真核细胞rna提取的实验报告范文
实验二 RNA提取
实验二小量法提取植物总RNA1 实验目的：通过本实验的学习，了解植物RNA的提取方法，原理；掌握分子生物学实验的基本方法。
2 材料青蒿叶片3 试剂：裂解液RL,去蛋白液RW1,漂洗液RW，RNase-free ddH2O,DnaseI，缓冲液RDD4 仪器设备离心机、离心管、紫外分光光度计、微量移液器、枪头、冰箱、电子天平、高压灭菌锅、一次性手套、电泳仪等。
4.1 实验用的枪头，离心管，PCR管子，以及用于临时盛放Buffer的瓶子均用0.1% DEPC水泡过夜，然后灭菌两次，80℃烘干。
4.2 实验用的镊子，药匙，研钵，高压灭菌（121 ℃，20 min）两次。
5 方法与步骤：5.1 RNA提取1. 匀浆处理:50-100 mg植物叶片在液氮中迅速研磨成粉末，加入550 ul裂解液RL(检查是否已加入巯基乙醇)，涡旋剧烈震荡混匀。
2. 9800 rpm离心5 min，吸取450 ul转移至过滤柱CS（黄色）上，CS放在收集管中，12000 rpm离心5分钟，小心吸取收集管中的上清400 ul至RNase-free的离心管中，吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。
（注意：由于裂解液较粘稠，所以要剪去部分吸头末端）3. 缓慢加入0.5倍上清体积的无水乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀），将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3（无色透明）中，12000 rpm离心1 min，倒掉收集管中的废液，将收集柱CR3放回收集管中。
4. 向吸附柱CR3中加入350 ul 去蛋白液RW1，静置几分钟，12000rpm 离心1 min ，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
5. DNase1工作液的配制：取10ulDNase1储存液放入新的RNase-free 离心管中，加入70ulRDD 溶液，轻柔混匀。
6. 向吸附柱CR3中央加入80 ul 的DNase1工作液，室温静置15分钟。
7. 向吸附柱CR3中加入350 ul 去蛋白液RW1， 12000 rpm 离心1 min ，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
真核细胞rna提取的实验报告范文3篇
真核细胞rna提取的实验报告范文3篇An experimental report on RNA extraction from eukary otic cells真核细胞rna提取的实验报告范文3篇小泰温馨提示：实验报告是把实验的目的、方法、过程、结果等记录下来，经过整理，写成的书面汇报。
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本文简要目录如下：【下载该文档后使用Word打开，按住键盘Ctrl键且鼠标单击目录内容即可跳转到对应篇章】1、篇章1：真核细胞RNA的提取文档2、篇章2：真核细胞RNA的提取文档3、篇章3：真核细胞rna提取文档篇章1:真核细胞RNA的提取文档一．原理本方法利用盐酸胍抑制RNA酶，匀浆裂解细胞，采用有机溶剂抽提去除蛋白质。
通过选择性沉淀RNA分子去除DNA。
二．方法⑴组织样品处理：取新鲜的组织样品称重后，剪碎成约1cm2的组织块直接加入匀浆液中进行RNA提取，或液氮中速冻-70℃保存。
⑵贴壁培养细胞处理：用PBS洗细胞一次，吸干溶液后将培养板快速移至液氮中冷冻后转到-70℃保存；或加入1ml匀浆至培养板中直接裂解细胞，然后将粘稠的裂解液进一步匀浆。
⑶悬浮培养细胞处理：离心收集细胞，用PHS悬浮漂洗再田心收集，若不立即提取RNA，则可经液氮速冻后转至一70℃贮存备用。
2．加l倍体积盐酸胍匀浆液[至准备好的样品细胞中，高速匀浆1min。
3．匀浆液5000g，室温离心10min。
4．将上清移至一个干净离心管中，加入0.1体积的3mol ／L乙酸钠（PH5.2），混匀，再加5体积预冷的乙醇，立即充分混匀，-20℃放置至少2小时。
5．5000g 0℃离心10分钟沉淀核酸，弃上清液，室温干燥。
6、每个提取RNA的组织或细胞样品中，加入l0～15min盐酸胍匀浆液Ⅱ，搅拌溶解。
7．加入2.5体积预冷的乙醇，立即充分混匀，-20℃至少放置2小时。
总rna提取实验报告
总rna提取实验报告总RNA提取实验报告一、引言RNA是一种重要的核酸分子，它在细胞中起着传递和转录遗传信息的重要作用。
总RNA提取是分子生物学研究中常用的实验技术，它能够从细胞中提取出所有的RNA，包括mRNA、tRNA和rRNA等。
本实验旨在通过总RNA提取技术，获取细胞中的RNA样品，为后续的RNA分析提供基础。
二、材料与方法1. 实验材料：- 细胞样品：本实验使用细胞系A作为研究对象。
- 细胞裂解缓冲液：含有细胞裂解酶和蛋白酶抑制剂等。
- 乙酰酸酚/氯仿溶液：用于提取总RNA。
- 无水乙醇：用于沉淀RNA。
- TE缓冲液：用于溶解RNA沉淀物。
- RNase-free水：用于制备实验液。
2. 实验步骤：（1）细胞采集与裂解：将培养好的细胞收集到离心管中，加入适量的细胞裂解缓冲液，轻轻摇晃使细胞均匀裂解。
（2）总RNA提取：将细胞裂解液与乙酸酚/氯仿溶液按比例混合，离心分离上清液和有机相，收集上清液。
（3）沉淀RNA：向上清液中加入等体积的无水乙醇，轻轻倒置混匀，沉淀RNA。
（4）洗涤：用70%乙醇洗涤RNA沉淀物，去除杂质。
（5）溶解：用RNase-free水溶解RNA沉淀物，得到总RNA样品。
三、结果与讨论通过上述实验步骤，成功地从细胞系A中提取到了总RNA样品。
提取后的总RNA样品呈现出明亮的透明溶液，没有明显的沉淀或杂质。
为了验证提取的总RNA质量和纯度，我们使用了紫外吸收光谱法进行测定。
根据测定结果，我们发现总RNA样品的吸光度比例A260/A280为1.8，符合理想的RNA纯度范围（1.8-2.0）。
这表明我们所提取的总RNA样品中没有明显的蛋白质、核酸污染。
同时，我们还进行了琼脂糖凝胶电泳分析，观察到总RNA 样品在琼脂糖凝胶上呈现出清晰的17S和28S两个带状条带，证明我们提取的总RNA完整且无降解。
总RNA提取实验是RNA研究的基础，成功地提取到高质量的总RNA样品对后续的实验具有重要意义。
酵母RNA的提取实验报告
酵母RNA的提取实验报告实验报告：酵母RNA的提取一、实验目的1.学习和掌握酵母RNA的提取基本原理和方法。
2.了解RNA在生物体内的生物功能及其重要性。
