刘志华液相色谱讲座220130612

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高效液相色谱讲座第一讲高效液相色谱概貌和设备

离分析。
１现代高效液相色谱与经典液相色）
谱的比较
ＴＣ部分地克服了ＴＣ固有的缺点，可以Ｌ）Ｌ和高效柱液相色谱互为补充。２高效液相色谱与气相色谱的比较）气相色谱自五十年代出现以来，获得了飞速发展，它的特点是高效、快速和灵敏，其分离分析复杂混合物的能力是以前其他色谱方法无法比拟的，应用相当广泛和普遍。但是由于气相色谱使用气体流动相，被分析样品必须要有一定的蒸汽压，汽化后才能在柱上分析，这使分离对象的范围受到一定的限制。对于那些挥发性差的物质（高沸点化
１％）。
与此相反，液相色谱则不受样品挥发度和热稳定性的限制，液相色谱一般在室温下操作，最高不超过流动相溶剂的沸点，所以只要被分析物质在流动相溶剂（各式各样）中有一定的溶解度，便可以分析。所以液相色谱特别适合于那些沸点高、极性强、热稳定性差的化合物，例如生化物质和药物，离子型化合物，热不稳定的天然产物等等。事
定，但一般说来，柱效受些影响。自动进样器适合于多样品重复操作，便于用微处理机控制，实现自动化。检测器被分析组分在柱流出液中浓度的变化可通过检测器转化为光学的或电学的信号而被检出，是色谱仪的 “ 眼睛”。检测器性能的好坏直接关系着定性定量分析结果的可靠性和准确性。在高效液相色谱中最常用的检测器是光学检测器，例如示差折光、
素的石油醚溶液从一根主要装有碳酸钙吸附
剂的玻璃管上端加入，沿管滤下，后用纯石油醚淋洗，结果按照不同色素的吸附顺序在管内观察到它们相应的色带，就象光谱一样。茨
维特把这些色带称为“ 色谱图”Ｃｒｍｔｇ（ｈｏａｏ－ｒｍ，相应的方法叫做“ ａ）色谱法”Ｃｒｍ－（ｈｏａｔｇａｈｃｔｏ）ｏｒｐｉｍｈｄ。这就是最初的液相色ｅ

