三〕植物材料消毒
1．减少材料带菌的防范措施 （1）取材前对母株的预处理 ：减少带菌机会，改善生理
《实验植物组织培养》PPT课件
对照
NaCl
冰水
实验六
实验安排
一、配制培养基 本周（第10周） 二、无菌操作 下周（第11周）
三、无菌培养 四、观察记录
第12、13、14、15 周每周进行观察
※ 上交实验报告时间：第16周
实验目的
（1）深刻理解植物组织培养的基本概念 和理论依据。
（2）训练利用实验室的条件来合理设计 和完成实验的基本技能。
3.培养基灭菌
高压灭菌(压力1.1 kg/cm2 , 121℃, 20min )。湿热灭菌
共500mL,分装12瓶
大量元素25mL
微量元素5mL
各物质加入量：
有机物5mL
①大量元素母液（20×） 50mL/L；
肌醇5mL 铁盐2.5mL
②微量元素母液（100×） 10mL/L； 蔗糖15g
③有机附加成分母液（100×） 10mL/L冷；凝脂2.9g
2.接种 （1）切取材料 左手持镊，右手持刀→切取材料→叶 片：0.5cm×0.5cm，茎段带一个腋芽。
（2）接种 取三角瓶→打开封口膜→接种 叶块：正接，每瓶3块 茎段：形态学下端插入培养基，每瓶3个
（3）重新封口 （4）做标记 班级，日期
三、无菌培养
将接种好的三角瓶置于培养室进行培养。 培养条件：光/暗 = 14 h/10 h；
依据一
分化 外植体 愈伤组织 芽、根 完整植株
脱分化 再分化
冲洗
表面消毒
外植体
接种
脱分化
愈伤组织
再分化 再分化
植物组织培养的过程
实验设计的依据
依据二
培养基中植物生长物质的种类和浓度在脱分化 和再分化中起重要作用，尤其是生长素和细胞分裂 素类的比例。
NaCl
冰水
实验六
实验安排
一、配制培养基 本周（第10周） 二、无菌操作 下周（第11周）
三、无菌培养 四、观察记录
第12、13、14、15 周每周进行观察
※ 上交实验报告时间：第16周
实验目的
（1）深刻理解植物组织培养的基本概念 和理论依据。
（2）训练利用实验室的条件来合理设计 和完成实验的基本技能。
3.培养基灭菌
高压灭菌(压力1.1 kg/cm2 , 121℃, 20min )。湿热灭菌
共500mL,分装12瓶
大量元素25mL
微量元素5mL
各物质加入量：
有机物5mL
①大量元素母液（20×） 50mL/L；
肌醇5mL 铁盐2.5mL
②微量元素母液（100×） 10mL/L； 蔗糖15g
③有机附加成分母液（100×） 10mL/L冷；凝脂2.9g
2.接种 （1）切取材料 左手持镊，右手持刀→切取材料→叶 片：0.5cm×0.5cm，茎段带一个腋芽。
（2）接种 取三角瓶→打开封口膜→接种 叶块：正接，每瓶3块 茎段：形态学下端插入培养基，每瓶3个
（3）重新封口 （4）做标记 班级，日期
三、无菌培养
将接种好的三角瓶置于培养室进行培养。 培养条件：光/暗 = 14 h/10 h；
依据一
分化 外植体 愈伤组织 芽、根 完整植株
脱分化 再分化
冲洗
表面消毒
外植体
接种
脱分化
愈伤组织
再分化 再分化
植物组织培养的过程
实验设计的依据
依据二
培养基中植物生长物质的种类和浓度在脱分化 和再分化中起重要作用，尤其是生长素和细胞分裂 素类的比例。
植物组织培养学PPT课件
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.
34
.
35
③管理方便，利于工厂化生产和自动化控制
植物组织培养是在一定的场所和环境下，人为提供一定的温度、光照、湿 度、营养、激素等条件，既利于高度集约化和高密度工厂化生产，也利于 自动化控制生产。它是未来农业工厂化育苗的发展方向。它与盆栽、田间 栽培等相比省去了中耕除草、浇水施肥、防治病虫害等一系列繁杂劳动，
.
