植物组织培养技术
植物组织培养技术
目前中国已成功地将麦角菌、灵芝、猴 头菇等真菌进行工业化生产，高等植物组织 培养在工业化中的应用也正在研究。
总之，植物组织培养这一新技术在中草药 方面应用的前途是无限广阔的，它不仅有利 于探讨和阐明药用植物生理、遗传和成分生 物合成等一系列理论问题，而且一旦工业化 生产问题得到解决，将可以为防病治病做出 很大的贡献。
初代培养（primary culture）：指在组织 培养过程中，最初建立的外植体无菌培 养阶段。由于首批外植体来源复杂，携 带较多细菌，要对培养条件进行适应， 因此，初代培养一般比较困难。
继代培养（subculture）：在组织培养过 程中，当外植体被接种一段时间后，将 已经形成愈伤组织或已经分化根、茎、 叶、花等的培养物重新切割，转接到其 它培养基上以进一步扩大培养的过程称 为继代培养。
再 分 化 （ redifferentiation ） ： 指 在 植 物 组 织 培 养中，对处于脱分化状态的愈伤组织进行培养， 诱导其形成新的植物体的过程。
植株再生（plant regeneration）：指通过 组织培养技术将植物的细胞、组织、器官 培养成完整植株的过程。
试管苗（test-tube plantlet）：指在无菌 条件下的人工培养基上，对植物细胞、组 织或器官进行培养所获得的再生植株。
植物的组织培养方法
植物的组织培养方法
植物组织培养是一种无性繁殖技术，通过培养植物的各种器官组织，包括种子、茎、叶和根的细胞和组织，使其在适当的条件下进行生长和分化，从而产生新的植株。这项技术已被广泛应用于农业、园艺、林业和植物学研究中。以下是植物组织培养的一般步骤和方法：
1. 材料准备：首先，选择适合的植物作为材料，常用的包括水果、蔬菜和花卉植物。收集新鲜的种子、茎、叶或根，并进行消毒处理，以防止细菌、真菌和其他病原体的污染。
2. 植物组织的分离：将植物材料切成小块或将细胞分离开来。对于植物的种子，可以直接将种子表面进行消毒处理后，在培养基上进行培养；对于茎、叶和根等组织，则需要进行切割处理。
3. 培养基的准备：制备适当的培养基是进行植物组织培养的重要步骤。培养基通常由无机盐和有机添加剂组成，以提供植物生长所需的营养物质。根据组织的不同类型，可以使用不同种类和浓度的培养基。
4. 培养基的调整：将分离的组织放入培养基上，可以将培养基涂覆在组织表面上，或者将组织植入培养基中。然后，在无细菌的条件下，将组织培养在适当的温度、湿度和光照条件下。
5. 激素的添加：植物生长激素是控制植物生长和分化的关键因素。在组织培养中，可以根据实验的需要添加适量的激素来促进细胞分裂和分化。常用的激素有生长素、细胞分裂素和愈伤组织生成素等。
6. 愈伤组织的诱导：愈伤组织是植物组织培养中产生的一种可分化细胞。通过搅拌、震荡或辐射等途径，诱导组织分化成愈伤组织，然后将其继续培养。
7. 植株的再生：通过培养基中激素的平衡调节，可以使愈伤组织再生为整个植株。在培养基中，植株的幼苗养分丰富，需要的培养基成分和激素浓度可能与之前的不同。
植物组织培养技术
植物组织培养技术
第一篇：植物组织培养技术简介
植物组织培养技术是指利用植物体外培养的方法繁殖、
培育和改良植株，可以通过体细胞培养、生殖细胞培养和整个植株培养等方式进行。植物组织培养技术已广泛应用于植物繁殖、遗传改良、新品种选育和药物合成等方面，是一个极具应用前景的研究领域。本文将介绍植物组织培养技术的相关知识，包括培养基的配制、培养条件的控制、组织培养的应用以及注意事项等方面。
一、培养基的配制
培养基是植物体外培养的重要条件，其成分根据不同植
物和培养方法的需要而有所差异。通常，培养基由无机盐、有机物、维生素和激素等组成。无机盐是培养基中最主要的成分，其种类和含量的调整对植物体外生长和发育起着至关重要的作用。有机物则为植物提供必需的碳源和能量，维生素和激素则分别参与细胞代谢和生长调控。
二、培养条件的控制
培养条件的控制包括温度、光照、湿度、氧气供应和培
养容器等方面。温度通常在20~30℃之间调节，对不同植物和
组织形态有所不同。光照较为复杂，一般来说，不同种类和不同阶段的植物对光照要求不同，应根据具体需要进行调节。湿度和氧气供应则是影响植物体外生长和发育的关键条件之一，应根据植物的需要而确定。培养容器也是植物组织培养的重要因素，常用的有试管、琼脂糖和蒸馏水等。
三、组织培养的应用
组织培养技术可以用于改良传统植物栽培技术难以完成的任务，如大规模繁殖技术、植物遗传改良、病毒清除和药物合成等。其中大规模繁殖技术主要应用于经济价值高、生长缓慢或不易育种的植物。生长缓慢或不易育种的植物通过组织培养技术可以实现大规模繁殖，从而满足市场需求。植物遗传改良则是利用组织培养技术改变植物性状、耐受性和适应性的方法，通过体细胞选择、诱导突变等方式实现。此外，组织培养技术还可以用于病毒清除和药物合成等领域的研究。
组织培养技术
第五章组织培养技术
第一节植物组织培养