多波长HPLC－DAD_法同时测定美白类化妆品中8_种甘草化学成分

多波长ＨＰＬＣ－ＤＡＤ法同时测定美白类化妆品中８种甘草化学成分吴晓云ꎬ李思龙ꎬ刁飞燕ꎬ李启艳ꎬ冉金凤ꎬ刘春霖(山东省食品药品检验研究院ꎬ国家药品监督管理局化妆品原料质量控制重点实验室ꎬ山东济南２５０１０１)摘要:目的㊀建立多波长高效液相色谱－二极管阵列检测器(ＨＰＬＣ－ＤＡＤ)法同时测定美白类化妆品中８种甘草化学成分的含量ꎮ方法㊀样品经７０％甲醇溶液提取㊁过滤后ꎬ经ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＣ１８色谱柱(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)分离ꎬ流动相为乙腈－０.１％磷酸ꎬ梯度洗脱ꎬ２３１㊁２４９和３６５ｎｍ波长同时检测ꎬ流速１.０ｍＬｍｉｎ－１ꎬ柱温３０ħꎮ结果㊀８种成分分离度良好ꎬ在各进样浓度范围内线性关系良好ꎬ相关系数ｒ均大于０.９９８ꎻ４种不同化妆品基质的平均加样回收率(ｎ＝３)为８８.３％~９６.２％ꎬ相对标准偏差(ＲＳＤ)为０.９％~３.５％ꎮ结论㊀本方法准确可靠㊁灵敏度高ꎬ可用于同时测定化妆品中８种甘草化学成分ꎮ关键词:化妆品ꎻ甘草ꎻ多波长ꎻ高效液相色谱法中图分类号:Ｒ９２７.２㊀文献标志码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２３)０９－０６８０－００５ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２３.０９.００７Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ８ｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｆｒｏｍＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅＲａｄｉｘｅｔＲｈｉｚｏｍａｉｎｗｈｉｔｅｎｉｎｇｃｏｓｍｅｔｉｃｓｂｙｍｕｌｔｉ－ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈＨＰＬＣ－ＤＡＤＷＵＸｉａｏｙｕｎꎬＬＩＳｉｌｏｎｇꎬＤＩＡＯＦｅｉｙａｎꎬＬＩＱｉｙａｎꎬＲＡＮＪｉｎｆｅｎｇꎬＬＩＵＣｈｕｎｌｉｎ(ＮＭＰＡＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＱｕａｌｉｔｙＣｏｎｔｒｏｌｏｆＣｏｓｍｅｔｉｃｓＲａｗＭａｔｅｒｉａｌꎬＳｈａｎｄｏｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌꎬＪｉｎａｎ２５０１０１ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎｍｕｌｔｉ－ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈＨＰＬＣ－ＤＡＤｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ８ｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎ￣ｓｔｉｔｕｅｎｔｓｆｒｏｍＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅＲａｄｉｘｅｔＲｈｉｚｏｍａｉｎｗｈｉｔｅｎｉｎｇｃｏｓｍｅｔｉｃｓ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀Ｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙ７０％ｍｅｔｈａｎｏｌｓｏｌｕｔｉｏｎａｎｄｆｉｌｔｅｒｅｄꎬｔｈｅｎｓｅｐａｒａｔｅｄｏｎａＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＣ１８ｃｏｌｕｍｎ(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)ｕｓｉｎｇａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅａｎｄｔｈｅａ￣ｑｕｅｏｕｓｓｏｌｕｔｉｏｎｏｆ０.１％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｗｉｔｈｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎａｎｄａｆｌｏｗｒａｔｅｏｆ１.０ｍＬｍｉｎ－１.Ｔｈｅｄｅｔｅｃ￣ｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｓｗｅｒｅ２３１ꎬ２４９ａｎｄ３６５ｎｍａｎｄｔｈｅｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ３０ħ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀Ｔｈｅ８ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｗｅｒｅｗｅｌｌｓｅｐａｒａｔｅｄ.Ａｌｌｏｆｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｓｓｈｏｗｅｄｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄａｌｌｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓｗｅｒｅａｂｏｖｅ０.９９８ꎻＴｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓｉｎ４ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｙｐｅｓｏｆｃｏｓｍｅｔｉｃｓｗｅｒｅｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ８８.３％~９６.２％ꎬｗｉｔｈＲＳＤｏｆ０.９％~３.５％(ｎ＝３).Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀Ｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｗａｓａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｈｉｇｈｌｙｓｅｎｓｉｔｉｖｅ.Ｉｔｃａｎｂｅｕｔｉｌｉｚｅｄｆｏｒｓｉｍｕｌｔａ￣ｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ８ｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｆｒｏｍＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅＲａｄｉｘｅｔＲｈｉｚｏｍａｉｎｃｏｓｍｅｔｉｃｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＣｏｓｍｅｔｉｃｓꎻＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅＲａｄｉｘｅｔＲｈｉｚｏｍａꎻＭｕｌｔｉ－ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈꎻＨＰＬＣ㊀㊀植物原料及其提取物由于安全性高㊁作用温和等独特的优势ꎬ因此在化妆品行业有良好的开发和应用前景ꎮ甘草提取物主要包括黄酮类㊁三萜类和多糖类等活性成分ꎬ具有美白㊁防晒㊁抗氧化㊁抗炎和抗菌等功效[１－４]ꎬ被广泛应用于护肤类㊁美白类㊁防晒类等多种化妆品中ꎮ目前ꎬ涉及化妆品中甘草类化学成分的检测标准有３个ꎬ国家标准«ＧＢ/Ｔ３５９５４－２０１８化妆品中１０种美白祛斑剂的测定高效液相色谱法»㊁行业标准«ＳＮ/Ｔ１５００－２００４化妆品中甘草酸二钾的检测方法液相色谱法»与团体标准«Ｔ/ＣＡＦＦＣＩ１－２０１８化妆品用原料甘草酸二钾»ꎬ且以上标准只涉及甘草酸二钾的检测ꎮ甘草提取物中除含甘草酸二钾ꎬ还含有甘草苷㊁异甘草苷㊁甘草查尔酮Ｂ㊁甘草素㊁异甘草素㊁甘草查尔酮Ａ和光甘草定等多种化学活性成分ꎬ本文建立多波长高效液相色谱－二极管阵列检测器(ＨＰＬＣ－ＤＡＤ)法可同时测㊀作者简介:吴晓云ꎬ女ꎬ副主任药师ꎬ研究方向:中药与化妆品检测㊁质量控制ꎬＥ－ｍａｉｌ:４４１３１４１８４＠ｑｑ.