3.培养实验技巧和操作能力，提高实验素养。
二、实验原理RNA（核糖核酸）是生物体内的重要生物分子之一，它参与蛋白质合成、基因表达等重要生命活动。
酵母是一种常用的真核生物模型，其RNA提取方法与人体、植物等真核生物类似。
本实验采用氯仿-异戊醇法提取酵母RNA。
主要步骤包括细胞破碎、离心分离、有机溶剂抽提、乙醇沉淀等。
三、实验步骤1.准备试剂和器材（1）试剂：氯仿、异戊醇、无水乙醇、DEPC水、RNA酶。
（2）器材：研钵、离心管、移液器、玻璃棒、氮气吹干器、分光光度计等。
2.酵母细胞破碎（1）在冰上用研钵将酵母细胞研磨成粉末。
（2）加入适量DEPC水，搅拌均匀。
（3）用玻璃棒将细胞碎片挑出，弃去上清液。
（4）加入适量DEPC水，搅拌均匀，重复上述步骤，直到细胞完全破碎。
3.离心分离（1）将破碎的酵母细胞溶液转移到离心管中。
（2）在4℃下，以12000rpm的转速离心15分钟。
4.有机溶剂抽提（1）用移液器将上清液小心地转移到另一个离心管中。
（2）加入等体积的氯仿-异戊醇混合液（氯仿：异戊醇=24：1），用玻璃棒搅拌均匀。
（3）在4℃下，以12000rpm的转速离心15分钟。
5.乙醇沉淀（1）将上清液转移到新的离心管中，并加入等体积的无水乙醇，用玻璃棒搅拌均匀。
（2）在4℃下，以12000rpm的转速离心15分钟。
6.洗涤和干燥（1）用移液器小心地将上清液吸出，留下沉淀物。
（2）加入适量75%乙醇，用玻璃棒搅拌均匀，去除残留的乙醇和水分。
（3）在氮气吹干器下将沉淀物吹干约5分钟。
7.RNA溶解与定量（1）加入适量DEPC水，将沉淀物溶解。
（2）用分光光度计测定RNA溶液的吸光度值（A260nm），计算RNA浓度。
四、实验结果与分析表1：酵母RNA提取结果本实验通过氯仿-异戊醇法成功地提取出了高浓度的酵母RNA。
植物总rna的提取实验报告（共4篇）
植物总rna的提取实验报告(共4篇) 植物总RNA的提取实验植物总RNA 的提取RNA 的制备与分析对于了解基因在转录水平上的表达与调节和cDNA 的合成都是必须的，RNA 的纯度和完整性对于Northern blot，RT-PCR 和cDNA 文库的构建等分子生物学实验都至关重要。
RNA 分离的方法很多，最关键的因素是尽量减少RNA 酶的污染。
本实验采用异硫氰酸胍(GTC)和β-巯基乙醇等抑制RNA 酶利用GTC 和N-十二烷基肌氨酸钠将促使核蛋白复合体解离，使RNA 与蛋白质分离,并将RNA 释放到溶液中, 用乙醇沉淀方法分离RNA。
本实验从番茄幼苗中提取总RNA 的提取，掌握Trizol 提取的方法和步骤。
一材料与方法1. 植物组织设备番茄（Lycopersiconesculentum）幼苗为材料，利用移液器，冷冻高速离心机，低温冰箱，台式高速离心机，液氮罐，陶瓷研钵，1.5ml 离心管等设备。
2. 试剂本实验中所有试剂均用无RNA 酶灭菌水，用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃ 2 小时）装蒸馏水，然后加入0.01%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌而得到。
75%乙醇，氯仿:异戊醇(24 : 1 by volume) 或氯仿，异丙醇、无水乙醇、70％乙醇，Trizol 试剂等试剂由分子生物学实验室提供。
3. 实验方法1. 50-100mg 组织在液N 中磨成粉末后，加入1ml Trizol 液，注意样品总体积不能超过所用Trizol 体积的10%。
2. 研磨液室温放置5 分钟，然后以每1mlTrizol 液加入0.2ml 的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15 秒。
3. 取上层水相于一新的离心管，加入等体积异丙醇，室温放置10 分钟，10000r/min 离心10 分钟。
4.弃去上清液，按每ml Trizol 液加入至少1ml 的比例加入70%乙醇，涡旋混匀，4℃下10000r/min 离心5 分钟。
rna的鉴定实验报告
rna的鉴定实验报告RNA的鉴定实验报告引言：RNA（核糖核酸）是一种重要的生物分子，它在细胞内起着传递遗传信息和蛋白质合成的关键作用。
为了深入了解RNA的结构和功能，本实验旨在通过一系列鉴定实验，对RNA进行详细的分析和研究。
实验一：RNA的提取与纯化首先，我们从细菌或植物细胞中提取RNA。
这一步骤的关键是使用合适的缓冲液和酶来破坏细胞膜和核膜，释放出RNA。
随后，通过离心等手段，将RNA从其他细胞组分中分离出来。
最后，通过酒精沉淀法将RNA纯化，去除杂质。
实验二：RNA的电泳分析为了确定提取到的RNA的纯度和完整性，我们进行了RNA的电泳分析。
首先，将RNA样品与一定浓度的缓冲液混合，然后将混合物加载到琼脂糖凝胶上。
随后，通过电场作用，RNA在琼脂糖凝胶中移动，根据RNA分子量的不同，形成不同的条带。
最后，通过紫外光照射，观察和记录RNA的分离情况。
实验三：RNA的逆转录与扩增为了进一步研究RNA的表达情况，我们进行了RNA的逆转录与扩增实验。
逆转录是将RNA转化为DNA的过程，通过引入逆转录酶和适当的引物，将RNA的信息转录成相应的DNA序列。
随后，通过PCR（聚合酶链式反应）扩增DNA，使其数量增加，以便进行下一步的分析和研究。
实验四：RNA的序列测定为了确定RNA的具体序列，我们进行了RNA的序列测定实验。
通过使用高通量测序技术，我们能够快速、准确地测定RNA的碱基序列。
这一步骤的关键是将RNA转化为cDNA，并引入特定的DNA引物，然后通过测序仪对DNA进行测序。
最终，我们可以得到RNA的详细序列信息。
实验五：RNA的功能研究在了解RNA的序列后，我们进行了RNA的功能研究。
通过生物信息学分析和实验验证，我们可以确定RNA的功能和作用机制。
例如，我们可以通过敲除实验来验证某个RNA在细胞中的功能，或者通过RNA干扰技术来研究RNA对基因表达的调控作用。
结论：通过一系列的实验，我们对RNA进行了全面的鉴定和研究。
实验报告真核细胞rna提取的实验报告范文_0114
2020实验报告真核细胞rna提取的实验报告范文_0114EDUCATION WORD实验报告真核细胞rna提取的实验报告范文_0114前言语料：温馨提醒，教育，就是实现上述社会功能的最重要的一个独立出来的过程。
其目的，就是把之前无数个人有价值的观察、体验、思考中的精华，以浓缩、系统化、易于理解记忆掌握的方式，传递给当下的无数个人，让个人从中获益，丰富自己的人生体验，也支撑整个社会的运作和发展。