所谓植物组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织. 器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。狭义上是指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也包括在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植株。
一、概述
（一）概念
1. 植物组织培养：是指通过无菌操作，把植物的外植体接种于人工配置的培养基上，在人工控制的条件下进行培养，使其成为完整植株的方法。
2. 外植体：是指用于植物组织培养的接种材料，它包括植物体的各个器官、组织、细胞和原生质体等。
3. 愈伤组织（Callus ）:原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，
在组培中则指人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。
（二）组织培养类型
1. 根据接种的外植体不同分：胚胎培养；器官培养；3组织培养；细胞培养；原生质体培养；
2. 根据培养基态相不同分：固体培养；液体培养；
3. 根据培养过程不同分：初代培养；继代培养；
（三）植物组织培养历史
植物组织培养是20 世纪初开始，以植物生理学为基础发展起来的。有以下过程：思想准备阶段；理论奠基阶段；技术建立阶段；形态发生阶段；应用研究阶段；
1902 年德国植物学家Haberlandt 提出了细胞全能性概念。
1939 年White 报道了烟草组培成功。并提出植物细胞全能性学说。同年，Gautheret 与Nobecourt 培养胡萝卜成功。三人被誉为植物组培奠基人。
植物组织培养技术
植物组织培养技术
植物组织培养技术是一种在无菌条件下通过培养组织和细胞的方式
来繁殖和研究植物的方法。它可以被广泛应用于植物育种、生产和研
究等领域。本文将介绍植物组织培养技术的基本原理、培养基组成和
培养过程，并简要介绍其在实际应用中的一些重要方面。
一、基本原理
植物组织培养技术基于植物细胞的分裂和分化能力。在无菌条件下，取自植物的幼嫩组织、芽尖、胚乳或种子中的胚或胚乳端胚发育相对
较低的部分，通过体外培养的方法，将其置于适当的培养基中，利用
培养基中的植物生长激素和营养物质，可以诱导组织再分化和器官发生，从而实现对植物的繁殖和研究。
二、培养基组成
植物组织培养过程中的培养基主要由无机盐、有机物、糖类和植物
生长调节剂等组成。无机盐提供了植物细胞所需的矿质元素，有机物
则作为植物细胞的能量来源和原料。糖类则提供能量和调节物质，植
物生长调节剂在培养基中的加入可以调节细胞分裂、分化和器官发生
等过程。
三、培养过程
植物组织培养过程一般分为前处理、组织分离、无菌处理、培养和
转地培养等几个步骤。
1. 前处理
前处理包括新鲜植株的选择、幼嫩组织或胚的提取、洗涤和消毒等步骤。新鲜植物材料能提供较高的活力和分裂能力，幼嫩组织或胚则更易于培养。
2. 组织分离
在无菌条件下，通过手工或酶解的方法将所需的幼嫩组织或胚提取出来。组织分离需要注意操作的轻柔和对组织的保护，以确保分离出的细胞和组织能够在后续的培养中保持较高的生活力。
3. 无菌处理
在培养过程中，保持无菌状态是一项关键工作。这包括对器皿、培养基和工具等进行高温高压处理或酒精灯烧烤，同时采取合适的工作台、手套箱、无菌技巧等。
植物组织培养的方法
植物组织培养的方法
植物组织培养（Plant tissue culture）是指利用无菌条件下培养植物细胞或组织，以实现繁殖、繁育新品种、生物合成化合物、环境污染处理等目的的技术。其不仅可以大幅度提高植物材料的品质和数量，还可以在无限制地产生同一种植物。
方法一：赤潮法（Embryogenesis）
这一方法是利用赤潮细胞发生器官（如胚性板）的细胞分化，诱导植物组织的胚胎发生，进而实现植物再生。该方法适用于很多种植物，如玉米、大麦、水稻等。步骤为：
1. 准备培养基：含有赤潮素、氨基酸、维生素、植物激素和适当的糖类和盐类的基础培养基。
2. 处理材料：将植物的姿态板或种子材料在高温（35-40C）下进行消毒，使其无菌。
3. 材料分离：将消毒材料放入无菌条件下进行材料分离。
4. 培养细胞：将细胞或组织放入含有培养基的无菌培养皿中，保持恒定的温度、湿度和光照条件，促进发生素感应化。
5. 发生胚胎体：促进胚胎形成，通过培养发生胚胎胶囊或胚胎体。
6. 块茎冷藏：利用低温存储胚胎体或胚胎胶囊。
方法二：组织培养（Organogenesis）
组织培养方法是通过培养植物的基本组织如叶片、茎尖、芽分根进而再生整个植株。步骤为：
1. 材料处理：对种子或植株进行表层消毒处理。
2. 制备组织片：将消毒好的植株切成组织片段，如茎尖、叶片等。