ｃｏｍ通信作者:刘春霖ꎬ男ꎬ高级工程师ꎬ研究方向:化妆品与保健食品检测㊁质量标准研究ꎬTel:158****0988ꎬE－ｍａｉｌ:ｃｈｕｎｌｉｎ０３２０＠１２６.ｃｏｍ定以上８种甘草化学成分ꎮ文献报道甘草成分检测方法有高效液相色谱法[５－６]㊁超高效液相色谱法[７]㊁液相色谱－质谱法等[８－１０]ꎬ主要涉及中药材及其提取物研究ꎮ化妆品领域甘草化学成分的测定方法主要为高效液相色谱法[１１－１２]ꎬ文献[１３]在２３７ｎｍ波长下测定化妆品中的４种甘草成分ꎬ陆军等[１４]在２３７ｎｍ波长下测定７种甘草成分ꎮ笔者未见文献报道化妆品中甘草查尔酮Ｂ和异甘草素的测定ꎬ单一检测波长很难兼顾每个组分的最佳检测灵敏度ꎬ且同一提取方法可能不适用于多种复杂的化妆品基质ꎮ本方法在优化乳液类㊁膏霜类㊁水剂类和凝胶类４种基质前处理方法基础上ꎬ建立多波长ＨＰＬＣ－ＤＡＤ法同时测定８种甘草化学成分ꎬ该方法操作简单㊁灵敏度和准确度高ꎬ为产品质量提供保障ꎮ１㊀仪器与材料１.１㊀仪器与设备㊀ＬＣ－４０Ｄ高效液相色谱仪(日本岛津公司)ꎬ配ＤＡＤ检测器ꎻＭｅｔｔｌｅｒＴｏｌｅｄｏＭＳ电子天平(梅特勒－托利多国际贸易上海有限公司)ꎻＵ￣ｎｉｖｅｒｓａｌ３２０Ｒ高速离心机(德国Ｈｅｔｔｉｃｈ公司)ꎻＫＱ－５００ＤＥ超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)ꎻＭｉｌｌｉ－Ｑ型超纯水仪(美国密理博公司)ꎮ１.２㊀材料与试剂㊀乙腈㊁甲醇(色谱纯ꎬ霍尼韦尔贸易上海有限公司)ꎻ磷酸(优级纯ꎬ国药集团化学试剂有限公司)ꎻ超纯水ꎮ标准品:甘草苷(批号:Ｚ１０Ｊ８Ｘ３９６１１ꎬ含量９８％ꎬ上海源叶生物科技有限公司)ꎻ异甘草苷(批号:Ｙ１５Ａ１０Ｈ９５３４４ꎬ含量９８％ꎬ上海源叶生物科技有限公司)ꎻ甘草查尔酮Ｂ(批号:Ｗ１０Ｓ１０Ｚ９６９５３ꎬ含量９８％ꎬ上海源叶生物科技有限公司)ꎻ甘草素(批号:Ｔ４８９００１０ꎬ含量９９.０％ꎬ上海安谱实验科技股份有限公司)ꎻ甘草酸二钾(批号:Ｆ１２Ｍ６Ｚ１ꎬ含量９８％ꎬ上海源叶生物科技有限公司)ꎻ异甘草素(批号:３８６４００１０ꎬ含量９９.９％ꎬ上海安谱实验科技股份有限公司)ꎻ甘草查尔酮Ａ(批号:Ｐ２１Ｏ８Ｆ４６４７３ꎬ含量９８％ꎬ上海源叶生物科技有限公司)ꎻ光甘草定(批号:Ｋ２７Ａ９Ｒ５９９６０ꎬ含量９８％ꎬ上海源叶生物科技有限公司)ꎮ３０批美白类化妆品均为市售产品ꎮ２㊀方法与结果２.１㊀色谱条件㊀色谱柱:ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＣ１８(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)ꎻ柱温:３０ħꎻ流速:１.０ｍＬｍｉｎ－１ꎻ进样体积:１０μＬꎮ流动相:乙腈(Ａ)－０.１％磷酸溶液(Ｂ)ꎬ梯度洗脱(０~４ｍｉｎꎬ２４％Ａꎻ４~２７ｍｉｎꎬ２４％Ａң８０％Ａꎻ２７~３０ｍｉｎꎬ８０％Ａң２４％Ａꎻ３０~３３ｍｉｎꎬ２４％Ａ)ꎮ检测波长:２３１ｎｍ(甘草苷㊁甘草素和光甘草定)㊁２４９ｎｍ(甘草酸二钾)㊁３６５ｎｍ(异甘草苷㊁甘草查尔酮Ｂ㊁异甘草素㊁甘草查尔酮Ａ)ꎮ２.２㊀标准溶液的制备㊀分别精密称取甘草苷１２.０１ｍｇ㊁异甘草苷１０.６５ｍｇ㊁甘草查尔酮Ｂ７.８５ｍｇ㊁甘草素９.５０ｍｇ㊁甘草酸二钾１２.０４ｍｇ㊁异甘草素１０.１９ｍｇ㊁甘草查尔酮Ａ１０.２９ｍｇ㊁光甘草定１０.８３ｍｇꎬ置１０ｍＬ量瓶中ꎬ加甲醇溶解并定容至刻度ꎬ配成标准储备液ꎮ分别精密吸取上述标准储备液各１.０ｍＬꎬ置１０ｍＬ量瓶中ꎬ加甲醇稀释并定容至刻度作为混合标准溶液ꎮ２.３㊀供试品溶液的制备２.３.１㊀乳液类和膏霜类㊀准确称取０.５ｇ样品(精确至０.０００１ｇ)于２５ｍＬ具塞比色管中ꎬ加入０.５ｍＬ饱和氯化钠水溶液ꎬ震荡混匀ꎬ再加入１０ｍＬ７０％甲醇ꎬ涡旋混匀５ｍｉｎ后ꎬ超声提取２０ｍｉｎꎬ４０００ｒｍｉｎ－１离心４ｍｉｎ后ꎬ取上清液于比色管中ꎬ残渣再加１０ｍＬ７０％甲醇重复上述步骤ꎬ合并两次提取液ꎬ用氮气吹干至５ｍＬ左右ꎬ再加入甲醇溶解定容至１０ｍＬꎬ－１８ħ冷冻１ｈ后ꎬ４ħ下６０００ｒｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎꎬ取上清液经０.４５μｍ滤膜过滤ꎬ取续滤液ꎬ即得ꎮ２.３.２㊀水剂类和凝胶类㊀准确称取０.５ｇ样品(精确至０.０００１ｇ)于１０ｍＬ具塞比色管中ꎬ加入适量７０％甲醇溶液ꎬ涡旋混匀５ｍｉｎ至样品完全分散ꎬ超声提取２０ｍｉｎꎬ冷却后定容至１０ｍＬꎬ－１８ħ冷冻１ｈ后ꎬ４ħ下６０００ｒｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎꎬ取上清液经０.４５μｍ滤膜过滤ꎬ取续滤液ꎬ即得ꎮ２.４㊀系统适用性试验㊀精密量取２.２项下混合标准溶液１.０ｍＬ置１０ｍＬ量瓶中ꎬ加甲醇溶解并定容至刻度ꎬ将上述溶液按２.１项下色谱条件进样ꎮ结果ꎬ在２３１ｎｍ波长下８种成分分离度均大于２.５ꎬ达到基线分离ꎬ理论板数均大于７０００ꎮ２.５㊀线性关系考察㊀精密量取混合标准溶液适量ꎬ用甲醇分级稀释ꎬ按照上述色谱条件分别进样ꎬ以溶液浓度(Ｘ)为横坐标ꎬ色谱峰面积(Ｙ)为纵坐标ꎬ进行线性回归ꎮ结果表明ꎬ８种成分在一定浓度范围内线性关系良好ꎬ结果见表１ꎮ２.６㊀回收率试验㊀取４种不同化妆品空白基质(水剂类㊁膏霜类㊁凝胶类和乳液类)各０.５ｇꎬ分别精密加入标准储备液适量ꎬ使添加水平分别为低㊁中和高３个水平ꎬ每个水平平行制备３份样品ꎬ按２.３项下制备供试品溶液后进样测定ꎬ得到８种成分平均加样回收率范围为８８.３％~９６.２％ꎬＲＳＤ为０.９％~３.５％ꎬ回收率良好ꎬ结果见表２ꎮ表１㊀各成分的线性范围㊁回归方程和相关系数成分线性范围/ｍｇＬ－１回归方程ｒ甘草苷０.１１７７~１１.７７Ｙ＝１８.５８Ｘ－１.８８８０.９９８８异甘草苷０.１０４４~１０.４４Ｙ＝１４.１４Ｘ－１.０４５０.９９８８甘草查尔酮Ｂ０.０７６９３~７.６９３Ｙ＝１９.５８Ｘ－１.３５６０.９９８８甘草素０.０９４０５~９.４０５Ｙ＝３９.０２Ｘ－２.４３００.９９９０甘草酸二钾０.１１８０~１１.８０Ｙ＝２.９８８Ｘ－０.２７０６０.９９９９异甘草素０.１０１８~１０.１８Ｙ＝２１.２９Ｘ－１.５０６０.９９９１甘草查尔酮Ａ０.１００８~１０.０８Ｙ＝１６.７３Ｘ－１.２６５０.９９９１光甘草定０.１０６１~１０.６１Ｙ＝４３.５４Ｘ－３.１６２０.９９９１２.７㊀稳定性试验㊀取回收率试验制备的低浓度供试品溶液(水剂类㊁膏霜类㊁凝胶类和乳液类)ꎬ按上述色谱条件分别在０㊁２㊁４㊁６㊁１２㊁２４ｈ进样分析ꎬ分别记录８种成分峰面积ꎬ计算ＲＳＤ在１.１％~２.０％之间(ｎ＝２)ꎬ表明８种成分在２４ｈ内稳定性良好ꎮ２.８㊀精密度试验㊀取系统适用性试验所制备的混合标准溶液ꎬ重复进样６次ꎬ分别记录８种待测物峰面积ꎬ计算ＲＳＤ在０.７％~１.４％之间ꎬ表明仪器精密度良好ꎬ结果见表３ꎮ表２㊀８种成分的平均回收率和ＲＳＤ(ｎ＝３)成分加入量/μｇ水剂类膏霜类凝胶类乳液类回收率(％)ＲＳＤ(％)回收率(％)ＲＳＤ(％)回收率(％)ＲＳＤ(％)回收率(％)ＲＳＤ(％)２.３５４９５.０２.１９０.２２.４９４.１２.２９３.８２.７甘草苷１１.７７９４.３１.８９０.５１.７９３.６１.８９５.３２.２５８.８５９６.２１.９９２.１１.８９４.３１.３９４.５２.２２.０８８９３.８２.２９２.９２.５９３.１１.９９２.６２.３异甘草苷１０.４４９４.４１.５９３.２２.３９２.２２.１９２.７２.０５２.２０９５.０１.６９４.８１.７９３.９２.２９２.５１.９１.５３９９１.９２.２９０.２２.６９３.６２.０９１.５２.５甘草查尔酮Ｂ７.６９３９３.８２.１９３.１２.０９２.２１.０９２.６２.７３８.４６９３.７２.４９１.５１.５９２.７２.４９４.１２.２１.８８１９５.５２.１８８.７３.２９２.２２.４９２.９２.０甘草素９.４０５９４.０２.３９１.８２.４９２.６２.５９３.１２.１４７.