盐酸奥洛他定滴眼液眼刺激性试验研究

盐酸奥洛他定滴眼液眼刺激性试验研究
发表时间：2013-01-17T10:32:31.530Z 来源：《医药前沿》2012年第28期供稿作者：孙宝海梅胜尧刘晶
[导读] 病理组织学检查显示兔双眼结膜各部位上皮细胞无变性、坏死，间质血管无扩张、充血，无炎细胞浸润等病变。

孙宝海梅胜尧刘晶(通讯作者)
（南京工业大学江苏省药物研究所/江苏省药物安全性评价中心 210009）
【摘要】目的观察盐酸奥洛他定滴眼液的眼刺激性。

方法试验前眼睛经检查合格的4只新西兰白兔用于试验。

采用自身对照，左眼给予供试品，右眼给予等量的空白。

每天给药2次，上下午各1次，连续给药14天，0.1ml/次/眼，供试品原液给药，浓度为1mg/ml。

每天给药前以及最后一次给药后1h、2h、4h、24h、48h、72h对眼部进行检查，采用双盲法用裂隙灯观察兔眼刺激情况并评分，试验结束，取眼球作病理组织学检查。

结果连续14天给药，药物对正常兔眼无明显影响，与空白组比较，无显著差异。

结论盐酸奥洛他定滴眼液对兔眼无刺激性。

【关键词】盐酸奥洛他定滴眼液眼球刺激性
【中图分类号】R96 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）28-0019-02
盐酸奥洛他定{z-1，化学名z一11.(3一二甲胺丙烯基)石，11一二氢二苯并[b，e]氧杂革-2一乙酸酸盐}是第三代强效、安全的抗过敏药，于1997年和2001年分别在美国和日本上市，具有抑制组胺释放及选择性拮I受体的双重作用，且无HI受体拮抗剂类抗敏药常见的中枢神经系统抑制及心脏毒副作，是新一代的抗过敏首选药[1]。

本研究观察兔经眼给予盐酸奥洛他定滴眼液后，在眼前部表面产生的可逆性炎症反应及其他可能的刺激性反应，为临床用药提供参考。

1、材料与方法
1.1供试品、溶媒及荧光素钠注射液
盐酸奥洛他定滴眼液，批号：1202001，由江苏亚邦爱普森药业有限公司生产。

规格：5ml:5mg，含量/浓度：103.3%，无色澄明液体，常温、避光保存。

氯化钠注射液，批号：2011080303，南京小营药业集团有限公司生产。

荧光素钠注射液，批号：1009011，由江门生物技术开发中心药业有限公司提供。

规格：3ml:0.6g，密闭保存，棕色澄明液体，
1.2实验动物
普通级新西兰大白兔，4只，雌雄各半，体重范围：2.0kg-2.6kg，由中国人民解放军第四军医大学实验动物中心提供，动物生产许可证号：SCXK(军)2007-007。

动物饲养于本中心普通动物实验室。

饲养房间的温度：18～26℃；控制湿度：40～70％；换气次数：8～10次/小时；工作照明：150～300 Lux；动物照明：100～200 Lux；照明时间：12小时/天（06:00～18:00）。

动物饲养于托盘饲育架（300×210×55cm）上的悬吊式不锈钢饲育笼（40×40×50 cm）内，1只/笼。

自由摄食及饮水。

饲料批号：20120515，由北京科澳协力饲料有限公司提供。

检疫合格后用于试验。

本机构实验动物的使用遵循3R（Reduction, RepLacement, Refinement）原则。

实验方案在实施前已经得到本机构动物管理与使用委员会伦理审查批准。

1.3实验方法[2-4]
购进的实验兔每只眼滴入1%荧光素钠溶液1滴后用生理盐水洗净，再用裂隙灯检查，有眼刺激症状、角膜缺陷和结膜损伤的动物不能用于试验，检查合格的兔用于试验。

实验兔采用自身对照，左眼给供试品，0.1ml/眼，浓度为1mg/ml，为临床浓度。

右眼给予等量的氯化钠注射液。

供试品及氯化钠注射液，无需配制，给药时轻轻拉开眼睑，将药物滴入眼结膜囊内，轻合眼睑10s，每天给药2次，上下午各1次，连续给药14天。

每天给药前以及最后一次给药后1h、2h、4h、24h、48h、72h对眼部进行检查，如果在72h未见任何刺激症状，试验则可结束。

如果有轻度刺激性，观察期延长至最后一次给药后7d；有中度刺激性，观察期延长至最后一次给药后14d；有强度刺激性，观察期延长至最后一次给药后21d。

试验结束，用20%乌拉坦溶液腹腔注射麻醉后颈动脉放血处死兔子，然后取出眼球固定于12%福尔马林溶液中，经取材、脱水、包埋、染色，进行光镜检查。

1.4症状观察
按表1采用手持裂隙灯观察结膜、角膜和虹膜等刺激性反应，并记录眼部反应的分值，观察内容包括结膜、角膜和虹膜损伤等。

表1眼刺激反应评分标准
1.5结果判定
按表1的要求，将每个观察时间点每个动物的眼角膜、虹膜和结膜的刺激反应分值相加得总积分，将一组的积分总和除以动物数，即得最后分值。