3. 培养基准备：准备无菌的培养基，其中含有植物的必需胰凡陈列如糖类、氨基酸、维生素、生长因子和植物激素等。
4. 组织分化：将组织片段放入含有培养基的培养皿中，使其分化成根、茎、叶等。
植物组织培养技术
植物组织培养技术
植物组织培养技术是一种在无机培养基中培养、繁殖植物组织的生物技术。这种技术可以促进植物繁殖的速度和效率，创造新品种，识别植物的变异和突变等。此外，它还可以用来进行基因工程和农业生产的改良，为农业生产带来了重大贡献。
植物组织培养技术与显微技术、细胞生物学、遗传学、生理学等学科有密切的联系。通过使用一系列培养基和生长因子，可以选择特定的细胞类型生长，以实现植物再生或重组遗传信息的目的。
植物组织培养技术的基本原理是将成熟的植物组织，如种子、茎、叶等，切成小块或单个细胞，然后将其放置在特殊的培养基中，培养出植物组织。培养基是一种由水溶液、植物晶体、蛋白质和其他能量物质构成的无机物质。这些无机物质和生长因子充分提供了培养组织所需的营养和激素。
培养基的选择对于植物再生和重组遗传信息非常重要。通常会根据不同植物种类及其操作目的制备不同的培养基。培养基的主要组成部分是无机盐、有机物质、碳源、氮源、微量元素和生长因子。其中无机盐是培养基最重要的组成部分，它含有大量植物生理学功能所需的离子和物质。
培养基中的生长因子有三种主要类型：激素、生长素和多种激素。激素能够调节植物细胞分化、增殖和发育，促进再生和器官发育，从而实现植物组织培养；生长素则能够促进细胞分裂和伸长，从而产生新的细胞和器官；而多种激素则具有生长因
子的作用。
植物组织培养技术的具体步骤如下：
1、提取植物材料：从成熟的植物中获取材料，并将其进行清洗、消毒和准备工作。
2、处理组织：将植物材料切下或离心成细胞，将其放置在培
养基中。
3、培养：将处理好的组织放在预先准备好的培养基中，给予
植物组织培养 植物组织培养技术认识护理课件
通过植物组织培养技术进行细 胞培养，研究植物生长发育的
生理和分子机制。
02
植物组织培养技术的基本原理
植物细胞的全能性
植物细胞全能性是指植物细胞具有发育成完整个体的潜能。在适宜的条件下，植 物细胞可以脱分化形成愈伤组织，再分化形成根、茎、叶等器官，进而发育成完 整的植株。
植物细胞全能性的发现为植物组织培养技术的发展奠定了基础，使得人们可以通 过体外培养植物细胞，实现快速繁殖、基因工程和细胞工程等应用。
03
植物组织培养的基本步骤
外植体的选择与处理
外植体的选择
选择健康、无病虫害的植物组织 作为外植体，如根、茎、叶、花 、果实等。
外植体的处理
对外植体进行清洗、消毒、切割 等处理，以去除表面污垢和微生 物。
无菌操作与培养基制备
无菌操作
在无菌条件下进行操作，避免微生物 污染。
培养基制备
制备适合植物生长的培养基，包括营 养成分、pH值、渗透压等。
濒危植物的保存与恢复
濒危植物的种质资源保存
通过植物组织培养技术，可以保存濒危植物的种质资源，确保物种的遗传多样性和生态 平衡。
濒危植物的恢复
通过植物组织培养技术，可以繁殖濒危植物，恢复其种群数量，保护生态环境和生物多 样性。
05
植物组织培养技术的挑战与前景
技术瓶颈与解决方案
植物组织培养
植物组织培养
植物组织培养：在无菌的条件下，将离体的植物材料包括器官，组织，细胞以及原生质体在人工培养基上进行培养，使其再生发育成完整植株的过程，又称植物离体培养。
细胞全能性：植物体的任何一个细胞都携带该物种的全部遗传信息，离体细胞在一定的条件下具有发育成完整植株的潜在能力。
外植体：植物组织培养中离体的植物材料，包括植物器官，胚胎、组织、细胞和原生质体。细胞分化：导致细胞形成不同结构，引起功能改变或潜在发育方式改变的过程。
脱分化：已分化成熟的植物组织或器官回复到分生状态，细胞开始分裂形成无组织结构的细胞团或愈伤组织的过程。
再分化：是指在一定条件下，脱分化形成的愈伤组织转变成为具有一定结构、执行一定生理功能的细胞团和组织、并进一步形成完整植株的过程，即从愈伤组织再生形成完整植株的过程。
愈伤组织：植物体受伤后的伤口处或在植物组织培养中外植体切口处产生的一团不定型的薄壁组织。
离体无性繁殖：根据植物细胞全能性原理，在无菌条件先短时间内形成大量植株。
玻璃化苗：在植物组培中，茎叶形成透明矮小肿胀的形态，生根能力差。
问答题：
1、无菌操作是贯穿于整个组织培养过程的一门关键技术，请根据自己的体会论
述如何在植物组织培养过程中做到无菌？
1）取少菌的材料（春夏，中午的幼芽）
2）严格灭菌
3）合理安排操作程序
4）无菌保存
5）操作规范
2、组培在生产上的应用有哪些？学好植物组培的意义？
1）植物快速繁殖：增殖速度快，成本低，易于批量生成和管理。比如利用一小块叶片或一个茎尖，一年内可繁殖出1000-100000株幼苗
2）脱除病毒：植物在生长过程中几乎都要蒙受到病毒的危害，采用茎尖培养方法可以除去植物体内的病毒。脱毒苗恢复了原有的优良种性，生长势明显增强，整齐一致。
植物组织培养技术