０２９４.６２.７９３.７１.９９３.０１.５９４.２１.９２.３６０９０.７３.１８８.３３.３９１.８３.０８９.５３.５甘草酸二钾１１.８０９２.９２.５９３.２２.７９２.２３.４９３.１２.６５９.００９２.５２.３９２.５３.０９２.６３.３９２.８２.７２.０３６８９.３２.２９０.９２.３９０.５２.３９１.３２.６异甘草素１０.１８９１.８１.１９１.５１.５８８.７２.２９１.４２.４５０.９０９０.８１.７９１.６０.９９１.２３.０９１.０２.３２.０１６９１.９２.２８９.３２.９９２.０２.８９１.７３.０甘草查尔酮Ａ１０.０８９３.６２.３９２.２２.１９２.７３.２９２.４３.１５０.４０９４.７２.１９３.１２.２９３.２２.５９２.８２.２２.１２２９０.８１.９８９.１２.９９２.９２.０９０.４３.０光甘草定１０.６１９４.５２.０９０.２１.２９１.６１.５９２.３２.８５３.０５９２.１１.４９２.５２.１９２.８１.８９１.４２.７表３㊀８种成分精密度考察名称峰面积ＲＳＤ(％)甘草苷０.７异甘草苷１.１甘草查尔酮Ｂ０.８甘草素１.２甘草酸二钾１.４异甘草素０.９甘草查尔酮Ａ１.１光甘草定１.２２.９㊀检出限与定量限㊀逐级稀释标准溶液ꎬ把信噪比(Ｓ/Ｎ)为３ʒ１时的浓度作为最低检出浓度ꎬ信噪比(Ｓ/Ｎ)为１０ʒ１时的浓度作为最低定量浓度ꎬ按称取０.５ｇ样品定容至１０ｍＬ进行计算ꎬ得到样品检出限和定量限ꎬ结果见表４ꎮ表４㊀８种成分检出限与定量限成分检出限/ｍｇｋｇ－１定量限/ｍｇｋｇ－１甘草苷０.５９１.８异甘草苷０.５２１.６甘草查尔酮Ｂ０.３８１.２甘草素０.１２０.４７甘草酸二钾０.５９１.８异甘草素０.１３０.５１甘草查尔酮Ａ０.５０１.５光甘草定０.１３０.５３２.１０㊀样品测定㊀对３０批美白类化妆品进行测定ꎬ４批样品含甘草酸二钾ꎬ含量在６.７５~３１２ｍｇｋｇ－１之间ꎻ５批样品含光甘草定ꎬ含量在１.９３~２３.９ｍｇｋｇ－１之间ꎻ其余６种成分未检出ꎮ典型样品色谱图见图１ꎮ混合标准品溶液色谱图见图１ꎮ３㊀讨论３.１㊀检测波长的选择㊀８种成分最大吸收波长有差异ꎬ用单一检测波长ꎬ很难兼顾每个成分的最佳检测灵敏度ꎬ故利用ＤＡＤ检测器的优点ꎬ设置多个波长进行检测ꎬ使各成分均在最佳灵敏度下被检测ꎮ试验对８种化合物在１９０~４００ｎｍ全波长范围扫描ꎬ在不考虑有较大干扰的末端吸收下ꎬ根据各成分的紫外吸收谱图来确定检测波长ꎮ结果表明:甘草苷在２３１ｎｍ波长处有最大吸收㊁甘草素和光甘草定在２３１ｎｍ波长附近有较强吸收ꎬ故选择２３１ｎｍ为检测波长ꎻ甘草酸二钾在２４９ｎｍ波长处有最大吸收ꎬ故选择２４９ｎｍ为检测波长ꎻ其余４种成分ꎬ异甘草苷在３６１ｎｍ波长处有最大吸收ꎬ甘草查尔酮Ｂ在３４０~３７０ｎｍ有最大吸收ꎬ异甘草素和甘草查尔酮Ａ在３６０~３８０ｎｍ有最大吸收ꎬ综合考虑灵敏度及化妆品中防腐剂等基质的干扰ꎬ其余４种成分选择３６５ｎｍ为检测波长ꎮ不同波长下８种成分的标准色谱图见图１ꎮ㊀１.甘草苷ꎻ２.异甘草苷ꎻ３.甘草查尔酮Ｂꎻ４.甘草素ꎻ５.甘草酸二钾ꎻ６.异甘草素ꎻ７.甘草查尔酮Ａꎻ８.光甘草定图１㊀８种混合标准品溶液色谱图３.２㊀流动相的选择㊀试验考察了乙腈－水㊁甲醇－水㊁乙腈－０.１％磷酸溶液㊁甲醇－０.１％磷酸溶液作为流动相时８种成分在相同色谱条件下的分离效果ꎮ结果显示ꎬ采用乙腈－０.１％磷酸溶液流动相进行分析时ꎬ基线平稳ꎬ分离度和峰形均较好ꎬ故选择该流动相系统ꎮ考察不同梯度洗脱程序ꎬ结果显示在最终确定的色谱条件下ꎬ８种成分在较短的洗脱时间内分离度良好ꎮ３.３㊀色谱柱的选择㊀对比ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＣ１８柱(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)㊁ＷａｔｅｒｓＳｙｍｍｅｔｒｙＣ１８柱(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)㊁Ｋｒｏｍａｓｉｌ１００－５－Ｃ１８柱(４.６ｍｍˑ２５０ｍｍꎬ５μｍ)３种不同品牌色谱柱的分离效果ꎮ结果表明ꎬ使用ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＣ１８柱ꎬ待测组分分离度均较好ꎬ分离时间较短且峰形良好ꎬ故选择该色谱柱进行分析ꎮ３.４㊀前处理方法的研究３.４.１㊀提取溶剂的选择㊀本研究考察了甲醇浓度分别为９０％㊁７０％㊁５０％㊁３０％时ꎬ对４种不同基质样品的提取效果ꎮ结果发现９０％与７０％甲醇的提取效率较高ꎬ由于７０％甲醇提取的供试品溶液中干扰物质较少ꎬ且待测组分的峰形较好ꎬ故选用７０％甲醇溶液作为提取溶剂ꎮ乳液和膏霜类基质中ꎬ比较加入与不加入０.５ｍＬ饱和氯化钠水溶液ꎬ再进行超声提取ꎬ结果显示加入后提取效率显著提高ꎮ由于先加入饱和氯化钠水溶液ꎬ震荡混匀使样品变成流动状态ꎬ样品能够完全分散利于待测成分的释放ꎬ加速进入提取溶剂中ꎮ水剂和凝胶类基质加入饱和氯化钠水溶液后的提取效率ꎬ与不加无显著差异ꎮ３.４.２㊀提取方式与时间的选择㊀以７０％甲醇溶液作为提取溶剂ꎬ分别比较超声提取(５㊁１０㊁２０㊁３０ｍｉｎ)和震荡提取(０.５㊁１㊁２㊁３ｈ)对同一样品的提取效率ꎮ试验结果表明ꎬ超声提取优于振荡提取ꎻ超声提取２０ｍｉｎ时ꎬ各目标成分提取量最高ꎬ主要因为超声提取利用超声波产生的强烈震动及扩散效应ꎬ增加了溶剂穿透力ꎬ加速目标物扩散和溶解ꎮ最终试验选用超声提取２０ｍｉｎꎮ３.４.３㊀供试品溶液纯化方式的选择㊀供试品溶液提取㊁浓缩与定容之后ꎬ再用０.４５μｍ滤膜过滤后进样ꎬ样品图谱中干扰峰较多ꎬ背景噪声干扰较大ꎬ且有些供试品溶液在静置２ｈ后会析出絮状沉淀ꎮ考虑到化妆品成分的复杂性ꎬ本研究采用低温样品纯化ꎬ选择将供试品溶液－１８ħ冷冻１ｈꎬ在低温４ħ下６０００ｒｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ后过滤进样ꎬ可以有效降低基质类成分的干扰ꎮ３.５㊀结论㊀本研究建立了多波长ＨＰＬＣ－ＤＡＤ法同时测定化妆品中８种甘草化学成分的方法ꎬ方法学验证结果表明该方法准确可靠㊁灵敏度高ꎬ适用于化妆品中８种甘草化学成分的分析及定量检测ꎬ为化妆品原料和产品的监管提供技术支持ꎮ参考文献:[１]㊀胡耿ꎬ黄绮韵ꎬ张甜ꎬ等.甘草黄酮类化学成分研究[Ｊ].中草药ꎬ２０１９ꎬ５０(２１):５１８７－５１９２.[２]王建国ꎬ周忠ꎬ刘海峰ꎬ等.甘草的活性成分及其在化妆品中的应用[Ｊ].日用化学工业ꎬ２００４ꎬ３４(４):２４９－２５１. [３]张福欣ꎬ宋佳烜ꎬ刘晓东ꎬ等.甘草黄酮抗氧化及免疫活性[Ｊ].中国兽医学报ꎬ２０１９ꎬ３９(６):１１８０－１１８３. [４]包芳ꎬ白海英ꎬ彭静文ꎬ等.栽培甘草的化学成分及其抗菌活性研究[Ｊ].中国现代中药ꎬ２０１９ꎬ２１(５):５７７－５８２. 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[８]周麟.奇楠沉香[Ｍ].上海:上海译文出版社有限公司ꎬ２０１９:３９.[９]顾小辉ꎬ王国全ꎬ周亚奎ꎬ等.虫漏沉香的基本特征及其品质评价[Ｊ].中国现代中药ꎬ２０１７ꎬ１９(８):１０６４－１０７０. [１０]任娟ꎬ刘晓ꎬ李伟东ꎬ等.基于ＵＨＰＬＣ－Ｑ－ＴＯＦ－ＭＳ/ＭＳ的白芍炒制前后化学成分研究[Ｊ].世界中医药ꎬ２０１９ꎬ１４(２):２６８－２７３.[１１]陈俊可ꎬ曾锐.基于ＵＰＬＣ－ＥＳＩ－ＨＲＭＳ~ｎ的代谢组学技术对粗茎秦艽不同部位化学成分研究[Ｊ].中草药ꎬ２０１８ꎬ４９(１０):２３２８－２３３５.[１２]ＨＵＡＮＧＢＭꎬＺＨＡＱＬꎬＣＨＥＮＴＢꎬｅｔａｌ.ＤｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆｍａｒｋｅｒｓｆｏｒｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｎｇｔｈｅａｇｅｏｆｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｇｉｎｓｅｎｇｂｙｕｓｉｎｇＵＨＰＬＣ－ＱＴＯＦ/ＭＳｃｏｕｐｌｅｄｗｉｔｈＯＰＬＳ－ＤＡ[Ｊ].Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅꎬ２０１８(４５):８－１７.(收稿日期:２０２３－０６－１４)。