本文内容如下：【下载该文档后使用Word打开】1．盐酸胍匀浆液Ⅰ成分：8mol／L盐酸胍(分子量为95.6)，O．1mol／L乙酸钠(pH5．2)，5mmol／L2―巯基乙醇，0.5％十二烷基肌氨酸钠配制方法：取191g盐酸胍．加8.35m13mol／L乙酸钠(pH5．2)和6．25ml0．2mol／L2―琉基乙醇溶液中，再加水至237．5ml，混匀后加12．5ml10％十二烷基肌氨酸钠,振荡混匀溶解。
2．盐酸胍匀浆液Ⅱ成分：8mol／L盐酸胍(分子量力95.6),0.1mol／L乙酸钠(pH5．2),1mmol／L2―琉基乙醇，20mmol／LEDTA(pH8.0)配制方法：取191g盐酸胍，加日．35ml3mol／I。
乙酸钠(pH5．2)和1．25ml0．2mol／L2―巯基乙醇溶液中，再加入10ml0.5mol／LEDTA(pH8.0)。
加水至250ml混匀。
3.乙醇4.70％乙醇5.氯仿―正丁醇(4：l，体积比)6.4mol／L乙醇钠，pH7.07.3mol／L乙醇钠，pH5.28.RNA溶解液成分：O．2％SDS．0.05mol／LEDTA,pH8.0提取RNA时，要特别注意防止RNase的污染，所用玻璃器皿均应用0.1％的二乙基焦碳酸盐(diethylpyrocarbonate，DEPC)处理。
塑料器材均使用一次性用品，并高压灭菌处理，必要时，也可用0.1%DEPC处理。
RNA是基因表达产物，由以下几类分子组成，rRNA（占细胞总RNA的80%～85%）、tRNA和核内小分子RNA（占10～15%）、mRNA（占1～5%）。
实验一RNA提取方法及原理
实验一RNA提取方法及原理RNA提取是从生物样本中提取RNA分子的一系列操作过程，其中包括细胞破碎、RNA与其他分子的分离和纯化。
RNA提取可用于研究基因表达、编码RNA功能等生物学研究领域。
一、RNA提取方法1.直接方法直接法是一种快速且简单的RNA提取方法，适用于较小的样本。
该方法不需要扩增RNA，并且避免了DNA污染。
主要步骤包括细胞破碎、蛋白质沉淀、RNA沉淀和洗涤。
直接方法可用于提取总RNA或其中一种特定类型的RNA（如mRNA）。
2.两步法两步法是RNA提取的常用方法之一，适用于大多数样本。
首先使用各种方法破碎细胞，使RNA释放出来。
然后通过蛋白质沉淀、RNA沉淀和洗涤来纯化RNA。
两步法具有更好的RNA纯度和更高的产量。
3.树脂结合法树脂结合法是一种通过RNA与树脂结合来纯化RNA的方法。
树脂有很强的亲和力，可以选择性地结合RNA。
树脂结合法适用于小样本量或从混合样本中纯化特定RNA的情况。
4.直接PCR法直接PCR法是一种将RNA直接用于PCR扩增的方法。
它通过添加DNA合成酶和逆转录酶，将RNA转录成cDNA，并立即进行PCR扩增。
二、RNA提取原理RNA提取的原理是利用物理和化学方法破坏细胞膜，使RNA释放出来，然后通过沉淀和洗涤来纯化RNA。
细胞破碎：细胞破碎的方法有多种选择，包括机械破碎、酶解和化学破碎等。
机械破碎可通过震荡或高压细胞破碎仪实现。
酶解法是利用酶消化细胞膜，促进RNA的释放。
化学破碎是利用化学物质，如氯仿、酚和乙酸酐等。
蛋白质沉淀：加入蛋白质沉淀剂（如酒精或异丙醇）可使蛋白质沉淀而RNA在上清液中。
RNA沉淀：加入RNA沉淀剂，通过离心将RNA从上清液中沉淀下来。
RNA沉淀后，上清液中的DNA和蛋白质会被除去。
洗涤：通过加入酒精或异丙醇溶液洗涤RNA，除去残留的污染物，如盐和酚。
在RNA提取过程中，需要注意一些关键点，以确保提取到高质量的RNA。
例如，实验过程中需注意酶和核酸酶的污染，使用无核酸酶的试剂和工具。
提取rna的实验报告
提取rna的实验报告1. 引言RNA（核糖核酸）是一种重要的生物分子，具有多种功能，如转录、翻译和调控基因表达等。
提取RNA是进行RNA研究的基础和关键步骤之一。
本实验旨在演示提取RNA的方法和步骤，并分析实验结果。
2. 材料与方法2.1 实验材料- 细胞样品：选取适当数量的细胞样品，如细菌、植物或动物细胞。
- 细胞裂解缓冲液：用于破坏细胞膜和核膜，释放RNA。
- 高盐溶液：用于沉淀细胞核和细胞膜碎片。
- 异硫氰酸酯/Lysis Buffer：用于裂解细胞，并保护RNA不被降解。
- 高盐洗涤缓冲液：用于去除DNA、蛋白质和其他污染物。
- 乙酰酚/醇：用于沉淀RNA。
- 乙醇：用于洗涤和纯化RNA。
- RNA稳定性缓冲液：用于保护RNA不被降解。
- RNase-free水：用于溶解和稀释实验材料。
2.2 实验步骤1. 收集细胞样品并转移到离心管中。
2. 加入适量的细胞裂解缓冲液，并进行充分混合。
3. 用离心机在高速旋转下离心细胞样品，使细胞膜和核膜碎片沉淀到底部。
4. 将上清液转移到新的离心管中。
5. 加入异硫氰酸酯/Lysis Buffer并进行充分混合，裂解细胞，并保护RNA不受降解。
6. 用离心机在高速旋转下离心样品，使细胞核和细胞膜碎片沉淀到底部。
7. 将上清液转移到新的离心管中，并加入高盐洗涤缓冲液。
8. 用离心机在高速旋转下离心样品，使杂质沉淀到底部。
9. 转移上清液至新的离心管中，并加入乙酸酚/醇，使RNA沉淀。
10. 用离心机在高速旋转下离心样品，将RNA沉淀到底部。
11. 弃去上清液，加入乙醇洗涤和纯化RNA。
12. 将RNA溶解于RNase-free水中，并在-80C储存RNA。
3. 结果与分析3.1 RNA浓度的测定使用分光光度计测定提取到的RNA的浓度，并计算所提取到的RNA的总量。
在本实验中，我们得到了细胞样品中的RNA浓度为50 ng/μl，总体提取量为200 μg。
3.2 RNA质量的评估通过琼脂糖凝胶电泳分析RNA样品的完整性和纯度。
rna提取实验报告
rna提取实验报告RNA提取实验报告引言：RNA（核糖核酸）是生物体内一种重要的核酸分子，具有多种功能，如转录、翻译和调控基因表达等。
在生物学研究中，提取RNA是进行基因表达分析和其他分子生物学实验的重要步骤之一。
本实验旨在通过提取RNA，探究其在基因研究中的应用。
材料与方法：1. 细胞样本：选择适当的细胞样本，如细菌、真菌、植物或动物细胞。
2. 细胞破碎：使用细胞破碎缓冲液将细胞破碎，并释放RNA分子。
3. 酚酸提取：将破碎后的细胞溶液与酚酸混合，形成有机相和水相分离的体系，RNA分子在有机相中富集。
4. 氯仿提取：将有机相与氯仿混合，进一步分离RNA分子。
5. 乙醇沉淀：通过加入乙醇，使RNA分子在乙醇中沉淀下来。
6. 洗涤：用75%的乙醇洗涤RNA沉淀，去除杂质。
7. 干燥：将洗涤后的RNA沉淀在室温下干燥。
结果与讨论：通过上述实验步骤，我们成功地从细胞样本中提取到RNA。
提取得到的RNA样品呈现为无色透明的溶液。
为了验证RNA的纯度和完整性，我们使用紫外吸收光谱进行检测。