植物组织培养技术
植物组织培养技术是一种在无菌条件下培养和再生植物细胞、组织和器官的方法。该技术被广泛应用于植物生物学研究、种质资源保护和利用、植物育种以及生物工程等领域。本文将为您介绍植物组织培养技术的原理、步骤以及在不同应用领域的具体应用。
一、植物组织培养技术的原理
植物组织培养技术的原理是基于植物的无限生长能力和组织再生能力。在无菌培养条件下，植物细胞、组织被分离、培养，通过提供适宜的培养基、光照、温度和激素等环境因素，可以促进细胞分裂和再分化，最终形成新的植物器官或整株植株。
二、植物组织培养技术的步骤
1. 材料准备：收集植物组织样品，如叶片、茎段、花器官等，并进行表面消毒处理。
2. 培养基配制：根据具体需求配制适宜的培养基，培养基包括基础盐、有机添加物、糖类、维生素和激素等成分。
3. 组织切割和培养：将材料切割成适当大小的小块，接种到含有培养基的培养器皿中，置于恒温、恒湿条件下进行培养。
4. 培养条件管理：根据不同材料的需求，调节光照强度、温度、湿度以及培养基中激素和营养物质的浓度等条件。
5. 组织再分化和生长：培养的初期，细胞和组织会发生再分化现象，形成愈伤组织；随后，再生出新的植株。
6. 生根和移栽：对于培养的植株，进行生根处理，并移栽到土壤中
进行进一步生长。
三、植物组织培养技术的应用领域
1. 种质资源保护与利用：植物组织培养技术可以使濒危植物得到有
效保护和大量繁殖，并为种质资源的利用提供便利。
2. 植物育种：通过植物组织培养技术，可以繁殖无性系、获得遗传
变异体、加速杂交育种过程等，从而提高育种效率和品种纯度。
植物组织培养技术
植物组织培养技术
植物组织培养是70 年代快速发展并趋成熟的现代生物技术，是在含有营养物质及植物生长调节物质的培养基中离体培养植物组织（器官或细胞）的技术。它的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每一个细胞都有分化成一个完整植株的潜在能力。该技术在品种选育、名特优品种的快速繁殖、自然资源的保护、品种质量的提高、濒危植物种质保存等诸方面都表现出巨大的应用前景，取得了明显的经济效益。
组织培养前景广阔植物组织培养技术一诞生就表现了强大的生命力和美好的前景。它在细胞学、遗传学、农学、生理学、生物化学等学科的基础理论研究中，成了一种常用的生物学技术; 在实际应用中也发挥了巨大作用，取得了显着的经济效益和社会效益。
育种：通过组织培养技术，结合诱变育种技术，成功地培育出许多优良品种。如抗黄化叶病的大麦品种; 培育出脱病毒的马铃薯、甘蔗品种，使马铃薯产量增加十多倍;选育出早熟（比母本提早15 天）、优质（含糖量9.5%）、高产（单果平均重106 克）的京早三号桃（中科院植物所培育）等等，这些例子不胜枚举。
快速繁殖：应用组织培养技术可使某一个优良品种得到快速繁殖，可在一年内从一个芽或一张叶片，培养与繁殖成几十万或上百万株小苗，使得该优良品种很快得以推广。如浙江省金华婺东葡萄良品场，1990年将日本引进的葡萄品种栽培成功后，我们通过快速繁殖，使每月的增殖系数达到6〜9,可使一个芽在一年之内产生100 万个芽。快繁技术在花
卉、果树等经济植物的优良品种繁育中，取得了良好的经济效益。
名、特、优、稀植物品种的保存与繁殖：许多名贵植物（如兰花）由于繁殖慢或困难,数量不多; 而众多的野生植物（如花卉、药材）由于人们过度的采伐,变成濒危植物。这些品种的保存与繁殖越来越显得重要与紧迫。应用组织培养技术, 不仅可以在实验室条件下保存种质,还可以进行工业化生产, 大量繁殖来满足人类生活的需求。
植物的组织培养技术
培养基的成分与作用
培养基是组织培养过程中重要的组成部分，它为植物细胞提供必要的营养物质、激 素和其他生长因子。
培养基通常包括无机盐、有机物、维生素、氨基酸等，这些成分能够满足植物细胞 生长和分化的需要。
激素在培养基中起着关键作用，如生长素和细胞分裂素能够促进细胞分裂和组织分 化，对植株的形态发生和发育具有重要影响。
03 植物组织培养的操作流程
外植体的选择与处理
外植体的选择
选择健康、无病虫害的植物组织 作为外植体，如根、茎、叶、花 、胚等。
外植体的处理
清洗、切割、消毒等步骤，确保 外植体无菌，为后续培养提供良 好的基础。
无菌操作技术
无菌操作环境
在无菌操作室内进行，确保空气经过过滤，减少微生物污染 。
无菌操作工具
兰花的快速繁殖
总结词
通过植物组织培养技术，可以实现兰花的快速繁殖，提高繁殖系数，缩短繁殖周期。
详细描述
植物组织培养技术是一种无性繁殖的方法，通过将兰花植株的某个组织或器官（如叶片、根尖、花蕾等）进行离 体培养，诱导其产生大量的分化芽，最终形成完整的植株。这种方法可以大大提高兰花的繁殖速度，缩短繁殖周 期，并且可以保持母本的优良性状。
02 植物组织培养的基本原理
植物细胞的全能性
植物细胞全能性是指植物细胞具有发 育成完整个体的潜能。通过组织培养 技术，植物细胞可以在适宜的条件下 重新分化，形成完整的植株。