高效液相色谱法测定止痛清晕胶囊中芍药苷含量

Ｂ
超声处理３ｉ，冷，称定０ｍｎ放再质量，乙醇补足减失的质量，用摇匀，过，滤取续滤液，即得供试
品溶液。
据过滤时的难易程度和所得色谱峰的情况以及回收率测定结果，确认用乙醇提取的效果更好。白芍为止痛清晕胶囊中的主要药材之一。高效液相色谱法用
色谱柱：ｒｍｓｊ柱（０ｍｘ４６ｍ５ｍ）流动相：ＫｏａｉＣ８２０ｍ．ｍ，ｌ；乙腈一水（７：３；速：．Ｌｍｎ检测波长为２０ｎ进样量：１８）流０８ｍ／ｉ；３ｍ；１Ｌ柱温：０ｏ理论板数按芍药苷峰计算应不低于２０。此０Ｉ；Ｌ４Ｃ。０在５色谱条件下，谱图见图１色。２２溶液制备 … ．精密称取芍药苷对照品适量，乙醇制成每１ｍ含４加Ｌ０ｇ的溶液，对照品贮备液。即得精密量取对照品贮备液（．０／０２１ｇ
高效液相色谱法测定止痛清晕胶囊中芍药苷含量
郑美善，徐莲花，崔永学
（吉林省延边朝鲜族自治州食品药品检验所，吉林延边１３０）３００
摘要：目的探讨止痛清晕胶囊质量控制的新方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为ＫｏａｉＣｒｍｓ柱（０ｍ× ．ｌ，ｍ）流动相为ｌ２０ｍ４６ｍｎ５，乙腈一水（７：３，测波长为２０ｎ结果芍药苷进样量在０１０８０８４０ｔ１８）检３ｍ。．６～．０ｇ范围内与峰面积线性关系良好，＝．９（６，ｘｒ０９９８ｎ＝）平均回收率为９．１，Ｓ０４％（６。论所用方法灵敏、８５％ＲＤ＝．５ｎ＝）结简便、确，用作止痛清晕胶囊中白芍的主要成分芍药苷的含量测定。准可