结果显示，RNA样品在260 nm处具有明显的吸光峰，而在280 nm处的吸光较低，表明RNA的纯度较高，没有明显的蛋白质污染。
进一步，我们使用琼脂糖凝胶电泳分析RNA样品的完整性。
通过电泳，我们观察到RNA样品在琼脂糖凝胶上呈现为明亮的带状条带，表明RNA分子完整且没有明显的降解。
此外，我们还与分子量标准进行比较，确定了RNA样品的分子量范围。
RNA提取的成功为后续的实验提供了基础。
通过提取到的RNA，我们可以进行进一步的研究，如基因表达分析、RT-PCR、cDNA合成等。
RNA的提取是基因研究中不可或缺的步骤，其质量和纯度对后续实验结果具有重要影响。
然而，在RNA提取过程中也存在一些挑战和注意事项。
首先，细胞样本的选择和处理对RNA的提取至关重要。
不同细胞类型和处理方法可能会对RNA的产量和质量产生影响。
其次，实验操作中的严格无菌操作和RNA酶的严格防护是确保RNA提取成功的关键。
实验报告真核细胞rna提取的实验报告范文_0863
2020实验报告真核细胞rna提取的实验报告范文_0863EDUCATION WORD实验报告真核细胞rna提取的实验报告范文_0863前言语料：温馨提醒，教育，就是实现上述社会功能的最重要的一个独立出来的过程。
其目的，就是把之前无数个人有价值的观察、体验、思考中的精华，以浓缩、系统化、易于理解记忆掌握的方式，传递给当下的无数个人，让个人从中获益，丰富自己的人生体验，也支撑整个社会的运作和发展。
本文内容如下：【下载该文档后使用Word打开】1.甲基绿―吡罗红染料：①染色剂A液的两种配制方法第一种方法：取吡罗红甲基绿粉1g，加入到100mL蒸馏水中溶解，然后用滤纸过滤，将滤液放入棕色瓶中备用。
第二种方法：取甲基绿2g溶于98mL蒸馏水中，取吡罗红G5g溶于95mL蒸馏水中。
取6mL甲基绿溶液和2mL吡罗红溶液加入到16mL蒸馏水中，即为A液，放入棕色瓶中备用。
（注意：用于核酸染色的是吡罗红G，请不要错买吡罗红B。
）②染色剂B液的配制方法B液是一种缓冲液，由乙酸钠和乙酸混合而成。
先取乙酸钠16.4g，用蒸馏水溶解至1000mL备用；再取乙酸12mL，用蒸馏水稀释至1000mL备用。
取配好的乙酸钠溶液30mL和稀释的乙酸20mL，加蒸馏水50mL，配成pH为4.8的B 液（缓冲液）。
③染色剂的配制染色剂是由A液、B液混合配制而成的。
取A液20mL和B液80mL混合，就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂。
应该注意的是该试剂应现配现用。
2.TRIZOL试剂（Invitrogen公司购买）3.75%乙醇4.氯仿5.异丙醇6.Nacl(0.14m/l)（二）器材1.离心机（3000r.p.m）2.冰浴3．研钵4.烧杯5.量筒6.试管7.玻棒8.胶头滴管99.离心管10.天平以班级为单位，称取大概10g蟾蜍卵细胞（2~3℃保存），于研钵（可置于冰浴锅上）中，根据10~30mg组织细胞加1mltrizol 试剂的量加入其中，快速研磨，制备匀浆。
关于生物技术综合实验报告
关于生物技术综合实验报告生物技术综合实验甘薯γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因的克隆和原核表达学生：学号：同实验者：谷胱甘肽(glutathione, GSH) GSH具有多种重要生理功能, 抗自由基和抗氧化应激作用, 爱惜细胞膜的完整性等。
γ-GCS是植物细胞中GSH生物合成的限速酶, 能够调控GSH的生物合成量。
GSH在生物体抵御冷害、干旱、重金属、真菌等胁迫进程中起着重要作用, 说明γ-GCS也与植物抗逆进程紧密相关。
实验一甘薯叶片RNA提取一、实验目的1. 了解真核生物RNA提取的原理；2. 把握Trizol提取的方式和步骤。
二、实验原理Trizol 试剂是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速抽提总RNA的试剂，在匀浆和裂解进程中，能在破碎细胞、降解细胞其它成份的同时维持RNA的完整性。
TRIzol 的要紧成份是苯酚。
苯酚的要紧作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚取得释放。
苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase。
%的8－羟基喹啉能够抑制RNase，与氯仿联合利用可增强抑制作用。
异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，致使细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。
β-巯基乙醇的要紧作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。
在氯仿抽提、离心分离后，RNA处于水相中，将水相转管后用异丙醇沉淀RNA。
用这种方式取得的总RNA中蛋白质和DNA污染很少。
三、实验材料1. 材料甘薯叶片，品种为徐薯182. 试剂①无RNA酶灭菌水：加入%的DEPC，处置留宿后高压灭菌；②Trizol试剂；③氯仿；④异丙醇、75％乙醇；⑤TBE缓冲液；⑥上样缓冲液3. 仪器高压灭菌锅、微量移液器、台式离心机、超净工作台、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、塑料离心管、枪头和EP 管架四、实验方式1. 将叶片掏出放入研钵中，加入适量液氮，迅速研磨成粉末，每50-100 mg植物叶片加入1 mL Trizol试剂，室温放置5 min，使样品充割裂解；2. 每1 mL Trizol试剂加入200 μL氯仿，用手猛烈振荡混匀后室温放置3-5 min使其自然分相；3. 4℃12,000 rpm 离心15 min，吸取上层水相转移到新管中；在上清中加入等体积冰凉的异丙醇，室温放置15 min；4. 4℃12,000 rpm 离心10 min，弃上清，RNA沉淀于管底；5. RNA沉淀中加入1 mL 75%的乙醇，温和震荡离心管，悬浮沉淀；4℃8,000 rpm离心2 min，弃上清；6. 室温放置10 min晾干沉淀；7. 沉淀中加入20μL RNase-free ddH2O，轻弹管壁，以充分溶解RNA，-70℃保留；8. 用1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测，用EB染色并照相。
真核细胞RNA的提取及电泳分析
实验原理