植物组织培养
植物组织培养
植物组织培养是一项重要的生物技术，它通过体外培养和操控植物
细胞、组织和器官的生长和分化，实现对植株的快速繁殖和遗传改良。本文将介绍植物组织培养的原理、应用以及当前面临的挑战。
一、植物组织培养的原理
植物组织培养的基本原理是利用植物的无性繁殖能力和分生组织的
再生能力。通过适当的调节营养培养基、激素和光照条件，使植物细胞、组织和器官在体外重建完整植株。其中，植物激素的添加对于细
胞分裂、分化和重建胚胎的发育起到关键作用。通过控制培养基中激
素的种类和浓度，可以调控植物的愈伤组织、悬浮细胞培养和离体根
的形成。
二、植物组织培养的应用
1. 植物繁殖和育种
植物组织培养技术在植物繁殖和育种方面有着广泛的应用。通过组
织培养，可以实现植物的快速繁殖，提高种子的发芽率和苗木的生长
速度。在植物育种中，可以通过组织培养技术快速筛选和培育具有优
良性状的品种，加快育种进程。
2. 植物生物工程
植物组织培养在植物生物工程领域发挥着重要作用。利用基因工程
技术，可以在植物细胞中导入外源基因，实现对植物特性的改良和优
化。例如，通过转基因技术，可以增加植物的抗病性、耐逆性和产量。同时，植物组织培养也为植物的无性繁殖提供了便利，例如通过离体
茎尖培养，可以快速繁殖大量具有相同基因型的植株。
三、植物组织培养的挑战
植物组织培养虽然在许多领域有着重要应用，但也存在一些挑战和
问题。
1. 污染和感染
在植物组织培养过程中，外界环境的污染和植物自身的感染问题是
首要考虑的因素。细菌、真菌和病毒的感染会导致组织培养的失败和
细胞组织的死亡。因此，保持洁净的实验环境和选用无菌种子和材料
植物组织培养的操作手段及注意事项
植物组织培养的操作手段及注意事项
植物组织培养是一种利用植物的组织或细胞在无菌条件下进行培养和繁殖的技术。通过植物组织培养，可以实现植物的无性繁殖、植物基因工程以及植物种质资源的保存等目的。下面将介绍植物组织培养的操作手段及注意事项。
一、植物组织培养的操作手段
1.材料准备：选择优良的母本植株，将其嫩茎、新芽、子叶等组织取出，进行消毒处理。消毒处理一般采用漂白粉、酒精等方法，以确保材料的无菌状态。
2.培养基配制：根据实验需要，选择合适的培养基进行配制。培养基可以分为基础培养基和添加物培养基。基础培养基通常包括无机盐、糖类、维生素和植物激素等成分，而添加物培养基则根据具体实验需要添加特定的物质。
3.无菌操作：将材料放入培养室中进行无菌操作，保证实验的无菌条件。无菌操作包括消毒台面、工具、培养器皿等，以及操作者本身的无菌状态。
4.培养条件控制：根据植物的特性和培养的目的，控制适宜的温度、光照和湿度等条件。不同植物对于培养条件的要求有所不同，需要根据具体情况进行调整。
5.观察和记录：在培养过程中，要及时观察和记录植物的生长情况。观察可以包括植物的生长速度、形态特征以及细胞分裂和器官发育等方面。
二、植物组织培养的注意事项
1.消毒措施：在进行组织培养之前，必须进行彻底的消毒处理，以防止外源性的污染。消毒处理可以使用漂白粉、酒精或高温高压等方法，具体方法根据实验需要进行选择。
2.培养器皿选择：选择适合的培养器皿进行培养。常用的培养器皿有培养瓶、琼脂瓶、培养皿等。不同的植物和实验要求可以选择不同的培养器皿。
植物组织培养技术
植物组织培养技术
植物组织培养技术是现代植物学研究中非常重要的一项技术手段。通过植物组织培养技术，我们可以在无菌条件下，通过体细胞或器官
的分离培养，获得大量的同一植物的无性系，进而进行基因改良、病
毒检测、过量繁殖等研究工作。本文将介绍植物组织培养技术的原理、方法和应用。
植物组织培养技术的原理主要是利用植物细胞的再分化和分化能力。植物细胞是多潜能和多分化的，可以在适宜的培养条件下，再生
成新的细胞、组织和器官。这种再分化和分化的过程是通过激素的调
控完成的，培养基中添加不同种类和浓度的激素，可以引导植物细胞
不同的再分化和分化途径。
植物组织培养技术的方法主要包括无菌分离、培养基的配制、组
织的培养和幼苗的转移到土壤等步骤。首先，需要从植物体中取得组
织样品，并进行无菌分离。分离过程通常在无菌工作台中进行，使用
无菌工具将组织样品表面消毒并分离出单个细胞或小块组织。然后，
将分离得到的细胞或组织转移到含有适当激素和营养物质的培养基上
进行培养。培养基中的激素种类和浓度会影响细胞和组织的再分化和
分化。最后，经过适当时间的培养，幼苗或新生的组织可以被转移到
土壤中进行继续培养和生长。
植物组织培养技术的应用非常广泛。首先，它被广泛应用于植物
育种领域。通过选择性培养或遗传转化等技术，可以获得具有特定性
状的植物无性系，从而提高作物的产量和品质。其次，植物组织培养
技术也可以用于植物病毒检测和清除。植物病毒会对作物产生很大的
危害，通过组织培养技术可以获得无病毒的植物材料，进而进行病毒
检测和病毒清除工作。此外，植物组织培养技术还可以用于植物的大