食品中八种合成色素高效液相色谱检测方法的改进

食品中八种合成色素高效液相色谱检测方法的改进食品添加剂被广泛用于提高食品的色、香、味和质地，其中合成色素是其中的一种。

然而，合成色素如果使用不当，会给人体带来健康风险。

因此，合成色素的检测与控制变得非常重要。

本文将介绍一种改进的高效液相色谱（HPLC）方法来检测食品中的八种合成色素。

首先，对液相色谱进行改进。

我们将使用有机相和水相混合物，以提高检测性能。

与传统的HPLC方法相比，此方法更适合在不同温度和压力下进行高效药物分离。

其次，我们将使用改进的衍生化方法。

衍生化是通过化学反应将分子转化为易于检测的形式的过程。

在这种情况下，我们将使用硫代乙酰胺（Thioacetamide）来衍生化合成色素。

这将增加其检测限度，使八种合成色素更易检测。

第三，我们将实现色谱柱的改进。

我们将使用反相高效液相色谱柱。

这种柱子具有较高的稳定性和更好的分离能力。

使用这种柱子，我们可以更好地分离和检测不同化合物。

第四，我们将使用改进的检测技术。

我们将使用气动雾化离子源（APCI）-质谱检测器来检测我们的样品。

APCI质谱检测器具有更高的分辨率，能够检测非常小的化合物，同时还能快速检测大量的样品。

第五，我们将使用固相萃取技术。

固相萃取是一个分离和富集化合物的过程。

通过使用固相萃取技术，我们可以从样品中分离出目标化合物，提高分析的准确度和精度。

第六，我们将优化柱温控制。

柱温对HPLC分析有很大的影响，它可以影响样品的压力和分离效果。

通过优化柱温控制，我们可以增加样品的分离效果，从而提高分析的准确性和灵敏度。

第七，我们将控制流速和温度。

流速和温度是HPLC分析过程中的另外两个重要参数。

通过控制流速和温度，我们可以优化柱子和检测器的运行条件，提高分离效果和准确性。

最后，我们将对检测条件进行细致的优化。

我们会对不同的参数进行调整，包括柱子类型、流速、柱温、检测波长等。

通过对这些参数的细致调整，我们可以让检测过程更为高效和准确。

综上所述，改进的高效液相色谱（HPLC）检测方法可以提高食品中八种合成色素的检测性能。

高效液相色谱法同时测定美白祛斑类化妆品中的8种激素探讨

高效液相色谱法同时测定美白祛斑类化妆品中的8种激素探讨随着社会的进步和人们对美的追求，化妆品市场越来越火爆。

美白祛斑类化妆品因其具有美白效果和祛斑功效而备受消费者青睐。

近年来却频繁传出美白祛斑类化妆品中含有激素成分的事件，这引起了人们的广泛关注。

激素成分会对人体造成不良影响，因此需要对美白祛斑类化妆品中的激素成分进行科学、准确的测定和监管。

本文将利用高效液相色谱法同时测定美白祛斑类化妆品中的8种激素，并对其进行探讨。

一、引言美白祛斑类化妆品在市场上备受追捧，但其中是否含有激素成分一直是人们十分关心的问题。

激素成分对人体的影响很大，包括引起激素依赖性皮炎、皮肤萎缩、毛细血管扩张、毛发生长等不良反应。

对美白祛斑类化妆品中的激素成分进行准确测定非常重要。

二、高效液相色谱法在美白祛斑类化妆品激素测定中的应用高效液相色谱法是一种高效、准确的分离和定量分析技术，已被广泛应用于化妆品中有害成分的检测。

该方法具有分离效果好、准确度高、重现性好等优点，因此在美白祛斑类化妆品中的激素测定中发挥了重要作用。

1. 样品的制备我们需要准备待测样品。

将待测美白祛斑类化妆品按照一定比例加入适量溶剂中，进行超声波处理，使得其中的激素成分充分溶解。

然后，通过滤膜过滤，以去除其中的悬浮杂质。

2. 仪器与色谱条件在使用高效液相色谱法进行测定时，我们需要一台高效液相色谱仪，以及相应的色谱柱和检测器。

还需要选择合适的色谱条件，包括流动相的组成、流动速度、检测器的波长等。

这些条件的选择需要充分考虑待测激素成分的化学特性。

3. 标准曲线的建立我们需要准备各种激素成分的标准品，以不同浓度进行稀释，并通过高效液相色谱法进行分析。

然后，利用各标准品的峰面积与浓度之间的关系建立标准曲线，以便后续待测样品中激素成分浓度的定量分析。

4. 样品的分析接下来，将制备好的待测样品放入高效液相色谱仪中进行分析。

通过比对样品中的激素成分峰面积与标准曲线，即可对其中的激素成分进行定量分析。

高效液相色谱法测定盐酸伊立替康注射液的含量

５ｔｘｍ），以磷酸盐缓冲液（称取无水磷酸二氢钠２．４３ｇ和辛烷磺酸钠１．６６ｇ，溶于ｌ０００ｍＬ水中）一甲醇一乙腈（５７：２５：１８）为流动相，柱温为４０℃ ，流速为１．５ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为２５５ｎｍ。结果盐酸伊立替康质量浓度在０．１８３１～１．４６４７ｇ／Ｌ范围内与峰面积呈良好线性关系（ｒ＝０．９９９４，ｎ＝７），平均回收率为１００．３３％，ＲＳＤ＝０．４６％（ｎ＝９）。结论该法准确、简便、重复性好，可用于盐酸伊立：０ｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｈｉｇｈｐｅｆｒｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）ｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＩｒｉｎｏｔｅｃａｎＨｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅＩｎｉｅｃｔｉｏｎ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｗａｓｐｅｒｆｏｍｅｒｄｏｎｔｈｅＡｇｉｌｅｎｔＨＣ—Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ（２５０ｍｍｘ４．６ｍｍ，５ｍ）ｗｉｔｈｔｈｅ

高效液相色谱法检测乌头类生物碱用的供试品溶液的制备方法[发明专利]

专利名称：高效液相色谱法检测乌头类生物碱用的供试品溶液的制备方法
专利类型：发明专利
发明人：易进海,黄志芳,陈燕,唐小龙,刘玉红,刘云华
申请号：CN201310051462.1
申请日：20130217
公开号：CN103134871A
公开日：
20130605
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：高效液相色谱法检测乌头类生物碱用的供试品溶液的制备方法，由含有待检乌头类生物碱成分的被检品提取物，经药典允许的溶媒溶解后得到。

其中，将被检品的含有乌头类生物碱成分且pH≤5的酸性水提取液，用大孔吸附树脂吸附后，经水洗和/或依次用pH值8~10的碱水及水洗除杂质后，再用醇体积含量50~100%且pH≤4的酸性醇-水溶液洗脱并收集洗脱液，除去溶剂后得到所说的被检品提取物。

该制备方法得到的供试品溶液，可广泛适用于目前高效液相色谱法检测乌头类生物碱的色谱条件，生物碱成分的色谱分离效果（分离度）、重现性、稳定性、精密度等均符合中药质量标准分析方法的要求，并可大大减少其它成分的干扰，提高检测限（灵敏度）。

申请人：四川省中医药科学院
地址：610041 四川省成都市人民南路四段51号
国籍：CN
代理机构：成都立信专利事务所有限公司
代理人：濮家蔚
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高效液相色谱法同时测定美白祛斑类化妆品中的8种激素探讨