4
组织培养
在人工培养基上，离体培养植 物的器官、组织、细胞和原生质体， 并使其生长、增殖、分化以及再生 植株的技术。
思考：
1、植物组织培养的原理是什么？
植物细胞具有全能性，即生物体的 细胞，具有使后代细胞形成完整个 体的能力。
.
5
植物组织培养够完善的？ 没有进行灭菌处理，试管也没有做密封等。
.
6
3、结合录像外植体灭菌与接种操作，谈谈怎样预防组织 培养污染？
（一）防止外植体带菌 （二）保证培养基及接种器具彻底灭菌 （三）操作人员严格遵守无菌操作规程 （四）保证接种与培养环境清洁
.
7
植物组织培养过程
离体的植物 脱分化 器官、组织、 细胞
愈 再分化 根 伤
组
织
芽
植 物 体
植物组织培养条件
含有全部营养成分的培养基、一定的温度、 空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等。
.
8
愈伤组织
.
9
植物细胞全能性的表达
脱分化：将来自已分化组织的已停止分裂 的细胞从植物体部分的抑制性影响下解脱 出来，恢复细胞的分裂活性。 再分化:经脱分化的组织或细胞在一定的培 养条件下可有转变为各种不同细胞类型的 能力。
.
18
（一）防止外植体带菌
《植物组织培养》PPT课件
分化程度低的细胞>分化程度高的细胞
细胞分化的实质：基因的选择性表达。
精选课件
16
②全能性的表达
少数体细胞在发育过程中可能丢失一部分遗传物质, 因而失去全能性。如筛管细胞,它在发育过程中失去细胞 核,因而没有全能性。
目前还无法使所有的离体植物细胞都实现其全能性。
精选课件
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条件
离体状态
营养物质
无机营养 有机营养
人为提供一定的温度、光照、湿度、营养、激 素等条件，既利于高度集约化和高密度工厂化 生产，也利于自动化控制生产。它是未来农业 工厂化育苗的发展方向。它与盆栽、田间栽培 等相比省去了中耕除草、浇水施肥、防治病虫 害等一系列繁杂劳动，可以大大节省人力、物
力及田间种植所需要的土地。
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二、植物组织培养的基本原理
根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同
的培养条件，因此生长较快。另外，植株也比
较小，往往20-30天为一个周期。所以，虽然植 物组织培养需要一定设备及能源消耗，但由于
植物材料能按几何级数繁殖生产，故总体来说
成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗
或脱病毒种苗。
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③管理方便 ，利于工厂化生产和自动化控制 植物组织培养是在一定的场所和环境下，
➢ 细 胞 培 养 单细胞培养
➢器
官
培
养
胚、胚乳、珠心、子房、根、茎、 叶、花和幼果的部分组织的培养
➢ 原生质体培养
➢ 分生组织培养 茎尖精、选课根件尖等
10
愈伤组织(callus)原指植物体的局部受到创伤刺激后， 在伤口表面新生的组织。它由活的薄壁细胞组成， 可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。
植物组织培养PPT课件
在植物体内
限制
游离
表现
植物体的任何一个细胞，都有长成完整个体的潜在能力
.
5
01
培养基
在组织细胞生长过程中提供所需的营养物质
.
6
02
组培苗的生长过程
.
7
02
组培苗的生长过程
转苗
出瓶
.
8
03
植物组织培养的意义
.
9
03
快速繁殖
稀有植物 繁殖能力低或不能用种子繁殖的植物 受地理环境及季节因素限制的植物
.
10
04
组培的实验条件
.
11
04
超净工作台
提供无菌无尘的工作环境
照明灯
紫外线灯
风机
视频介绍
.
12
04
培养室
控制光照、温度，并 保持相对的无菌环境
.
13
05
转苗操作步骤
.
14
05
操作步骤
准备工作 01
1.将操作时需要用到的物品（酒精灯、一对镊子、托盘、培养基等） 放于超净工作台台内喷洒70%酒精后开启超净台紫外灯照射消毒 30min左右 2.戴口罩，70%酒精消毒双手 3.取一对镊子于酒精灯火焰的外焰灼烧约1-2min后放置至恢复室温 备用
.