植物组织培养的类型
植物组织培养的类型
植物组织培养是一种在无菌条件下，利用植物组织的分裂、分化和再生能力进行体外培养的技术。通过植物组织培养，可以实现无性繁殖、快速繁殖和遗传改良等目的。本文将介绍几种常见的植物组织培养类型。
一、愈伤组织培养
愈伤组织是指植物受到外界刺激后产生的异常组织，具有强烈的再生分裂能力。愈伤组织培养是指通过培养和再生愈伤组织，实现植物的快速繁殖和遗传改良。愈伤组织培养常用的方法有切割法、刺激法和悬浮培养法等。通过这些方法，可以获得大量的愈伤组织，并进一步分化为根、茎、叶等不同的植物器官。
二、胚培养
胚培养是指将植物胚或胚乳在适宜培养基上进行培养，促使其发育成为完整植株的技术。胚培养可以实现无性繁殖、快速繁殖和遗传改良等目的。胚培养常用的方法有胚轴培养、胚乳培养和胚培养悬浮液法等。通过这些方法，可以培养出大量的植物胚，进一步发育为完整的植株。
三、单细胞培养
单细胞培养是指将植物体的单个细胞或细胞团在适宜培养基上进行培养，促使其分化为完整植株的技术。单细胞培养可以实现无性繁
殖、快速繁殖和遗传改良等目的。单细胞培养常用的方法有悬浮细胞培养、离体培养和原生质体培养等。通过这些方法，可以培养出大量的植物细胞，进一步发育为完整的植株。
四、花药培养
花药培养是指将植物的花药在适宜培养基上进行培养，促使其分化为花粉或胚囊的技术。花药培养可以实现花粉无性繁殖和胚囊遗传改良等目的。花药培养常用的方法有花药切片培养、花药培养悬浮液法和花药离体培养等。通过这些方法，可以获得大量的花粉或胚囊，进一步进行无性繁殖或遗传改良。
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外，需要量比较多的元素叫大量元素，需要量比较
少的元素叫微量营养元素。
大量元素
•培养基的大量元素使用量一般在每升几十至几千 毫克。大量元素包括N, P, K, Ca, Mg, S。 培养基中加入量最多的是N，N一般以硝酸盐或氨 盐，或者两者结合的盐提供
微量元素
微量元素的用量一般每升不高于几十毫克。植物所 需的微量元素有Fe、Cu、Zn、B、 Mo、Mn、Co，Cl 其他一些化学药品常带有微量元素杂质，因此要注 意微量元素的用量不能过多，多会引起生长抑制等 毒害现象。
种子和分生组织：培养时通常将其贴放在培养基表 面，而不是插到培养基内部，以免供氧不足
正 确
错 误
接种茎段：注意形态学下端插入培养基内，而形 态学上端露于空气中
正 确
错 误
§3.培养基的成分及其配制
一、培养基的成分及其作用
（一）无机营养物质
培养的植物组织、器官、细胞或者原生质体需
要连续的供给某些无机化学物质，除了C、H、O之
2、细胞分裂素
是一类腺嘌呤衍生物。主要有激动素（ 6-糠 基氨基嘌呤KT）、6-苄基氨基嘌呤（6-BA）和 玉米素（ZT）等。其中最常用的是6—苄基氨 基嘌呤。 功能： 1、促进细胞的分裂和分化 2、诱导芽的分化 3、促进侧芽的萌发和生长 4、抑制衰老
A
B
A：BA(0mg/L) ，芽（减少），根（增多）愈伤组织（一定量） B：BA(0.1mg/L)，芽（适量），根（适量）愈伤组织（一定量）
4、用70－75％的酒精拭擦台面并消毒双手。试验 用具也应该用酒精消毒。点燃酒精灯，将金属器 械在其火焰上灼烧，冷却待用。 注意：所有操作应在火焰近处并经过灼烧进行。 金属器械不能过度灼烧，以防退火。移液管不能 灼烧，培养瓶口、塑料材料、橡胶材料过火焰不 能时间太长。
5、打开培养瓶，瓶口在灯焰处旋转灼烧，用镊 子将培养材料置于培养基上，灼烧镊子放回， 灼烧瓶口，盖上瓶塞。
1.5 培养室
培养室应配有培养架、光照培养箱、自动控时器、臭氧 机等。日光灯一般用40W，固定在培养架的侧面或搁板 的下面，每层有两支日光灯，距离在20cm，光照强度 为2000-3000lx。配备中央无菌过滤空调控温，消毒。
§2
实验基本操作
（一）、灭菌工作是极其重要的。
首先应建立有菌和无菌的概念有菌的范畴： 有菌：凡是暴露在空气中的物体，至少其表面都是有菌的。 如植物的表面、超净工作台的台面，未处理的工具和手等。 无菌：高压高温处理（工具、器皿、培养基等） 物理或化学处理； 火烤后的物体；
按需消毒空间每立方米用于苍术片(中药店 有售)1克计算，将苍术浸泡于95％酒精内， 酒精用量以淹没苍术为准，密封浸泡24小 时待用。消毒时将浸泡好的苍术置于1个或 2个耐高温容器内，点燃熏蒸2小时，每周 1次。需要注意的是，开始点燃时有5厘米 左右高的火焰，约持续2分钟。因此，需待 火焰灭后，观有淡淡的烟雾上升后室内方 可离人
§1
实验室设置及仪器设备
实验室是进行组培研究的主要场所，须 满足洗涤、培养基制备、无菌操作、培 养、鉴定等工作。
1．基本实验室
1.1 洗涤间 根据生产量的大小决定其大小，一般面积控 制在30-50m2。在实验室的一侧设置专用的洗涤水 槽，用来清洗玻璃器皿。中央实验台还应配置2 个水槽，用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大， 可以购置一台洗瓶机。地面应耐湿并排水良好。