按表2判定其刺激程度，并结合组织病理学检查结果作综合判定。

表2眼刺激性评价
2、结果
2.1手持裂隙灯显微镜及1%荧光素钠溶液检查结果
连续14天兔眼结膜囊给予盐酸奥洛他定滴眼液，手持裂隙灯显微镜检查显示兔双眼角膜透明、无混浊，虹膜纹理清晰，无充血、无肿胀，结膜无充血、无水肿、无分泌物，每个观察时间点每个动物的眼角膜、虹膜和结膜的刺激反应分值均为0，刺激性评价为无刺激性。

角膜用1%荧光素钠溶液染色，未被染成黄绿色，表明角膜无损伤、溃疡或异物。

刺激性反应分值见表3。

表3刺激性反应分值
2.2病理组织学检查结果
病理组织学检查显示兔双眼结膜各部位上皮细胞无变性、坏死，间质血管无扩张、充血，无炎细胞浸润等病变。

角膜表面上皮细胞无变性、坏死，基质层胶原纤维无肿胀、断裂，无炎细胞浸润，无肉芽组织增生。

角膜内皮细胞无坏死、无增生。

虹膜睫状体组织结构清晰，间质无充血，无炎细胞浸润。

（见图1）
3、讨论
全球约有20%的人患有过敏性角结膜炎 [5-6]，近年来患病率随着我国的工业化进展有逐渐上升的趋势，此疾病男性发病率高于女性，好发于热带和亚热带，春夏季节发病率高于秋冬两季，但接诊的患者中季节性并不明显。

我国过敏性结膜炎好发于中青年，以常年性过敏性结膜炎和季节性过敏性结膜炎为主要的类型，春季角结膜炎在儿童期过敏性结膜炎中占较高比例。

患病与性别无关，中部地区所占的比例最高，症状体征以眼痒、眼部充血为主。

0.1％盐酸奥洛他定对过敏性结膜炎症状与体征缓解具有显著效果，舒适度高，患者满意度高，不良反应发生率低，无严重不良反应发生[7]。

目前针对过敏性结膜炎的药物种类繁多，包括抗组胺药、眼用血管收缩剂、眼用肥大细胞稳定眼用双效抗组胺药、跟用非甾体类抗炎药和眼用类药物[8-9]。

奥洛他定是一种新型的组胺H1受体抑制剂，抗组胺及肥大细胞稳定作用，可抑制速激肽和化学递质的产生和释放
[10]。

与多数抗过敏药不同，奥洛他定主要通过肾脏以原药形式通过尿清除[11]。

作为新一代的抗组胺类药物，盐酸奥洛他定在治疗季节性过敏性结膜炎方面取得了较好的效果。

0.1％盐酸奥洛他定滴眼液治疗眼痒、结膜充血及睑结膜乳头的疗效好，不良反应少，应用简单[12]。

本研究观察兔眼给予盐酸奥洛他定滴眼液后，在眼前部表面产生的可逆性炎症反应及其他可能的刺激性反应，大体检查和病理检查结果都提示兔眼结膜囊内连续给给予供试品盐酸奥洛他定滴眼液14天对兔眼无刺激性。

参考文献
[1]刘萍.抗过敏药—olopatadine[J].国外医药—合成药、生化药、制剂分册，1998，19(6)：333—334.
[2]国家食品药品监督管理局. 化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则.2005年3月.
[3]国家食品药品监督管理局.药物非临床质量管理规范.2003年9月.
[4]袁伯俊,廖明阳,李波.药物毒理学实验方法与技术.北京:化学工业出版社，2007.
[5]Abeoson M B，George M A，Garofalo C.Differntial diagnosis of ocular disorder[J].Ann Allergy，1993，70(3)：95-105.
[6]Mcltzer E Q.Evaluating rhinitis：clinical rhinomanometrie and cytological assessment[J].J Allergy Clin Immunol，1998，82(5)：900-908.
[7]李莹，张潇，孙国强，等.过敏性结膜炎的流行病学及奥洛他定滴眼液开放性多中心治疗的初步效果 [J].眼科，2008，17(8)：166-170.
[8]壬巨存，冯亦颖.过敏性结膜炎药物治疗研究进展.天津药学，200 9，21(5)：67-71.
[9]周淑新，李尔曼.初级保健红限的诊断与管理.中国全科医学，20l O.13(4A)：1099.
[10]孙晋瑞.孙倩，于静.奥浩他定.齐鲁药事，2006.25(10)；636—638.
[11]李嫒嫒，郝光涛，高洪志，等.盐酸奥洛他定片在健康人体的药代动力学.中国临床药理学杂志.2010，26(3)：190-194.
[12]李立虎.奥洛他定治疗过敏性结膜炎临床观察[J].中国基础医药，2012，19(9)：1318-1319.
图1 第一排从左到右分别为给药组眼睑结膜，眼角膜，眼虹膜 HE ×200；第二排从左到右分别为对照组眼睑结膜，眼角膜，眼虹膜 HE ×200.。