18
05
每瓶接7-10株
接苗深度：将根部插入培 养基，露出根茎结合部 （过深不利于苗的生长） 尽量使苗直立固定
.
19
The end 希望同学们学有所成
.
20
1.取适量的苗于托盘中后，将培养瓶盖上盖子 （盖前同样转动灼烧瓶口） 2.左右手各持一把镊子，将托盘里的苗分成一株 株同时把夹带的培养基、枯叶等杂质与苗分开
植物组培 实验二
植物组培实验报告实验二、培养基的配制及灭菌一、实验目的1、熟悉植物组织培养的一般工作流程。
2、了解培养基的成分、类型及特点。
3、能正确进行培养基的配制及灭菌操作。
二、实验原理植物组织培养是一项技术性强、无菌条件要求高的工作，对场地有一定的要求，需配备必要的仪器设备和器皿、器械，还必须熟练掌握每个环节的操作技术。
植物组织培养的一般程序包括拟定培养方案、初代培养、继代扩繁、生根壮苗培养及驯化移栽，其基本操作技术包括培养基的配制及灭菌、外植体的选择与消毒、无菌接种与培养、试管苗生根与驯化移栽等。
三、实验内容1、培养基的成分以MS培养为例，其成分可以分为水、无机盐、有机物、天然复合物、培养体的支持材料等五大类。
１．水作用：原生质体的组成成分，代谢过程的介质和溶媒。
它是生命活动过程中。
配制：培养基母液时要用蒸馏水：配培养基时可用自来水。
但在少量研究上尽量用蒸馏水。
２．无机元素大量元素，指浓度大于0.5mmol/l的元素，有Ｎ、Ｐ、Ｋ、Ｃa、Ｍg、Ｓ等。
其作用是：(1)N功能：是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，是生命结构和功能物质不可缺少的。
供应形式：含有ＮＯ3－N又含ＮＨ4－N。
ＮＨ4－N对植物生长较为有利。
在制备培养基时以这两种形式供应。
供应的物质有ＫＮＯ3、、ＮＨ4ＮＯ3等。
有时，也添加氨基酸。
(2)P功能：是磷脂的主要成分，而磷脂又是细胞膜、细胞核的重要组成部分。
磷也是核酸、ＡＴＰ、辅酶等的组成成分。
组织培养中，磷不仅增加养分、提供能量，而且也促进对Ｎ的吸收，增加蛋白质在植物体中的积累。
供应形式：常用的物质有ＫＨ2ＰＯ4或ＮaＨ2ＰＯ4等。
(3)K功能：Ｋ对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有密切关系，它具有活化酶的作用。
Ｋ增加时，蛋白质合成增加，维管束、纤维组织发达，对胚的分化有促进作用。
但浓度不易过大，一般为１～３mg/l 为好。
供应形式：制备培养基时，常以ＫＣl、ＫＮＯ3 等盐类提供。
《植物组织培养》PPT课件 (2)
精选PPT
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三、原生质体培养方法
精选PPT
45
1.液体浅层培养
1、材料的来源 2、前处理 3、酶处理 4、渗透压
精选PPT
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1、材料的来源
无菌试管苗叶片、上胚轴和 子叶
温室或生长室栽种的植物 培养细胞
精选PPT
12
温室或生长室栽种的植物
一般生长在下述条件下的植株能产生较好的效 果:低光照强度1000lx,短日照,温度范围20-25度, 相对湿度60%-80%,以及充足的氮肥供应.