药剂灭菌 烧灼灭菌 辐射灭菌
液体培养基、蒸馏水
培养材料 器械、瓶口、棉塞、包头纸 接种室。培养间
（1）干热灭菌
适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方 法：150℃ 、40min或120℃ 、120min，如 果发现芽孢杆菌，160℃ 、90～120min
（2）湿热灭菌
适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、 棉塞、纸等。121℃ 维持20～30min 注意点：加足水、排尽气、气压降到0时， 才能开盖
1.3 灭菌室
配备高压灭菌锅、灭菌锅的选择应根据不同的 要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用小 型的医用手提式高压灭菌锅，较大的实验室可选用 立式自动控制压力和温度的灭菌锅。生产性的实验 室可选用大型的卧式灭菌锅。 小的10万，大的45万。
1.4 无菌操作室
无菌操作室又叫接种室。通常由里外两间组成，外间 是缓冲间，用于准备工作，防止污染的作用。缓冲间 的门应该与接种室的门错开，两个门也不要同时开启， 以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间 内应该设有洗手池、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌 操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修，工作人员进 入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。 室内应配有超净工作台，紫外灯、解剖镜、各种 接种器械等。
脱毒马铃薯组培室的基本情况
第六师农科所 王 航
组织培养：又叫离体培养,利用 细胞全能性，从植物体内分离 出符合需要的组织，经过培养 以获得再生的完整植株。
为什么马铃薯要脱毒： 马铃薯块茎容易积累病毒，用 带病毒的块茎当种薯，产量逐 年下降，品质降低。容易染病。
一. 基本情况 §1 §2 §3 实验室设置及仪器设备 实验基本操作 培养基的成分及其配制
熏蒸灭菌
长期不用的培养室或接种室要进行熏蒸。方法：甲 醛、高锰酸钾熏蒸。 甲醛的用量通常按每立方米空间2-6毫升计算， 高锰酸钾的用量是甲醛的一半。室内准备妥当后， 把称好的高锰酸钾放在瓷碗或烧杯内(最好在碗或 杯下面铺一张报纸，以利清洗)，然后将甲醛也倒 入碗或杯内，立即出屋关门。几秒钟后，甲醛溶液 即沸腾挥发。高锰酸钾是一种氧化剂，当它与一部 分甲醛作用时，由氧化反应产生的热可使其余的甲 醛挥发为气体。
操作的空气：洗刷地板95%酒精擦超净工作台 用化学试剂薰蒸
1、实验器具和材料的准备 2、用75%的酒精擦拭超净工作台，然后室内及超 净工作台用紫外灯杀菌20min-30min。注意：台 面上的用品不要放置太多或重叠放置，以免降低 灭菌效果。 3、关紫外灯、打开风机，过5-10min进入缓冲间， 以75%洗手和手臂，更换无菌服、帽子和口罩。 进入接种室。（注：没有特别情况，尽量不要下 工作台）
（3）过滤灭菌
培养基的灭菌一般用高压高温处理，但如果 培养基中某些成分遇到高温分解（如某些生长调 节剂GA3、玉米素等），就需要过滤灭菌。另外酶、 血清等也需要过滤灭菌 灭菌方法：将生长调节剂或酶配成一定浓度， 用注射器注入微孔滤膜虑，滤膜孔径0.22～0.45 微米。制培养基时，现将培养基高压灭菌，待降 至50℃左右时，加入适量的激素，然后分装。
消 毒 剂 使用浓度(%)
75 10～20 0.1～1 10～12 4～50mgl-1 9 ～ 10
乙醇 新洁尔灭 氯化汞 过氧化氢 抗菌素 次氯酸钙/纳
消毒时间 (min.) 0.1-3 5～30 2～15 5～15 30～60 5～30
效 果
好 好 最好 较好 较好 好
残液去除 难易 易 易 最难 最易 较难 易
甲醛熏蒸接种室应至少在使用前24小时进行，熏蒸后 密闭保持4小时以上再进入室内工作。甲醛对人的眼、 鼻有强烈刺激作用。因此，可在使用前用氨进行中和。 取与甲醛等量的氨水，倒在另一个烧杯里，迅速放入 熏蒸室内，使甲醛和氨水发生中和反应，以消除甲醛 味，减少对人体的刺激作用。使用氨水应在工作前2 小时进行。 对有材料的培养室，也可以采用乙二醇加热熏蒸
4、其它有机物质 1）肌醇（环己六醇） 肌醇可以形成果胶物质，是细胞壁的构建物质 另外还可以形成植酸，与阳离子结合或形成磷脂， 参与细胞膜的组成。利于胚和芽的形成 2）天然有机物 一些天然的有机物如椰乳、番茄提取物、酵母提 取物、马铃薯煮汁也常用于植物组织培养，并表 现出了良好的促进作用。
