bcr_abl基因检测寡核苷酸芯片的制备及分析_李焱

文章编号(Ar ticle I D):1009-2137(2004)06-0743-05·论著·bcr-abl基因检测寡核苷酸芯片的制备及分析

李焱,黄坚2,陈洁平,梁后杰1,王升启3

重庆西南医院血液科、1肿瘤科,重庆400038;2深圳益生堂生物有限公司,

深圳518026;3军事医学科学院放射医学研究所,北京100850

摘要 为了研究bcr-abl融合基因检测芯片在白血病诊断、分型、治疗方案选择及预后判断中的应用价值,设计了融合基因检测探针,制成寡核苷酸芯片;采用逆转录方法、荧光标记白血病细胞cDNA并进行杂交,以检测白血病细胞中bcr-abl基因。结果表明:通过对不同杂交温度、洗涤条件等的探索获得了较好的反应条件并用制备的芯片检测出了细胞株中的bcr-abl融合基因。结论:应用寡核苷酸芯片检测白血病细胞bcr-abl融合基因有独特的优势,具有一定的临床应用价值,但也存在一定的不足,若对芯片进一步改进,则今后在血液病方面应用前景是非常广阔的。

关键词 bcr-abl基因;融合基因;寡核苷酸芯片;白血病

中图分类号 R733.7;R730.4文献标识码 A

Identification bcr-abl Fusion Gene in Leukemia Cells with Oligonucleotide Microarray

LI Yan,HUANG Jian2,CHEN J ie-Ping,LIANG Hou-J ie1,WANG Sheng-Qi3

Department of Hematol ogy and1Department of Oncology,South-West Hospital,C hongqing400038,China;2Y is hengtang Biology C o.Ltd, Shenz hen518026,China;3Ins titute of Radiation Medicine of Academy of Militar y Medical Scienc es,Beijing100850,C hina

A bstract T o explore the application value of bcr-abl fusion gene deterction microarray in diagno sis,typing,choosing of

treatment variant and prognosis judgment,probe for fusion gene detection was desig ned,olig onucleotide microarray w as prepared;total RNA w as ex tracted,reverse-transcripted and labeled by fluorescence,then cDNA w as hybridized w ith microar ray in order to detect bcr-abl fusion gene in leukemia cells.T he results show ed that better reaction conditions were

g ained by explo ration of hybridizotion temperature and elutio n conditio ns,bcr-abl fusion gene in leukemia cells w as

detected by prepared miccroar ray.In conclusio n,olig onucleotide microarray is effective in detecting the fusion gene and has some unique adv antages and certain clinical application value,but has some deficiency too.If microarray can be improved further,it could be used widely in the field of hematology.

Key words bcr-abl g ene;oligonucleo tide microar ray;fusion g ene;leukemia

J E xp Hematol2004;12(6):743-747

白血病作为血液系统肿瘤,包含大量的非随机染色体异常,其类型不但在白血病各型之间有明显区别,而且在它们各自的亚型之间也互不相同[1]。FAB 协作组为此在FAB分型的基础上又进一步提出将细胞形态、免疫学和染色体三者相结合对白血病进行分型,由此表明染色体已成为白血病诊断和分型的重要指标。白血病染色体改变(主要是易位)导致的结果是相应位点的基因改变,形成白血病的特异性基因型。Ph染色体是最早发现的白血病相关染色体,由t(9;22)(q34;q11)易位形成,是CM L的特征性染色体,90%的CM L,1%-5%的AM L和5% -25%的ALL可见有这种染色体。现有的研究显示Ph染色体的基因改变是bcr-abl融合基因形成的,其与CM L发生发展密切相关。Ph阴性的CM L 患者也可分为有bcr重排和无bcr重排两型,两者的预后有所不同[2]。与无重排的相比,具有bcr重排的ALL也常与高危相联系,预后极差[3]。文献报道类似这样以染色体易位为基础的基因改变在白血病中还有不少,它们分别涉及到白血病的各型。常见的如:M LL/AF4、M LL/ELL、M LL/AF9;TEL/ JAK2、TEL/AM L1;E2A/PBX1;AM L1/M TG8; RARα/PLZF、RARα/PM L;TC R/TCL-2;TC R/ HOX11;DEK/CAN;CBFβ/M YH11;NUP98/ HOXA9;API2/MALT等[4,5]。

由此可见,对白血病融合基因的检测对白血病的诊断、分型、临床用药方案的选择、预后的判断等

通讯作者:陈洁平,副教授,副主任医师.电话:(023)68754129.E-mail:chenjpxn@

2003-12-12收稿;2004-09-02接受

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中国实验血液学杂志　Journal of Experimental Hematolo gy2004;12(6):743-747