当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，离心后形 成水相层和有机相层。RNA位于水相，而DNA和蛋白 质位于分界层和有机相。 水相中RNA在高盐和有机溶剂共存时沉淀分离。 提取的RNA可用于Northern杂交、mRNA分离、 cDNA合成、RT-PCR。
实验试剂
RNAiso Blood 氯仿 异丙醇 75%乙醇（DEPC处理水配制） RNase-free水
rnaisoblood氯仿异丙醇75乙醇depc处理水配制rnasefree水rnase核糖核酸内切酶生物特性十分稳定耐热耐酸耐碱作用不需辅助因子存在十分广泛本实验的关键是创造一个无rnase的环境减少rna的降解
真核细胞RNA的提取及电泳分析
优选真核细胞RNA的提取及 电泳分析
实验目的
掌握一种真核细胞RNA的提取方法 熟悉RNA的琼脂糖凝胶电泳检测分析
主要仪器
微量移液器 台式微量离心机 凝胶成像系统
电泳仪
电泳槽
实验步骤
1. 取0.25 ml血液样品移至离心管中，添加 0.75 ml RNAiso Blood。 2. 用移液枪上下反复吸打直至细胞完全裂解。 3. 加入 0.2 ml氯仿，混匀至溶液呈乳白色。 4. 室温静置 5 分钟。 5. 12,000×g、4℃离心 15 分钟。 6. 吸取上清液移至新的离心管中（切勿吸出白色中间层）。 7. 向上清中加入等量体积的异丙醇，上下颠倒混匀后，室温下静置 10 分钟。 8. 12,000×g、4℃离心 10 分钟，试管底部会出现 RNA 沉淀。 9. 弃上清,加入等量的 75％乙醇，振荡清洗沉淀后，7,500×g、4℃ 离心 5 分钟，弃上清。 10.室温干燥沉淀2~3分钟，加入30 µl RNase-free 水溶解沉淀。 11.取5 µl电泳检测，剩余-70℃保存。
RNA提取一般步骤总结范文
RNA提取一般步骤总结范文|通过变性剂破碎细胞或者组织，然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA，再经过沉淀，洗涤，晾干，最后溶解。
但是由于RNA酶无处不在，随时可能将RNA降解，所以实验中有很多地方需要注意，稍有疏忽就会前功尽弃。
RNA提取的一般步骤所有RNA的提取过程中都有五个关键点，即：样品细胞或组织的有效破碎；有效地使核蛋白复合体变性；对内源RNA酶的有效抑制；有效地将RNA从DNA和蛋白混合物中分离；对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去。
但其中最关键的是抑制RNA酶活性。
RNA的提取目前阶段主要可采用两种途径:提取总核酸，再用氯化锂将RNA沉淀出来；直接在酸性条件下抽提，酸性下DNA与蛋白质进入有机相而RNA留在水相。
第一种提取方法将导致小分子量RNA的丢失，目前该方法的使用频率已很低。
实验步骤：破碎组织→分离RNA→沉淀RNA→洗涤RNA→融解RNA→保存RNA。
1、破碎组织和灭活RNA酶可以同步进行，可以用盐酸胍、硫氰酸胍、NP-40、SDS、蛋白酶K等破碎组织，加入β-ME可以抑制RNA酶活性。
2、分离RNA一般用酚、氯仿等有机溶剂，加入少量异戊醇，经过此步，离心，RNA一般分布于上层，与蛋白层分开。
3、沉淀RNA一般用乙醇、3MNaAc（pH-5.2）或异丙醇。
4、洗涤RNA使用70％乙醇洗涤，有时，为避免RNA被洗掉，此步可以省掉，洗涤之后可以晾干或者烤干乙醇，但是不能过于干燥，否则不易溶解。
5、融解RNA一般使用TE。
本方法用高浓度尿素变性蛋白并抑制RNA酶，用氯化锂选择沉淀RNA，其特别适合于从大量样品中提取少量组织RNA，具有快速简洁的长处，但也存在少量DNA的污染及RNA得率不高,小RNA片断丢失的缺陷。
试验试剂：1、氯化锂/尿素溶液【氯化锂126g(3M)尿素、360g(6M)加水至1L，过滤灭菌】2、悬浮液【10mMTri-HCL(pH7.6),1mMEDTA(pH8,0),0.5%SDS】试验步骤：1、对于大量组织或细胞，则每克组织或细胞加入5－10ml氯化锂－尿素溶液，匀桨器高速匀桨2分钟；对于少量细胞（107个细胞/ml），则每克组织或细胞加入0.5ml氯化锂－尿素溶液手工匀桨，并转移至Eppendof管中。
真核细胞的实验报告
一、实验目的1. 掌握真核细胞RNA提取的原理和方法。
2. 学习使用实验器材，提高实验操作技能。
3. 了解RNA在生物学研究中的应用。
二、实验原理真核细胞中的RNA主要分为mRNA、rRNA和tRNA三种。
mRNA是蛋白质合成的模板，rRNA是核糖体的组成成分，tRNA是氨基酸的载体。
提取真核细胞RNA的方法有酸法、酚-氯仿法和试剂盒法等。
本实验采用酚-氯仿法提取真核细胞RNA。
三、实验材料1. 真核细胞样品：新鲜组织或贴壁培养细胞。
2. 试剂：盐酸胍、乙酸钠、乙醇、酚、氯仿、RNA酶抑制剂等。
3. 仪器：匀浆器、离心机、分光光度计等。
四、实验步骤1. 样品处理（1）组织样品：取新鲜组织，剪碎成约1cm²的组织块，加入1ml匀浆液，高速匀浆1min。
（2）贴壁培养细胞：用PBS洗细胞一次，吸干溶液后，加入1ml匀浆液，高速匀浆1min。
（3）悬浮培养细胞：离心收集细胞，用PBS悬浮漂洗，收集细胞后加入1ml匀浆液，高速匀浆1min。
2. 混匀样品将匀浆后的样品加入1倍体积的盐酸胍溶液，混匀。
3. 离心分离将混匀后的样品以5000g离心10min，收集上清液。
4. 去除蛋白质将上清液加入0.1体积的3mol/L乙酸钠（pH5.2），混匀，再加入5倍体积的预冷乙醇，立即充分混匀，-20℃放置至少2小时。
5. 离心沉淀RNA以5000g离心10min，弃上清液，室温干燥RNA沉淀。
6. 溶解RNA向RNA沉淀中加入1mlDEPC处理过的水，混匀溶解RNA。
7. 评估RNA质量使用分光光度计测定RNA的A260/A280比值，评估RNA质量。
五、实验结果1. 通过观察实验现象，可以观察到组织样品和细胞样品均能成功提取RNA。
2. 通过分光光度计测定，提取的RNA的A260/A280比值在1.8-2.0之间，表明RNA质量较好。
六、实验讨论1. 在实验过程中，需要注意避免RNA酶的污染，以防止RNA降解。
RNA的提取总结
一、总的RNA的提取基础知识：(1)DEPC：中文名为焦碳酸二乙酯。
分子式为C6H10O5，分子量为162.14。
是一种强烈的RNA酶抑制剂。
它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。
DEPC水一般是指千分之一浓度的DEPC,在搅拌器上搅拌至完全溶解，即看不到“油珠”为止，DEPC气味芳香浓烈，强挥发性，有毒，需在通风橱中操作。
(2)RNA分子：哺乳动物细胞有3种rRNA：28S、18S和5S。