（三）、植物生长调节物质
1.2培养基配制间
面积60平方米左右，配备的主要仪器设备有 ：冰 箱、天平、微波炉、pH计、培养基灌装器、药品 柜、器械柜、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、 移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰箱 以体积200-250L为宜，用于储存培养基母液、激 素维生素等贵重药品、彩色胶卷、及保存植物材 料。
植物激素是在植物体内合成的，对植物 生长发育有显著调节作用的微量有机物， 而植物生长调节剂是外源的调节植物生 长发育的物质。 无机元素和有机营养构成的培养基仅保 证培养物的生存与最低生理活动，只有 加入植物生长调节物质，才能诱导细胞 分裂、脱分化和再分化。
1、生长素类：
1）吲哚类：IAA（吲哚乙酸）、 IBA（吲哚丁酸） 、 IPA（吲哚丙酸） 2）萘酸类： NAA（萘乙酸） 3）苯氧羧酸类：2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、 2,4,5-T（ 2,4,5-三氯苯氧乙酸）、 2,4,5-TP （ 2,4,5-三氯苯氧丙酸）等。 其中吲哚乙酸在植物体内普遍存在，是生理活性最 强的生长素。
注意（1）进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必 太快，以防空气流动，增加污染机会。（2）不能用 手触及已消毒器皿，如已接触，要用火焰烧灼消毒或 取备品更换。 （3）为拿取方便，工作台面上的用品 要有合理的布局，原则上应是右手使用的东西放置在 右侧，左手用品在左侧，酒精灯置于中央。（4）工 作由始至终要保持一定顺序性，组织或细胞在未做处 理之前，勿过早暴露在空气中。同样，培养液在未用 前，不要过早开瓶；用过之后如不再重复使用，应立 即封闭瓶口直立可增加落菌机会。
接种时在近火焰处打开瓶口，使瓶倾斜， 以免空气中微生物落入瓶中
正 确
错 误
整个接种操作应在近火焰Hale Waihona Puke Baidu进行，且动作要 迅速
正 确
错
误
防止操作带来的污染 接种过程中尽可能达到悬空要求
正
确
错
误
接种时不得用手接触瓶盖内壁或瓶口
正 确
错
误
瓶盖朝上放，接种完毕后立即盖好瓶口
正
确
错
误
接种完一瓶用火烧用具以防止交叉污染产生
（二）、灭菌的方法
1、物理方法：干热、湿热、过滤（0.25微 米）紫外灯、超声波等。 2、化学方法：使用灭菌剂或抗菌素，如酒 精、次氯酸钠、升汞、漂白粉、高锰酸钾、 双氧水、福尔马林等
各种灭菌方法及其使用范围
干热灭菌 玻璃器皿、器械
湿热灭菌
熏蒸灭菌
培养基、蒸馏水、器械、棉塞等
接种室、培养室
过滤灭菌
三、无菌操作技术
人为因素（工作人员本身）：工作服、帽、口罩、酒精擦手。 器 皿 和 用 具 污染来源
培养皿：洗→热压 玻璃器皿：洗→干热（干热箱）或晾干 接种用具：用CCL4布擦→湿布擦→
泡75%~95%酒精→烧
培养基：湿热
物品因素
培 养 材 料
外部细菌：用水冲洗→化学药剂处理
内部细菌 茎尖培养 加抗生素：青霉素、利福平
2、AA类物质 绝大多数AA适量时对培养效果都有正象效应。常用 的有Gly、Asn、Gln。在植物组织培养中，有时也 用水解乳蛋白和水解酪蛋白。
3、糖类
糖在培养基的作用： 1）、为细胞提供合成新物质的碳骨架 2）、为细胞的呼吸代谢提供底物和能量 3）、维持渗透压 蔗糖是广泛应用的一种碳源。葡萄糖和麦芽糖也是常 用的碳源。
（二）.有机化合物
有机物质包括维生素类物质、氨基酸类物质、糖类物 质和一些其它的有机添加物 1、维生素类物质 维生素类物质在酶系统中有催化功能。 硫胺素（VB1）与愈伤组织的产生和生活力有关，可 能是所有植物组织培养初期需要的维生素，而盐酸 吡哆醇（VB6）促进根的生长，烟酸（VB3，又称 维生素PP）促进胚的发育。有的配方中还使用了泛 酸钙（VB5）、生物素（VH）、钴胺素（VB12）、 叶酸（VBc），Vc等。
生长素的生理作用
1、促进细胞生长和细胞分裂 2、诱导受伤组织表面细胞恢复分裂能力 3、形成愈伤组织，促进生根 4、与一定量的细胞分裂素配合共同诱导不定 芽的分化、侧芽的萌发与生长、胚状体的诱 导。
A
B
C
A：NAA 0mg/L，芽（少），根（无） B：NAA 0.1mg/L，芽（少），根（无），愈伤组织（少量） C：NAA 5.0mg/L，芽（少），根（多），愈伤组织（一定量
（4）射线灭菌
主要是利用紫外灯进行照射，适合实验室 空气、操作台等，灭菌时间20～30min。 注意：关灯后5min后再进入。超净工作台 关灯后要打开风机。
（5）火焰灼烧灭菌
用火焰灼烧达到灭菌目的，适用于 接种器皿的灭菌。
（6）消毒剂
适用外植体、实验器皿、操作表面、皮肤等。 几种常用消毒剂的效果比较