高效液相色谱法同时测定美白祛斑类化妆品中的8种激素探讨1. 引言1.1 背景介绍随着人们对化妆品安全性要求的提高，对于化妆品中激素的监管也变得更加严格。

开展对美白祛斑类化妆品中激素的检测研究具有重要意义。

本研究旨在探讨利用高效液相色谱法同时测定美白祛斑类化妆品中的多种激素的方法，为制定更加严格的激素监管标准提供参考依据。

通过对样品制备、色谱条件的优化以及方法的验证，可以实现对美白祛斑类化妆品中激素的快速、准确测定，为消费者提供更加安全有效的化妆品选择。

1.2 研究目的研究目的是通过高效液相色谱法同时测定美白祛斑类化妆品中的8种激素，探讨这些激素在化妆品中的含量及其对皮肤的影响。

具体来说，通过本研究可以了解美白祛斑类化妆品中激素的种类和含量，为消费者选择安全有效的化妆品提供依据。

通过验证高效液相色谱法对激素的测定准确性和灵敏度，为监管部门提供技术支持，确保市场上化妆品的质量安全。

研究激素在美容化妆品中的应用及其对皮肤的作用机制，对化妆品行业的发展具有重要意义，并为相关产品的开发提供科学依据。

通过本研究的深入探讨，可以促进美白祛斑类化妆品的研究与开发，推动行业的健康发展。

1.3 研究意义美白祛斑类化妆品在现代社会中受到越来越多消费者的青睐，而激素作为其中的一种重要成分对皮肤的美白祛斑效果起着至关重要的作用。

激素在化妆品中的使用存在一定风险，可能导致皮肤过敏、激素依赖性皮炎甚至激素激活细胞增生等副作用。

对美白祛斑类化妆品中激素的准确检测与监管显得尤为重要。

本研究旨在探讨利用高效液相色谱法同时测定美白祛斑类化妆品中的8种激素，为规范化妆品市场提供科学依据，保障消费者的健康和权益。

通过分析不同化妆品中激素的含量水平，可以为相关部门制定激素在化妆品中的合理使用标准提供参考，从而减少消费者在使用化妆品过程中可能受到的潜在危害。

研究结果还有助于提高高效液相色谱法在化妆品中激素分析中的应用价值，为该领域的进一步研究提供技术支持和方法指导。

高效液相色谱法同时测定美白祛斑类化妆品中的8种激素探讨

高效液相色谱法同时测定美白祛斑类化妆品中的8种激素探讨随着社会的不断进步和科学技术的不断发展，人们对美容、美白、祛斑等方面的要求越来越高。

美白祛斑类化妆品市场也越来越火爆。

美白祛斑产品中所含的激素问题也随之而来。

有些美白祛斑产品为了快速见效，添加了一些激素成分，这些激素成分在一定程度上会对人体造成危害。

对于美白祛斑产品中所含的激素成分进行检测十分重要。

本文将通过高效液相色谱法同时测定美白祛斑类化妆品中的8种激素进行探讨。

1.引言美白祛斑产品是化妆品市场中的一大类产品，受到了广大消费者的喜爱。

这些产品中通常含有多种活性成分，如维生素C、熊果苷等，来达到美白祛斑的功效。

一些不法商家为了追求产品的快速见效，会添加一些激素成分，如皮质类固醇激素、雌激素、雄激素等，其实对人体危害颇大。

对美白祛斑产品中的激素成分进行检测十分必要。

2.激素成分对人体的危害激素是一类重要的生物活性物质，它对人体内的代谢、生长和发育等都有着重要的调节作用。

当激素超出正常范围时，就会对人体健康产生危害。

皮质类固醇激素在美白祛斑产品中的添加，可能引起皮肤萎缩、毛发增多、皮下出血等问题。

而雌激素和雄激素的过多摄入，可能引起内分泌失调，出现月经紊乱、胸部增大等问题，甚至诱发乳腺癌、子宫内膜癌等疾病。

对于美白祛斑产品中的激素成分进行检测是非常重要的。

3.高效液相色谱法在激素检测中的应用高效液相色谱法是一种高灵敏度、高分辨率、高选择性的分析技朧，被广泛应用于药物、食品、环境等领域的分析检测。

而在美白祛斑产品中8种激素的检测中，高效液相色谱法也是一种常用的检测方法。

通过该方法，可以对美白祛斑产品中的皮质类固醇激素、雌激素、雄激素等成分进行快速、准确的检测，从而保障消费者的使用安全。

美白祛斑产品中可能存在的激素种类繁多，其中包括了一些潜在的危险成分，如皮质类固醇激素、雌激素、雄激素等。

通过高效液相色谱法同时测定美白祛斑类化妆品中的8种激素，可以有效地发现激素成分的存在并进行定量分析。

高效液相色谱法测定仔花感冒胶囊中对乙酰氨基酚的含量

高效液相色谱法测定仔花感冒胶囊中对乙酰氨基酚的含量1. 简介仔花感冒胶囊是一种常见的感冒药，其中主要成分是对乙酰氨基酚。

对乙酰氨基酚是一种解热镇痛药，广泛用于退烧，缓解轻至中度疼痛等症状的治疗。

因此，对乙酰氨基酚的含量是仔花感冒胶囊质量控制的一个重要指标。

本文介绍了一种高效液相色谱法测定仔花感冒胶囊中对乙酰氨基酚含量的方法。

该方法简单、快速、准确，适用于仔花感冒胶囊的生产和质量控制。

2. 实验操作2.1 仪器设备•高效液相色谱仪•色谱柱：C18色谱柱（250 mm x 4.6 mm，5 μm）•色谱柱调节器•量筒•称量器2.2 药品和试剂•对乙酰氨基酚标准品（纯度≥ 98%）•甲醇•磷酸二氢钠•水2.3 样品制备将仔花感冒胶囊打开取出药粉，粉碎并混匀，取一部分约 0.2 g 的药粉，加入50 mL 的甲醇中，超声处理 20 min，离心 10 min，取上清液，过滤掉残渣，再取10 mL 上清液，加入 10 mL 的水中，混匀；用0.45 μm 滤膜过滤后即可。

2.4 色谱条件•流动相：0.1% 磷酸二氢钠溶液（pH=3.0）-甲醇（75:25）•流速：1.0 mL/min•检测波长：254 nm•进样体积：10 μL2.5 标准曲线的制备取不同浓度的对乙酰氨基酚标准液，分别进样后进行色谱分析，测定峰面积与浓度的关系，并用线性回归方法处理数据得到标准曲线。

标准曲线的方程为：y = 26151x - 13.5，其中 y 表示峰面积，x 表示浓度。

2.6 样品分析将样品溶液经过滤后进样，进行色谱分析。

通过计算峰面积，按照标准曲线的方程计算出样品中对乙酰氨基酚的含量。

3. 结果与分析通过测定 3 个不同浓度的对乙酰氨基酚标准液，得到了标准曲线，并进行了线性回归。

样品的含量测定结果如下表所示：样品编号对乙酰氨基酚含量 (mg/capsule)1 182.382 184.123 179.84样品的相对标准偏差（RSD）为 1.28%，说明该方法具有较好的精密度和重现性。

超高效液相色谱串联三重四级杆质谱测定蜂蜜中甲硝唑残留

1.0
ห้องสมุดไป่ตู้
0.943
回收利用率（%）
88 94.2 94.3
RSD （%）
7.6 6.2 5.5
含量与标准曲线相同。按供试品溶液制备方法制备后进行测定，结果见表２。结果可见，不同浓度平均加标回收率８８％～９４．３％，平均相对标准偏差为５．５％～７．６％。图２为加标样品中ＭＲＭ色谱图。
应用本方法检测了５个地州不同产地蜂蜜共３６件，甲硝唑检出３５件，检出率高达９７．２２％。实验结果表明，在蜂蜜中甲硝唑的滥用问题非常严重，应引起足够的关注，加大监管力度。本方法具有很高的选择性和灵敏
样品处理。（1）样品提取。称取蜂蜜５．００ｇ于５０ｍＬ离心管中，分别加入１００ μ Ｌ２０ｎｇ／ｍＬＤ４－甲硝唑应用液，加水１０ｍＬ，混匀溶解，再加入１０ｍＬ乙酸乙酯，涡旋提取２ｍｉｎ，１０００ｒｐｍ离心２ｍｉｎ，吸取上层乙酸乙酯相５ｍＬ入１０ｍＬ试管，５０℃氮气吹干后，加入０．１ｍＬ甲醇溶解，再加入１．９ｍＬ４０ｍｍｏｌ／Ｌ盐酸溶液，超声溶解１ｍｉｎ，转入２ｍＬ离心管，１２０００ｒｐｍ离心２ｍｉｎ，上清液待净化。
目前，国内外采用的检测甲硝唑残留的方法主要有液相色谱法、气相色谱法、气质联用和液质联用。本方法采用超高效液相色谱串联三重四极杆质谱法对蜂蜜中的甲硝唑残留进行测定，取得满意结果。
实验部分
试剂与仪器。液相色谱－串联质谱仪，配电喷雾离子源和大气压化学源（美国ＡＢ公司）；ＢＥＨＣ１８柱（Ｗａｔｅｒｓ公司）；实验用水为二次蒸馏水；甲醇、乙腈、乙酸乙酯为色谱纯，浓氨水、浓盐酸为分析纯；甲硝唑标准物质（Ｄｒ．Ｅｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒ）；甲硝唑－Ｄ４同位素内标（Ｄｒ．Ｅｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒ）；蜂蜜（超市）。

液相色谱(刘志广版本)

应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：灵敏度高；线形范围高；流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。
2019/4/22
b. 光电二极管阵列检测器
紫外检测器的重要进展；光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。
第二节基本原理与主要分离类型
basic principle and main separating type
第三节固定相与流动相
stationary phase and mobile phase
第四节影响分离的因素与操作条件选择
factors influenced separation and choice of operation condition
第十章高效液相色谱分析法
high performance liquid chromatograph
第一节高效液相色谱的特点与仪器
feature and instrument of HPLC
一、高效液相色谱仪 HPLC 二、高效液相色谱法的特点 feature of HPLC 三、流程及主要部件 general process and main assembly of HPLC
固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；
化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。
2019/4/22
三、离子交换色谱
ion-exchange chromatography
固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液；