一个典型的哺乳动物细胞含有10-5μg RNA，其中80～85％为rRNA，其余15～20％主要由各种类型的低分子量RNA组成(tRNA、核内小分子RNA等)，这些高丰度的RNA分子具有确定的大小和核苷酸序列、并能用电泳、密度梯度离心、阴离子交换或高效液相层析等技术分离纯化。
mRNA与上述RNA不同，其含量为细胞总RNA的1～5％，大小和核苷酸序列各不相同，从数百至数千碱基不等。
..多数真核细胞mRNA在其3端均有一poly(A）尾，使得mRNA可以通过挂有oligo(dT)-纤维素的亲和层析柱分离纯化，获得的异源性分子集群的总体，可编码细胞内所有的多肽。
RNA酶变性剂RNA酶：水解RNA。
•含有链内二硫键，使其能抵抗长时间的煮沸和温和变性剂。
另外，变性后可迅速折叠，目前，尚无RNA酶失活的简易办法。
•该酶不需要二价阳离子激活，难以被金属离子鳌和剂（EDTA）失活。
——只好避免污染！用强烈变性剂，如盐酸胍或硫氰酸胍溶液能迅速溶解蛋白质，导致细胞结构破碎，核蛋白由于其二级结构的破坏而从核酸上解离下来。
..RNA酶可耐受多种处理(例如煮沸)而不失活，但却会被4 mo1/L硫氰酸胍和β-疏基乙醇等还原剂所灭活。
因此可联用上述试剂，从组织中提取完整无损的RNA实验准备工作：器具和试剂的消毒..（1）尽可能使用无菌、一次性塑料制品，已标明RNase-Free且未开封过的塑料制品，不必再进行其他处理，对于国产塑料制品，应按下列方法进行处理：在一玻璃烧杯中注入含终浓度为0.1%DEPC的去离子水，将要处理的塑料制品浸泡其中12小时以上，弃DEPC水溶液，适温烘烤干燥已处理过的塑料制品，再经103.4kPa，121℃高压灭菌15分钟，70-80℃烘烤干燥即可使用..（2）所用的玻璃器皿，置于干燥烘箱中200℃烘烤2小时以上。
RNA提取,RT-PCR实验报告
RNA制备及其鉴定实验目的初步掌握组织总RNA制备的原理及其基本方法，掌握RNA纯度鉴定的基本方法。
实验原理细胞内的RNA通常与蛋白质结合，以核蛋白（RNP）的形式存在。
分离制备RNA时，首先必须破碎细胞，使RNP释放到溶液中并与蛋白质分离，然后将RNA同其他的细胞成分分离开并保证RNA的完整性。
本次实验我们选用了Trizol法分离提取小鼠肝组织的总RNA，Trizol法分离提取的RNA产率高、纯度好且不易降解。
评价RNA质量的标准是RNA的均一性和完整性。
均一的RNA取决于有效的去除RNA提取物中的DNA、蛋白质和其他杂质；完整的RNA取决于最大限度地避免纯化过程中内源性及外源性RNA酶对RNA的降解。
通常采用紫外分光光度法测定RNA的浓度和纯度，纯RNA的A260/A280=2.0，但由于所用的标本不同，此比值有一定的变化，一般在1.8~2.0之间，低于改值表明有蛋白污染，需进一步用酚/氯仿抽提。
RNA的完整性可通过琼脂糖电泳法进行鉴定。
完整的RNA电泳时，28S和18SrRNA经EB染色后，两条电泳条带的显色强度近似为2比1。
本实验中几个重要试剂的作用：Trizol试剂：Trizol的主要成分是苯酚、异硫氰酸胍、十二烷基肌氨酸钠、β-巯基乙醇、醋酸钠、柠檬酸钠。
它的主要作用是1、裂解细胞，使细胞中的蛋白、核酸物质解聚得到释放。
2、使蛋白质变性，有利于DNA和RNA与蛋白质的分离。
3、抑制内源和外源RNase。
氯仿：氯仿的作用有多个方面，一、作为有机溶剂变性蛋白，使其沉淀并通过离心除去。
二、通过变性作用抑制RNase活性；三、通过氯仿把水相里参与的苯酚抽提掉；四、作为溶剂抽提样品中的一些脂溶性杂质（比如油脂、脂溶性色素等），起到一定除杂作用。
异丙醇：异丙醇是沉淀核酸用的，作用和乙醇一样。
只不过用量要比乙醇少。
异丙醇是等体积，而乙醇一般需要2.5倍体积。
在水相很多，离心管容积有限，加不下太多乙醇的时候一般会用异丙醇沉淀。
RNA的提取和含量测定
主要流程
实验器材的准备 核酸的提取 绘制标准曲线 含量 原料的预处理 RNA样液的配制 计算样品RNA的
实验总结
2012年3月14日，星期 三上 实验总结 午在生物实训楼 二上午四节课，在 的细 ,在老师 2011年11月1日，星期 生物实训楼实验总结 心指导下完成了实验“RNA 2011年11月1日，星期 二上午四节课，在 生物实训楼 ，在胡平老师 的细心指导下完 的提取和含量测定”。俗话 成了实验“氨基酸鉴定与分离”。俗话说 金无足赤人无完人，我们的实验也不例外。 我们的实验既有成功的地方，也有失败的 说金无足赤人无完人，我们 地方。 的实验也不例外，有成功的 ，在胡平老师 的细心指导下完成了实验 “氨基酸鉴定与分离”。俗话说金无足赤 人无完人，我们的实验也不例外。我们的 地方，也有失败的地方。 实验既有成功的地方，也有失败的地方。
实验目的主要流程实验器材的准备核酸的提取绘制标准曲线含量原料的预处理rna样液的配制计算样品rna的实验总结2011年11月1日星期二上午四节课在生物实训楼实验总结2011年11月1日星期二上午四节课在生物实训楼在胡平老师的细心指导下完成了实验氨基酸鉴定与分离
RNA的提取和含量测定
——B4小组
实验目的3;0.0463 R2=0.9439
3 、RNA的纯度不高。
问题分析及解决方法
1、认真阅读实验指导，认真思考 问题，避免下次出错。 2、规范操作。
3、最终得到的RNA的含量不高。
①、可能是因为在提取时洗涤 不够彻底，掺入了较多杂质 。 ②、提取出的湿的样品沾上了 滤纸的纤维 。 ③、样品放置的时间过长而发 生变性。
rna鉴定实验报告
rna鉴定实验报告RNA鉴定实验报告一、引言RNA（核糖核酸）是一种重要的生物分子，它在细胞内起着传递遗传信息和蛋白质合成的关键作用。
RNA鉴定实验是一种常用的实验方法，通过分析RNA 的组成和结构，可以了解生物体内的基因表达和调控情况。
本实验旨在通过RNA鉴定技术，对样本中的RNA进行分析和鉴定，以便更好地理解生物体的遗传信息和功能。
二、实验材料与方法2.1 实验材料- RNA样本：从细胞或组织中提取的RNA样本。
- RNA提取试剂盒：用于提取RNA样本的试剂盒。
- 反转录酶：用于将RNA转录成cDNA。
- PCR试剂盒：用于扩增cDNA。
- 电泳仪：用于检测PCR产物。
- 琼脂糖凝胶：用于电泳分离PCR产物。
2.2 实验方法1. 提取RNA样本：按照RNA提取试剂盒的说明书进行操作，从细胞或组织中提取RNA样本。
2. 反转录：将提取得到的RNA样本转录成cDNA，反转录酶的反应条件为37°C 反应30分钟。
3. PCR扩增：将反转录得到的cDNA进行PCR扩增，PCR反应体系和条件根据PCR试剂盒的说明书进行设置。
4. 电泳检测：将PCR产物与DNA分子量标记物一同加入琼脂糖凝胶孔中，进行电泳分离，电泳条件根据琼脂糖凝胶的说明进行设置。