甘蔗植株只有现在黑暗条件下培养12小时后分离 的原生质体才能原生质体，才会获得较精高选P的PT 原生质体产量。
14
B、消毒
C、保证酶解充分进行，促使酶溶液渗入到叶 片的细胞间隙中。
方法：
1.撕去叶片的下表皮，然后以无表皮的一面向下， 使叶片漂浮在酶溶液中；
Pectinase 黑曲霉 Sigma Chemical Co., St. Louit, MO 63178,USA Pectolyase Y-23 黑曲霉 Seishin Pharm. Co. Ltd., Tokyo, Japan
半纤维素酶
Rhozyme HP-150 黑曲酶 Rohm and Hass Co., Philadelphia, PA 19105, USA
–高活性低
–低原生质体损坏多
–纤维素酶，p H5.4，果胶酶5.8，两种混合5.4~5.6
–
精选PPT
23
4.渗透剂
植物细胞壁对细胞有良好的保护作用。去除细胞壁之后如 果溶液中的渗透压和细胞内的渗透压不同，原生质体有可能 涨破或收缩。因此在酶液、洗液和培养液中渗透压应大致和 原生质体内的相同，或者比细胞内渗透压略大些。渗透压大 些有利于原生质体的稳定，但也有可能阻碍原生质体的分裂。
《植物组织培养实验》PPT课件
• 6-BA：1mg/mL(溶于少量1N盐酸后以蒸馏 水定容）。
• NAA:1mg/mL（先用少量95%乙醇溶解后
以蒸馏水定容）。
精选PPT
6
三、作业：
• （一） 一般可将MS培养基分为哪四个部分？分别含有几 种试剂？各种试剂的浓度（mg/L）如何？
• （二） 如需配制MS培养基的20×的贮备液I量为500 mL、 100×的贮备液II、III和IV各100 mL以及BA和NAA（浓度为 1 mg/mL）各50 mL，则应分别称取多少量的各种试剂？ 注意要点有哪些？
精选PPT
12
（二）用洗衣粉水（1~2角匙洗衣粉/100 ml水）等 浸洗上述植物材料约5 min，再用自来水冲净洗衣粉水。 这是进一步减少污染的处理。
同时配制消毒液：50%次氯酸钠溶液。
精选PPT
13
• （三） 将接种用具、无菌水等从80℃烘箱中或直接从 高压灭菌器中取出，置于超净工作台上。打开超净工 作台中的紫外灯，在进行紫外线灭菌处理至少30 min 后关掉紫外灯。
•目的与要求：
熟悉MS培养基的组成，掌握 贮备液的配制方法.
•实验步骤：
称量 定容。
分别溶解
混合
精选PPT
2
一，MS培养基的组成
1、大量成分→贮备液I mg/L
NH4NO3 KNO3 CaCl2 2H2O 40
1650 1900
4
MgSO4 7H2O
370
KH2PO4
170
00mL.
配制20倍浓度贮备液5
• （二）操作人员坐到超净台前，用浸有70%酒精的棉球擦 超净台面、操作者手等部分。
• （三）点燃酒精灯，从装有无菌苗的培养瓶中取出无菌 苗，置于无菌的培养皿中的无菌滤纸上，用灭过菌的刀 和镊子配合操作，从叶柄处切下，将所有叶片去除，只 留下近茎部的一小段叶柄。
• NAA:1mg/mL（先用少量95%乙醇溶解后
以蒸馏水定容）。
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三、作业：
• （一） 一般可将MS培养基分为哪四个部分？分别含有几 种试剂？各种试剂的浓度（mg/L）如何？
• （二） 如需配制MS培养基的20×的贮备液I量为500 mL、 100×的贮备液II、III和IV各100 mL以及BA和NAA（浓度为 1 mg/mL）各50 mL，则应分别称取多少量的各种试剂？ 注意要点有哪些？
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（二）用洗衣粉水（1~2角匙洗衣粉/100 ml水）等 浸洗上述植物材料约5 min，再用自来水冲净洗衣粉水。 这是进一步减少污染的处理。
同时配制消毒液：50%次氯酸钠溶液。
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• （三） 将接种用具、无菌水等从80℃烘箱中或直接从 高压灭菌器中取出，置于超净工作台上。打开超净工 作台中的紫外灯，在进行紫外线灭菌处理至少30 min 后关掉紫外灯。
•目的与要求：
熟悉MS培养基的组成，掌握 贮备液的配制方法.
•实验步骤：
称量 定容。
分别溶解
混合
精选PPT
2
一，MS培养基的组成
1、大量成分→贮备液I mg/L
NH4NO3 KNO3 CaCl2 2H2O 40
1650 1900
4
MgSO4 7H2O
370
KH2PO4
170
00mL.