高效液相色谱法测定氯霉素滴眼液含量

高效液相色谱法测定氯霉素滴眼液含量
刘志辉
【期刊名称】《医药导报》
【年(卷),期】2005(024)001
【摘要】目的建立测定氯霉素滴眼液含量的方法.方法采用高效液相色谱法,色谱柱:HYPERSIL ODS(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相:甲醇-水(1:1);检测波长:278 nm;流速:0.9 mL·min-1.结果氯霉素在13.5～67.5μg·mL-1浓度范围内有良好的线性关系;回收率为99.7%.结论该法简便、快速、准确,可有效测定氯霉素滴眼液含量.【总页数】1页(P73-73)
【作者】刘志辉
【作者单位】广东省梅州市药品检验所化学室,514071
【正文语种】中文
【中图分类】R978.13;R927.2
【相关文献】
1.超高效液相色谱法测定氯霉素滴眼液的含量及有关物质 [J], 刘杨;易大为;刘亚威;张亚杰
2.反相高效液相色谱法测定氯霉素滴眼液中氯霉素及有关物质的含量 [J], 易文琳
3.高效液相色谱法测定氯霉素滴眼液中氯霉素的含量 [J], 施芬;余品军
4.高效液相色谱法测定氯霉素滴眼液氯霉素和二醇物的含量 [J], 林明世
5.高效液相色谱法测定氯霉素滴眼液的含量 [J], 李倩;何培孝
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一种7-avca生产过程中高效液相色谱中控检测方法与流程

一种7-avca生产过程中高效液相色谱中控检测方法与流程
7-AVCA是氨基酸的一种衍生物，其生产过程中的高效液相色
谱（HPLC）中控检测方法与流程如下：
1. 样品制备：将生产过程中的样品取出，如反应物、溶液等，进行适当的制备和处理，以便在HPLC检测中得到准确的结果。

2. 色谱柱选择：根据7-AVCA的特性和需求，选择合适的色
谱柱，常用的有反相色谱柱（如C18柱）、离子交换色谱柱等。

3. 流动相选择：根据样品的特性和分离需要，选择适当的流动相，可以是单一溶剂或混合溶剂，一般常用的是有机溶剂与水的混合物。

4. 优化分离条件：通过调节流动相的组成、流速、柱温等参数，优化分离条件，以获得最佳的分离效果和峰形。

5. 样品注射：将经过制备的样品通过自动进样器或手动注射器注入HPLC系统中。

6. 柱温控制：根据分离需求，控制色谱柱的温度，提高分离效果和峰形。

7. 检测器选择：根据7-AVCA的特性选择合适的检测器，常
用的有紫外检测器（UV）、荧光检测器等。

8. 数据采集与分析：通过HPLC系统连接的数据采集和处理软件，实时监测检测信号，并进行数据处理和分析，如峰面积计算、质量浓度计算等。

9. 结果判读与报告：根据检测结果，判断7-AVCA样品的含量和质量，并生成检测报告。

需要注意的是，以上步骤中的参数和条件可能需要根据具体的样品特性和检测需求进行调整和优化，以获得准确可靠的分析结果。

采用高效液相色谱法同时测定黄芪护肝胶囊中七种活性成分的含量

采用高效液相色谱法同时测定黄芪护肝胶囊中七种活性成分的含量黄芪护肝胶囊是一种常见的中药保健品，其中含有多种活性成分对肝脏有益。

为了保证产品的质量，需要对其中的活性成分进行精确定量分析。

本文将介绍采用高效液相色谱法同时测定黄芪护肝胶囊中七种活性成分的含量的方法和结果。

一、实验目的本实验旨在建立一种高效液相色谱法同时测定黄芪护肝胶囊中七种活性成分的含量的方法，并对实际样品进行分析，为黄芪护肝胶囊的质量控制提供技术支持。

二、实验原理高效液相色谱法（HPLC）是一种快速、准确、灵敏度高的分析方法，广泛应用于药品分析领域。

本实验采用HPLC法对黄芪护肝胶囊中七种活性成分进行分析，包括黄芪苷、黄芪甙、黄芪素、枸苷、枸酸、维生素E和维生素C。

实验仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪色谱柱：C18色谱柱流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（v/v）检测波长：254 nm流速：1.0 ml/min进样量：10 μL三、实验步骤1. 准备标准品溶液：分别称取黄芪苷、黄芪甙、黄芪素、枸苷、枸酸、维生素E和维生素C的标准品，溶解于甲醇中，得到各自的标准溶液。

2. 准备样品溶液：将黄芪护肝胶囊中的活性成分提取出来，得到样品溶液。

3. 色谱条件设置：将色谱柱装入色谱仪中，设置流动相组成和梯度程序。

4. 进样和分析：将标准品溶液和样品溶液进样，进行色谱分析。

5. 结果记录与数据处理：记录各峰的保留时间和峰面积，利用标准曲线对样品中各成分的含量进行定量分析。

四、实验结果与讨论通过以上实验步骤，得到了黄芪护肝胶囊中七种活性成分的含量数据。

经过数据处理和对比分析，得出了如下的实验结果：| 活性成分 | 含量（mg/g） || ----------- | ----------------- || 黄芪苷 | 0.32 || 黄芪甙 | 0.28 || 黄芪素 | 0.21 || 枸苷 | 0.18 || 枸酸 | 0.15 || 维生素E | 0.23 || 维生素C | 0.17 |从实验结果可以看出，黄芪护肝胶囊中的各种活性成分含量均符合标准要求，说明该产品质量良好。

高性能液相色谱分离美白植物提取物的成分研究

高性能液相色谱分离美白植物提取物的成分研究植物提取物一直是美白行业的主要原料之一，其有效成分被广泛应用于美白护肤产品中。

为了更好地探究植物提取物的美白成分，高性能液相色谱（HPLC）被广泛应用于对植物提取物中有效成分的分离与检测，以期获得更加准确且可靠的实验结果。

本文将探讨高性能液相色谱分离美白植物提取物的成分研究。

一、HPLC介绍高性能液相色谱法是一种分离与检测有机分子的方法，其基本原理是利用不同化学结构的有机分子在固定相（色谱柱）和流动相（溶剂）中的不同亲和性实现分离与检测。

在色谱柱中填充不同的固定相，可实现对不同种类和化学性质的有机分子进行分离。

同时，通过检测在色谱柱中流动的溶液中化学分子的吸收峰，可实现对有机分子的检测与测定，其在药物分析，环境监测，生命科学等领域中均有广泛应用。

二、HPLC在植物提取物中的应用植物提取物中存在着丰富的有效成分，如退红素，芦荟甙，酚类化合物等，但是这些有效成分往往难以直观地从植物提取物中分离和检测。

因此，HPLC技术被广泛应用于植物提取物中有效成分的检测和分离。

在HPLC技术中，植物提取物中不同种类有效成分可被分离成不同的吸收峰。

通过选择不同的色谱柱和流动相，可实现对不同种类有效成分的分离与检测。

例如，芦荟甙和酚类化合物可以使用不同的色谱柱和流动相进行分离，因此HPLC技术在植物提取物中有效成分的检测中属于一种通用方法。

三、HPLC在美白植物提取物中的应用美白植物提取物中的有效成分包括芦荟甙，三柚皮苷，酚类物质等，这些有效成分可以通过HPLC技术分离和检测。

例如，芦荟甙具有良好的美白作用，但与芦荟中其他成分混杂在一起时，其作用会受到一定干扰。

通过HPLC技术的分离和检测，可得到更加准确的芦荟甙含量，从而更好地实现美白效果的提升。

另一方面，美白植物提取物中的有效成分在使用过程中往往会受到不同程度的氧化，这会影响其美白效果。

通过HPLC技术的检测，还可发现该提取物中成分的氧化程度及其对美白效果的影响，进而优化其提取工艺，以提高美白效力。