5. 结果分析：观察琼脂糖凝胶电泳结果，根据PCR产物的大小和形状，判断RNA样本的组成和结构。
三、实验结果与讨论通过RNA鉴定实验，我们得到了琼脂糖凝胶电泳的结果。
根据电泳结果，我们可以看到PCR产物在琼脂糖凝胶上呈现出不同的带状图案。
这些带状图案代表了不同大小的PCR产物，反映了样本中RNA的组成和结构。
通过对电泳结果的分析，我们可以得出以下结论：1. 样本中存在多个PCR产物带，说明样本中存在多个不同长度的RNA分子。
这可能意味着样本中存在多个基因的表达或转录变异。
2. 某些PCR产物带的强度较弱，说明这些RNA分子在样本中的丰度较低。
这可能与基因表达水平的差异或RNA降解的程度有关。
rna鉴定实验报告
rna鉴定实验报告RNA鉴定实验报告引言RNA是一种重要的生物分子，它在细胞内起着传递遗传信息和蛋白质合成的关键作用。
因此，对RNA进行鉴定和分析具有重要意义。
本实验旨在通过一系列实验步骤，对RNA进行鉴定和分析，以便更好地理解其结构和功能。
实验材料与方法1. 实验材料：细胞样本、RNA提取试剂盒、琼脂糖凝胶电泳试剂盒、逆转录酶、引物、核酸分子量标记物等。
2. RNA提取：采用RNA提取试剂盒进行RNA的提取和纯化。
3. 琼脂糖凝胶电泳：将提取的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳分析，以观察RNA的大小和纯度。
4. 逆转录PCR：利用逆转录酶对RNA进行逆转录反应，得到cDNA。
5. 聚合酶链式反应（PCR）：利用引物对cDNA进行PCR扩增，以进行RNA的定量分析。
实验结果与分析1. RNA提取：通过实验，成功提取到了细胞样本中的RNA，并得到了较高纯度的RNA。
2. 琼脂糖凝胶电泳：通过琼脂糖凝胶电泳分析，观察到了明显的RNA条带，证明了提取的RNA样品的纯度和完整性。
3. 逆转录PCR：成功地将RNA逆转录为cDNA，并得到了目标基因的cDNA序列。
4. PCR扩增：利用PCR技术对cDNA进行扩增，得到了目标基因的定量分析结果。
结论通过本实验，成功对RNA进行了鉴定和分析，得到了RNA的提取、纯度、大小以及定量分析等重要信息。
这些结果为我们进一步研究RNA的结构和功能提供了重要的参考和基础。
总结RNA鉴定实验是一项重要的实验技术，可以帮助我们更好地理解RNA的结构和功能。
通过本实验的实施，我们成功地对RNA进行了提取、纯度分析、大小分析和定量分析，为RNA的研究提供了重要的数据支持。
在未来的研究中，我们将进一步利用这些数据，深入探讨RNA在生物学过程中的重要作用。
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( 实验报告)姓名：____________________单位：____________________日期：____________________编号：YB-BH-054131真核细胞rna提取的实验报告An experimental report on RNA extraction from eukaryotic cells真核细胞rna提取的实验报告范文一．原理本方法利用盐酸胍抑制RNA酶，匀浆裂解细胞，采用有机溶剂抽提去除蛋白质。
通过选择性沉淀RNA分子去除DNA。
二．方法1.样品处理⑴组织样品处理：取新鲜的组织样品称重后，剪碎成约1cm2的组织块直接加入匀浆液中进行RNA提取，或液氮中速冻-70℃保存。
⑵贴壁培养细胞处理：用PBS洗细胞一次，吸干溶液后将培养板快速移至液氮中冷冻后转到-70℃保存；或加入1ml匀浆至培养板中直接裂解细胞，然后将粘稠的裂解液进一步匀浆。
⑶悬浮培养细胞处理：离心收集细胞，用PHS悬浮漂洗再田心收集，若不立即提取RNA，则可经液氮速冻后转至一70℃贮存备用。
2．加l倍体积盐酸胍匀浆液[至准备好的样品细胞中，高速匀浆1min。
3．匀浆液5000g，室温离心10min。
4．将上清移至一个干净离心管中，加入0.1体积的3mol／L乙酸钠（PH5.2），混匀，再加5体积预冷的乙醇，立即充分混匀，-20℃放置至少2小时。
5．5000g 0℃离心10分钟沉淀核酸，弃上清液，室温干燥。
6，每个提取RNA的组织或细胞样品中，加入l0～15min盐酸胍匀浆液Ⅱ，搅拌溶解。
7．加入2.5体积预冷的乙醇，立即充分混匀，-20℃至少放置2小时。
8．5000g 0℃离心10分钟沉淀核酸，去上清，室温挥发乙醇。
9．按每克组织细胞加5min的比例．分两次加入0.02mol／L EDTA(pH8.0) 先加1／2体积EDTA振荡l～2分钟，3000g离心2min．吸出上清．再加另一个1/2体积的EDTA振荡l一2分钟．合并两次核酸溶解液。
．10．用等体积氯仿—正丁醇(4：1)抽提核酸溶液，5000g室温离心l0min，5000g室温离心10min。
吸出上清至另一个干净离心管中。
11．加3倍体积lmol／L乙酸钠(PH7.0) 混匀，-20℃放置1h以上，此时RNA将选择地沉淀，而DNA仍为溶解状况。
12．5000g，0℃离心20min，沉于管底的是RNA。
13．吸去上清，用4℃预冷的lmol／L乙酸钠(pH7．0)漂洗RNA沉淀。
然后20℃5000g，离心20分钟。
回收RNA。
14．尽量去除上清液。
按每g组织细胞1m的比例加入RNA溶解液(0.2％SDS，0.5％mol／L EDTA，pH8.0)。
注意：若有SDS沉淀析出．滴加0.11mol ／L NaOH调溶液pH至7．5。
15．加入2倍体积冰预冷乙醇混匀，0℃放置至少2小时，5000g，4℃离心10分钟，RNA沉淀用70％乙醇漂洗，短暂离心后，弃上清，室温干燥蒸发乙醇。
16．用适当小容积DEPC处理过的ddH2O溶解RNA沉淀，加入3倍体积乙醇，-70℃保存RNA备用。
用时．加入0.1体积的3mol／L乙酸钠，混匀，120xxg，4℃离心回收RNA。
三.试剂1．盐酸胍匀浆液Ⅰ成分：8mol／L盐酸胍(分子量为95.6)，O．1mol／L乙酸钠(pH5．2)，5mmol／L 2—巯基乙醇，0.5％十二烷基肌氨酸钠配制方法：取191g盐酸胍．加8.35m1 3mol／L乙酸钠(pH5．2)和6．25ml 0．2mol／L 2—琉基乙醇溶液中，再加水至237．5ml，混匀后加12．5ml 10％十二烷基肌氨酸钠,振荡混匀溶解。
2．盐酸胍匀浆液Ⅱ成分：8mol／L盐酸胍(分子量力95.6),0.1mol／L乙酸钠(pH5．2),1mmol ／L 2—琉基乙醇，20mmol／L EDTA(pH8.0)配制方法：取191g盐酸胍，加日．35ml 3mol／I。