配制20倍浓度贮备液5
• （二）操作人员坐到超净台前，用浸有70%酒精的棉球擦 超净台面、操作者手等部分。
• （三）点燃酒精灯，从装有无菌苗的培养瓶中取出无菌 苗，置于无菌的培养皿中的无菌滤纸上，用灭过菌的刀 和镊子配合操作，从叶柄处切下，将所有叶片去除，只 留下近茎部的一小段叶柄。
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You Know, The More Powerful You Will Be
谢谢你的到来
学习并没有结束，希望大家继续努力
Learning Is Not Over. I Hope You Will Continue To Work Hard
演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日
18
2、无菌操作要注意：每次操作前， 将双手用酒精棉球擦拭消毒；镊 子、解剖剪刀等金属工具用火焰 烧过灭菌，冷却后方可使用；尽 量减少无菌三角瓶或培养皿在空 气中的暴露时间；所有无菌操作 尽量快速完成，并要求在酒精灯 附近进行。
19
3、请先在自然条件下练习外植体解剖， 分割成0.5cm2左右的小块（段），经操 作熟练，检查无误后，再进行无菌解 剖分割及接种，以减少植物材料染菌 或失水死亡的机率。
欢迎同学们进入奇幻的植物组织培养实验世界
1
植物组织培养实验Ⅱ——— 外植体取材﹑表面消毒与接种
实验目的 实验原理、基本知识 实验用品、材料 实验要求 实验内容 、方法 实验报告——作业 下一次实验预告
2
一、实验目的
1、掌握无菌操作技术，加深对无菌操作的了
解；
2、掌握常规的植物细胞组织培养技术，达到 能独立操作的能力
29
7、打开三角瓶——铝箔纸的拿法
30
8、瓶口在火焰上烧过
31
9、铝箔纸的放法
32
10、镊出黄瓜苗
33
11、镊出黄瓜苗
34
12、放入培养皿中
35
13 、
黄 瓜
幼 苗 形 态
生 长 点
36
——
14、剪取茎段
37
15、剪好的外植体
38
16、黄瓜切块的接种
39
17、接种好的培养材料
40
9
石竹的胚性细胞再分化进行快繁
10
石 斛 植 物 的 芽 培 养
11
长 春 花 的 胚 性 细 胞 培 养
12
黄 芪 的 发 状 根 固 体 培 养
13
黄 芪 发 状 根 的 液 体 培 养
14
5、植物组织培养中的重要概念 愈伤组织：指由植物的一种组织或器官
经历脱分化形成的原始胚样组织，它具 有再分化成为完整植物体的潜能； 外植体：植物组织培养中用来进行无菌 培养的离体材料，可以是器官、组织、 细胞和原生质体等；
3
二、实验原理、基本知识
1、植物细胞的全能性：早在1902年,德国著名植物生理学 家G.Haberlandt根据细胞学说理论曾大胆预言：植物体 的任何一个细胞在适宜的条件下都具有生长分化成为一 个 完 整 植 株 的 能 力 ， 被 称 为 植 物 的 全 能 性 。 1958 年,Steward和Shantz用胡萝卜根韧皮部细胞悬浮培养, 从中诱导出体细胞胚(somatic embryo)，并使其发育 成完整小植株,第一次证实了G.Haberlandt提出的细胞 全能性学说， 60年代以来许多植物的离体细胞，在人工 合成的培养基上,通过细胞的分裂、增殖分化、发育,最终 长成了完整的再生植株。
4
5
2、植物组织培养的发展 1904年，德国植物胚胎学家Haning用萝
卜和辣根的胚进行培养，首次获得组 培的成功。 1922年，豌豆、玉米和棉花的茎尖培育 获得成功 1933年，我国李继侗等进行银杏离体胚 培养获得成功。
6
3、植物组织培养的应用 在作物育种上的应用（单倍体植株、
种间杂交、细胞融合、细胞突变、种 质保存和基因工程） 在作物脱毒和快速繁殖上的应用 在遗传、生理生化和病理研究上的应 用
18、重新封好瓶口
41
19、重新封好瓶口
42
20、写好日期、班级和接种者代号
43
最后把接好的外植体培养瓶置于培养室中 培养架上，26℃左右光照下培养一段时 间，可诱导脱分化及再分化试管苗。
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写在最后
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More
7
4、植物组织培养的内容
植物组织培养包括以植物和它的离 体器官、组织、细胞和原生质体为外植 体的离体无菌培养，拥有几种不同水平 的培养技术，即整体的、器官的、组织 的、细胞和原生质的培养技术。（植株 培养、胚胎培养、器官培养、组织培养、 细胞培养、原生质体培养 ）
8
石竹的胚性细胞再分化进行快繁
20
五．实验内容（六人1台工作台每人２课苗） １、黄瓜无菌苗的分割组培快繁培养
21
组培实验用品
22
一、无菌苗的分割接种方法
1、点着酒精灯，双手擦拭消毒，打开长有无菌苗的三 角瓶，三角瓶瓶口使用前后需在酒精灯外焰上烧过 灭菌。
2、用灭菌的镊子轻轻捏出幼苗，放在无菌的培养皿中， 用灭菌的剪刀将茎或叶片剪成若干0.5-1cm2的小段 （块） ，茎尖带着生长点，然后，接入盛有MS培养 基的三角瓶中，每一个切段必须直接接触培养基， 三角瓶口重新烧过灭菌，并重新封好。
3、在光照培养下，25℃左右，12小时光照条件下培养 3-6周，可发生脱分化或再分化现象（有的长成完整 植株）。23Leabharlann 1、点着酒精灯24
2、双手擦拭消毒
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3、酒精中浸泡灭菌解剖工具
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4、酒精灯火焰烧透灭菌剪刀、镊子
