植物组织培养教学课件PPT
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枸杞愈伤组织的芽诱导比较难 同一植物材料的年龄、保存时间的长短会 影响实验结果 菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎 上部新萌生的侧枝
（2）不同的离体组织和细胞对营养、环境等条 件的要求相对特殊，需配置不同的培养基 MS培养基主要成分包括： A、大量元素: N、P、 S 、 K、Ca、Mg等 B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、 Co等 C、有机物、植物激素
3、植物组织培养过程:
植物细胞培养 离 体 组 脱分化 织、 器 细胞分 官 裂素≈ 或 生长素 细 胞 不需要光 细胞分裂 素>生长素
愈 伤 再分化 组 织
芽
根 细胞分裂 素<生长素 需要光
植 物 体
4、植物组织培养的应用： 1、培育无病毒植株 2、 培养紫草愈伤组织,提取紫草素（治疗烫伤 和割伤的药物以及染料和化妆品的原料） 3、诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力 的胚状结构，包裹上人造种皮，制成人工种子， 可以解决有些作物品种繁殖能力差，结子困难 或发芽率低等问题 4、基因工程中亦需用到植物组织培养的方法
专题3 植物组织培养
课题1： 菊花的组织培养 一、基础知识 1、植物的组织培养 （1）细胞的分化
①概念： 在个体发育中，相同细胞的后代在形 态、结构、生理功能上发生稳定性差 异的过程
（3）植物组织培养 ①必要条件： 细胞离体 一定的营养物质、激素和其他 外界条件 ②原理: 细胞的全能性
③相关概念: 外植体：从活植物体上切下进行培养的那部 分组织或器官
讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题 2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方 有哪些明显的不同？
答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必 需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞 的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满 足离体植物细胞对特殊营养的需求。微生物培养 基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS 培养基则需提供大量无机营养。
人工种子
二、实验操作 （一）制备MS固体培养基
MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般 使用4。C保存配制好的培养基母液来制备
1、配置各种母液
①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓 缩100倍，常温保存
②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一 般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液
③用母液配制培养基时，需要根据各种母液 的浓缩倍数，计算用量
愈伤组织:细胞排列疏松而无规则,是高度液泡 化的、成无定形状态的薄壁细胞 脱分化：由高度分化的植物组织或细胞产生愈 伤组织的过程。 再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养， 又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫再 分化。
2、影响植物组织培养的因素 （1）植物材料的选择
烟草和胡萝卜的组织培养较为容易
思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实 验吗？
答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。 设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养 基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养， 用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。
（四）培养
接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养， 培养期间应定期消毒。培养温度控制在 18-22℃，并且每日用日光灯光照12小 时。
（三）接种 1、接种室消毒 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种 室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空 气消毒， 酒精或新洁尔灭擦洗工作台并用紫外 线照射20分钟 2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后， 都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
3、材料的切取和接种
4、接种注意事项 ①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分 数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒 精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种 ②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体 数量根据锥形瓶的大小确定，每瓶接种6－8 块外植体。 ③插入时应注意方向，不要倒插。
（3）植物激素的影响 ①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和 赤霉素 生长素类： 2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、 吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、 吲哚丁酸（IBA）
细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤 （ 6－BA）、玉米素（ZT） 赤霉素类： 赤霉酸（GA3）
②生长素和细胞分裂素作用 植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、 脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在 的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势 使用顺序 先使用生长素，后使用 细胞分裂素 先使用细胞分裂素后使 用生长素 同时使用 实验结果 有利于细胞分裂，但不 利分化 细胞既分裂也分化 分化频率提高
2、配置培养基
① 配制培养基（固体） ② 调PH
③培养基的分装 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此 不必添加植物激素
3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸 汽灭菌 （二）外植体消毒 1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 2、消毒
Leabharlann Baidu
①流水冲洗
（五）移栽 1、打开封口膜 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养 瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日 2、清洗转移 用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过 毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间
珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、 透性好，适合栽培 3、移栽 幼苗长壮后，移栽到土壤中
菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软 刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右
② 酒精处理 用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体 积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－ 7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗
③消毒液处理
取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分， 放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min， 取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液
③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例 对植物细胞发育方向的影响 生长素 > 细胞分裂素： 有利于根的分化 生长素 < 细胞分裂素： 有利于芽的分化，抑 制根的分化 生长素 ＝ 细胞分裂素： 促进愈伤组织生长