乙酸钠(pH5．2)和1．25ml 0．2mol／L 2—巯基乙醇溶液中，再加入10ml 0.5mol／L EDTA(pH8.0)。
加水至250ml混匀。
3.乙醇4.70％乙醇5.氯仿—正丁醇(4：l，体积比)6.4mol／L乙醇钠，pH7.07.3mol／L乙醇钠，pH5.28.RNA溶解液成分：O．2％SDS．0.05mol／L EDTA, pH8.0四、说明提取RNA时，要特别注意防止RNase的污染，所用玻璃器皿均应用0.1％的二乙基焦碳酸盐(diethyl pyrocarbonate，DEPC)处理。
塑料器材均使用一次性用品，并高压灭菌处理，必要时，也可用0.1%DEPC处理。
：真核细胞RNA的提取RNA是基因表达产物，由以下几类分子组成，rRNA（占细胞总RNA的80%～85%）、tRNA和核内小分子RNA（占10～15%）、mRNA（占1～5%）。
其中mRNA是分子生物学的主要研究对象，分离制备mRNA是克隆基因，分析基因表达以及建立cDNA文库的首要步骤。
真核细胞总RNA分离提取的目的是要获得高纯度的具有充分长度的RNA 分子，包括RNA的纯度和完整性。
RNA分离的关键是尽量减少RNA酶的污染。
RNA酶活性非常稳定，分布广泛，除细胞内源性的RNA酶外，环境中也存在RNA酶。
因此在提取RNA时，应尽量创造一个无RNA酶的环境，包括去除外源性RNA酶的污染和抑制内源性RNA酶活性。
主要是采用RNA酶的阻抑蛋白RNasin和强力的蛋白质变性剂盐酸胍或异硫氰酸胍抑制内源性RNA酶，采用焦碳酸二乙酯（DEPC）去除外源性RNA酶。
一、RNA提取的关键真核细胞RNA的提取过程有四个关键点，即①样品（细胞或组织）的有效破碎；②有效地使核蛋白复合体变性；③对内源RNA酶的有效抑制；④有效地将RNA从DNA和蛋白混合物中分离；其中最关键的是抑制ＲＮＡ酶活性。
提取的RNA可以用于核酸杂交、cDNA合成以及体外翻译等。
二、组织RNA提取的基本步骤1.仪器：匀浆器、低温离心机、离心管。
2.试剂：氯仿、75%乙醇、异丙醇、DEPC溶液、1%甲醛变性胶、37%甲醛、3%过氧化氢、甲酰胺、RNA上样缓冲液。
3.主要步骤（1）取组织50~100mg，加0.8ml Trizol冲洗匀浆器，移入同一离心管，冰上静置5min。
氯仿，充分震荡混匀，静置0.5ml异丙醇，颠倒混匀。
－1ml 75%乙醇溶液，漂洗沉淀，10min。
l DEPC溶液，充分溶解RNARNA溶解液，按一定比例稀释后，紫外分光光度计测值，计算OD260/OD280OD260＝1时，RNA浓度约为）＝OD260×稀释倍数×401%甲醛变性胶电泳观察甲醛变性凝胶板：4.5μl RNA，120xxg×℃静置2h，4℃1.7~2.0，根据下述公式计算×甲醛胶电泳缓冲液，离心。
弃沉淀。
×10min×5min离心。
：1之间，说明RNA浓度：3%过氧化3.5μl 37%甲（2）加0.2ml3min，4℃15min （3）取上清，加入204℃，120xxg离心。
（4）弃上清，取沉淀，加入，7500g （5）弃上清，沉淀真空干燥（6）加40μ。
4.结果鉴定（1）紫外分光光度计检测：取定260nm、280nmOD比值，如果比值在RNA纯度可。
标准样品当40μg/mlRNA浓度（μg/ml。
（2）电泳检测：RNA质量，电泳槽及制胶板先用氢浸泡过夜；制1%，2ul 5醛，10ul甲酰胺，离心混匀，65℃变性15min后，迅速置冰浴中；再加入2μl RNA上样缓冲液，离心混匀后上样，6V/cm电压，电泳1～2h；暗室内紫外光下观察，拍照；如果观察到清晰的18S、28S RNA电泳带，无大量小分子RNA，说明RNA无明显降解，样品－70℃保存备用。
三、注意事项1、所有玻璃器皿160～180℃高温干烤6h以上，非耐高温器皿经0.1% DEPC液浸泡后，经高温（15磅，20min）处理灭活RNA酶，所用试剂均用DEPC水配制，然后高压处理。
2、实验用水要经DEPC处理，但含Tris的试剂不能用DEPC处理。
3、实验操作过程中要戴一次性手套，以避免RNA酶污染。
药大0942605：真核细胞rna提取实验原理：根据成熟雌蟾蜍体内含大量卵细胞且可以方便获取，细胞内含核酸丰富，没有其它组织器官等的干扰等优点以确定蟾蜍卵细胞为实验所需的真核细胞。
通过TRIZOL溶液中变性剂破碎真核细胞，然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA，再利用RNA不溶于异丙醇的性质将自身析出，达到分离提纯的目的。
TRIzol的主要成分是苯酚。
苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。
苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。
0.1%的8－羟基喹啉可以抑制RNase，与氯仿联合使用可增强抑制作用。
异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。
β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。
甲基绿—吡罗红为碱性染料，它分别能与细胞内的DNA、RNA结合呈现不同颜色。
当甲基绿与吡罗红作为混合染料时，甲基绿与染色质中DNA选择性结合显示绿色或蓝色；吡罗红与核仁、细胞质中的RNA选择性结合显示红色。
其原因可能是两种染料的混合染液中有竞争作用，同时两种核酸分子都是多聚体，而其聚合程度有所不同。
甲基绿易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色。
而吡罗红则与聚合程度较低的RNA结合呈现红色（但解聚的DNA也能和派洛宁结合呈现红色）。
即RNA对派洛宁亲和力大，被染成红色，而DNA对甲基绿亲和力大，被染成绿色。
09419实验材料：（一）试剂1.甲基绿—吡罗红染料：①染色剂A液的两种配制方法第一种方法：取吡罗红甲基绿粉1g，加入到100mL蒸馏水中溶解，然后用滤纸过滤，将滤液放入棕色瓶中备用。
第二种方法：取甲基绿2g溶于98mL蒸馏水中，取吡罗红G5g溶于95mL 蒸馏水中。
取6mL甲基绿溶液和2mL吡罗红溶液加入到16mL蒸馏水中，即为A液，放入棕色瓶中备用。
（注意：用于核酸染色的是吡罗红G，请不要错买吡罗红B。
）②染色剂B液的配制方法B液是一种缓冲液，由乙酸钠和乙酸混合而成。
先取乙酸钠16.4g，用蒸馏水溶解至1000mL备用；再取乙酸12mL，用蒸馏水稀释至1000mL备用。
取配好的乙酸钠溶液30mL和稀释的乙酸20mL，加蒸馏水50mL，配成pH为4.8的B液（缓冲液）。
③染色剂的配制染色剂是由A液、B液混合配制而成的。