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5、消毒好的工具放置在无菌培养皿中
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6、打开三角瓶——牛皮纸的拿法
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烟草愈伤组织
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三、实验材料
黄瓜无菌苗。黄瓜是重要的蔬菜，是各地 区种植最广泛的经济作物。
紫背天葵为菊科土三七属宿根多年生直立 草本植物，具有较高的营养价值和保健功 能。
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四． 实验要求：
1、实验开始前，请将所有同学将自己的实验台擦 洗一遍，打开超净工作台电源，开机并用紫外灯 照射消毒20分钟，两组十二位同学在一台超净台 上接种，请先排好顺序，明确合作和分工，以加 快实验速度，减少染菌机会，实验开始后，请尽 量不要走动。
谢谢你的到来
学习并没有结束，希望大家继续努力
Learning Is Not Over. I Hope You Will Continue To Work Hard
演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日
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2、无菌操作要注意：每次操作前， 将双手用酒精棉球擦拭消毒；镊 子、解剖剪刀等金属工具用火焰 烧过灭菌，冷却后方可使用；尽 量减少无菌三角瓶或培养皿在空 气中的暴露时间；所有无菌操作 尽量快速完成，并要求在酒精灯 附近进行。
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3、请先在自然条件下练习外植体解剖， 分割成0.5cm2左右的小块（段），经操 作熟练，检查无误后，再进行无菌解 剖分割及接种，以减少植物材料染菌 或失水死亡的机率。
欢迎同学们进入奇幻的植物组织培养实验世界
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植物组织培养实验Ⅱ——— 外植体取材﹑表面消毒与接种
实验目的 实验原理、基本知识 实验用品、材料 实验要求 实验内容 、方法 实验报告——作业 下一次实验预告
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一、实验目的
1、掌握无菌操作技术，加深对无菌操作的了
解；
2、掌握常规的植物细胞组织培养技术，达到 能独立操作的能力
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7、打开三角瓶——铝箔纸的拿法
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8、瓶口在火焰上烧过
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9、铝箔纸的放法
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10、镊出黄瓜苗
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11、镊出黄瓜苗
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12、放入培养皿中
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13 、
黄 瓜
幼 苗 形 态
生 长 点
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——
14、剪取茎段
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15、剪好的外植体
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16、黄瓜切块的接种
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17、接种好的培养材料
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石竹的胚性细胞再分化进行快繁
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石 斛 植 物 的 芽 培 养
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长 春 花 的 胚 性 细 胞 培 养
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黄 芪 的 发 状 根 固 体 培 养
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黄 芪 发 状 根 的 液 体 培 养
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5、植物组织培养中的重要概念 愈伤组织：指由植物的一种组织或器官