（4）pH、温度、光照
pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每 日用日光灯照射12h
（2）不同的离体组织和细胞对营养、环境等条 件的要求相对特殊，需配置不同的培养基 MS培养基主要成分包括： A、大量元素: N、P、 S 、 K、Ca、Mg等 B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、 Co等 C、有机物、植物激素
3、植物组织培养过程:
植物细胞培养 离 体 组 脱分化 织、 器 细胞分 官 裂素≈ 或 生长素 细 胞 不需要光 细胞分裂 素>生长素
愈 伤 再分化 组 织
芽
根 细胞分裂 素<生长素 需要光
植 物 体
4、植物组织培养的应用： 1、培育无病毒植株 2、 培养紫草愈伤组织,提取紫草素（治疗烫伤 和割伤的药物以及染料和化妆品的原料） 3、诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力 的胚状结构，包裹上人造种皮，制成人工种子， 可以解决有些作物品种繁殖能力差，结子困难 或发芽率低等问题 4、基因工程中亦需用到植物组织培养的方法
专题3 植物组织培养
课题1： 菊花的组织培养 一、基础知识 1、植物的组织培养 （1）细胞的分化
①概念： 在个体发育中，相同细胞的后代在形 态、结构、生理功能上发生稳定性差 异的过程
（3）植物组织培养 ①必要条件： 细胞离体 一定的营养物质、激素和其他 外界条件 ②原理: 细胞的全能性
③相关概念: 外植体：从活植物体上切下进行培养的那部 分组织或器官
讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题 2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方 有哪些明显的不同？
答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必 需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞 的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满 足离体植物细胞对特殊营养的需求。微生物培养 基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS 培养基则需提供大量无机营养。
人工种子
二、实验操作 （一）制备MS固体培养基
MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般 使用4。C保存配制好的培养基母液来制备
1、配置各种母液
①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓 缩100倍，常温保存
②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一 般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液
③用母液配制培养基时，需要根据各种母液 的浓缩倍数，计算用量
愈伤组织:细胞排列疏松而无规则,是高度液泡 化的、成无定形状态的薄壁细胞 脱分化：由高度分化的植物组织或细胞产生愈 伤组织的过程。 再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养， 又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫再 分化。
2、影响植物组织培养的因素 （1）植物材料的选择
烟草和胡萝卜的组织培养较为容易
思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实 验吗？
答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。 设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养 基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养， 用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。
（四）培养
接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养， 培养期间应定期消毒。培养温度控制在 18-22℃，并且每日用日光灯光照12小 时。
（三）接种 1、接种室消毒 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种 室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空 气消毒， 酒精或新洁尔灭擦洗工作台并用紫外 线照射20分钟 2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后， 都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
3、材料的切取和接种
4、接种注意事项 ①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分 数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒 精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种 ②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体 数量根据锥形瓶的大小确定，每瓶接种6－8 块外植体。 ③插入时应注意方向，不要倒插。
（3）植物激素的影响 ①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和 赤霉素 生长素类： 2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、 吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、 吲哚丁酸（IBA）
细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤 （ 6－BA）、玉米素（ZT） 赤霉素类： 赤霉酸（GA3）
②生长素和细胞分裂素作用 植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、 脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在 的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势 使用顺序 先使用生长素，后使用 细胞分裂素 先使用细胞分裂素后使 用生长素 同时使用 实验结果 有利于细胞分裂，但不 利分化 细胞既分裂也分化 分化频率提高
2、配置培养基
① 配制培养基（固体） ② 调PH
③培养基的分装 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此 不必添加植物激素
3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸 汽灭菌 （二）外植体消毒 1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 2、消毒
Leabharlann Baidu
①流水冲洗
（五）移栽 1、打开封口膜 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养 瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日 2、清洗转移 用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过 毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间
珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、 透性好，适合栽培 3、移栽 幼苗长壮后，移栽到土壤中
菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软 刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右
② 酒精处理 用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体 积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－ 7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗
③消毒液处理
取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分， 放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min， 取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液
③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例 对植物细胞发育方向的影响 生长素 > 细胞分裂素： 有利于根的分化 生长素 < 细胞分裂素： 有利于芽的分化，抑 制根的分化 生长素 ＝ 细胞分裂素： 促进愈伤组织生长
（4）pH、温度、光照
pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每 日用日光灯照射12h