经历脱分化形成的原始胚样组织，它具 有再分化成为完整植物体的潜能； 外植体：植物组织培养中用来进行无菌 培养的离体材料，可以是器官、组织、 细胞和原生质体等；
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二、实验原理、基本知识
1、植物细胞的全能性：早在1902年,德国著名植物生理学 家G.Haberlandt根据细胞学说理论曾大胆预言：植物体 的任何一个细胞在适宜的条件下都具有生长分化成为一 个 完 整 植 株 的 能 力 ， 被 称 为 植 物 的 全 能 性 。 1958 年,Steward和Shantz用胡萝卜根韧皮部细胞悬浮培养, 从中诱导出体细胞胚(somatic embryo)，并使其发育 成完整小植株,第一次证实了G.Haberlandt提出的细胞 全能性学说， 60年代以来许多植物的离体细胞，在人工 合成的培养基上,通过细胞的分裂、增殖分化、发育,最终 长成了完整的再生植株。
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2、植物组织培养的发展 1904年，德国植物胚胎学家Haning用萝
卜和辣根的胚进行培养，首次获得组 培的成功。 1922年，豌豆、玉米和棉花的茎尖培育 获得成功 1933年，我国李继侗等进行银杏离体胚 培养获得成功。
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3、植物组织培养的应用 在作物育种上的应用（单倍体植株、
种间杂交、细胞融合、细胞突变、种 质保存和基因工程） 在作物脱毒和快速繁殖上的应用 在遗传、生理生化和病理研究上的应 用
18、重新封好瓶口
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19、重新封好瓶口
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20、写好日期、班级和接种者代号
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最后把接好的外植体培养瓶置于培养室中 培养架上，26℃左右光照下培养一段时 间，可诱导脱分化及再分化试管苗。
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写在最后
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More
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4、植物组织培养的内容
植物组织培养包括以植物和它的离 体器官、组织、细胞和原生质体为外植 体的离体无菌培养，拥有几种不同水平 的培养技术，即整体的、器官的、组织 的、细胞和原生质的培养技术。（植株 培养、胚胎培养、器官培养、组织培养、 细胞培养、原生质体培养 ）
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石竹的胚性细胞再分化进行快繁
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五．实验内容（六人1台工作台每人２课苗） １、黄瓜无菌苗的分割组培快繁培养
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组培实验用品
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一、无菌苗的分割接种方法
1、点着酒精灯，双手擦拭消毒，打开长有无菌苗的三 角瓶，三角瓶瓶口使用前后需在酒精灯外焰上烧过 灭菌。
2、用灭菌的镊子轻轻捏出幼苗，放在无菌的培养皿中， 用灭菌的剪刀将茎或叶片剪成若干0.5-1cm2的小段 （块） ，茎尖带着生长点，然后，接入盛有MS培养 基的三角瓶中，每一个切段必须直接接触培养基， 三角瓶口重新烧过灭菌，并重新封好。
3、在光照培养下，25℃左右，12小时光照条件下培养 3-6周，可发生脱分化或再分化现象（有的长成完整 植株）。23Leabharlann 1、点着酒精灯24
2、双手擦拭消毒
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3、酒精中浸泡灭菌解剖工具
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4、酒精灯火焰烧透灭菌剪刀、镊子
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5、消毒好的工具放置在无菌培养皿中
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6、打开三角瓶——牛皮纸的拿法
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烟草愈伤组织
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三、实验材料
黄瓜无菌苗。黄瓜是重要的蔬菜，是各地 区种植最广泛的经济作物。
紫背天葵为菊科土三七属宿根多年生直立 草本植物，具有较高的营养价值和保健功 能。
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四． 实验要求：
1、实验开始前，请将所有同学将自己的实验台擦 洗一遍，打开超净工作台电源，开机并用紫外灯 照射消毒20分钟，两组十二位同学在一台超净台 上接种，请先排好顺序，明确合作和分工，以加 快实验速度，减少染菌机会，实验开始后，请尽 量不要走动。