冰冻切片制作与染色过程中常见问题与处理32页PPT
冰冻切片制作与染色过程中常见问题与处理
• 切片判读正确-反映真实的科学现象
• 知识结构背景
• 组织学结构的熟悉…… • 认识病理改变：炎细胞侵润、坏死、水肿、蛋白变性、纤维化、增 生、凋亡…… • 审美观、拍照角度、视野、曝光时间、对比度……
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– 常规HE染色 – 特殊染色
• 如：Masson(Thichrome staining)，油红O，尼氏染色， 台盼蓝（肥大细胞）染色
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(1) 所有切片呈阴性
1）染色未完全严格按照操作步骤进行 2）漏加一种抗体，或抗体失活 3）缓冲液内含叠氮化钠，抑制了酶的活性 4）底物中所加H2O2 量少或失活 5）复染或脱水剂使用不当
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（2）所有切片呈阳性反应，其原因：
①切片在染色过程中抗体过浓，或干片了。 ②缓冲液PH值不准确，洗涤不彻底。 ③使用已变色的显色底物溶液，或显色反 应时间过长。 ④抗体温育的时间过长。
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ห้องสมุดไป่ตู้
4. 染色：抗体孵育和选择: 免疫组化最关 键环节
试剂公司提供标准化的试剂
• 组织固定时
– 固定液要有足够的量(固定液是组织体积的8-10倍) – 保持一定时间，快速灌注固定后，相同的固定剂再固定 2-4h（ 4℃冰箱）
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减少冰晶的形成
• 公认：未经固定的组织切片冰晶较多 • 固定后的组织切片仍然会有一定的冰晶， 为防止冰晶的形成 • 采取如下方法
实验五-冰冻切片法ppt课件
.
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四、实验结果
观察小鼠肝脏细胞的形态
.
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五、作业
实验完毕，每人交制好的玻片标本1片，在 标签纸写上玻片名称及自己的姓名和日期；
实验报告（姓名和日期）。
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三、实验步骤
取材：引颈致死法杀死小鼠，取其肝脏，将新鲜肝脏组织切成1~1.5cm×1~1.5cm X 0.3~0.5cm 大小。组织块可不加任何处理，直接进行冰冻切片。另一种方法是组织先经10％中性福马林或 钙福马林固定，再水洗后冰冻切片。若组织用酒精固定，则固定后须用流水彻底除去组织内的 酒精，否则因酒精冰点低，不易冰冻。
切取的组织不能过大，组织过大
快速，用时短。
不容易冻结或者组织冻结不均，
影响切片及染色效果。
组织变化不大。
能很好保存脂肪，类脂等成分。
不容易制作较薄的切片。
能够比较完好地保存各种抗原活性及 组织块在冻结过程中容易产生水
酶类，特别是对于那些对有机溶剂或
的结晶而影响细胞的形态结构及
热的温度耐受能力较差的细胞膜表面
.
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半导体冰冻切片机构造
半导体制冷器 冷台 冷刀
制冷调节器 切片机
.
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一、实验目的
了解半导体冰冻切片机的基本构造； 练习半导体冰冻切片法制片。
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二、实验材料及用品
实验材料：小鼠肝脏 实验用具：载、盖玻片；显微镜；毛笔；半导
体冰冻制冷器、切片机等。 实验药品：甘油明胶液。
.
抗原物质的定位，并且组织结构
抗原和水解酶保存较好。
也不如石蜡切片清晰。.Fra bibliotek3冰冻切片的适用范围
冷冻切片常见问题分析与预防
冷冻切片常见问题分析与预防骆新兰收稿日期:1998 03 30作者单位:广东省人民医院病理科,广州 510080作者简介:骆新兰,男,30岁,技师冷冻切片是借助低温使组织冻结达到一定的硬度进行切片的一种方法。
它是术中诊断的一种重要方法。
但由于各种原因,影响冷冻切片的质量,拖延病理报告发出的时间,直接影响着病理诊断的及时性、准确性,间接影响着病人的预后。
归结起来有以下几方面。
1 切片不全或不能切片切片不全是指切出的切片组织切面不完整、有缺损现象;不能切片是指组织块的温度过高或过低不能制作一张完整的切片。
切片不全直接影响着冷冻报告切片的准确性。
导致切片不全或不能切片的常见的原因有几下几方面。
1 1 组织内含过多的脂肪或坏死组织 脂肪或坏死组织较一般的组织冷冻的温度要低些,当活组织达到所需的温度时,其还比较软,从而影响切片的完整性和拖延冷冻报告发出的时间。
1 2 组织块过冷 组织冷冻过度易致切片破碎或呈粉沫状,不能制作一张完整的切片。
1 3 组织块冷冻不均匀 在配合使用液氮时,组织块放入液氮时不能保持水平状态且液氮量不足的情况下,可产生此现象。
1 4 冻头的温度不足 冷冻切片时要求冻头的温度保持在-25 ~-30 左右,冻头的温度达不到要求时,组织很快回软,也不能保证切片的完整。
1 5 组织块过大 预防与处理: 注意组织的性质。
冷冻切片的组织除了要保持新鲜外,还应注意避免组织内含过多的脂肪(脂肪组织除外)及坏死组织。
!组织大小要适中。
冷冻切片机内切片刀移动的范围有一定的限制,超出其范围时,易致切片不全。
一般情况下,冷冻切片的组织块大小1cm ∀1cm ∀0 3cm,但卵巢肿瘤及脂肪组织可稍为大些。
另外,包埋时,应将组织平放在冻头的中央。
#掌握好冷冻时间。
根据组织块的大小、性质,确定冷冻时间,一般13~17s(使用液氮者),若组织较大或脂肪组织时间可适当长些,而甲状腺、脑组织和淋巴结等冷冻的时间相对要短些。
冷冻切片技术课件ppt
现代的冷冻切片技术已经实现了自 动化、数字化和标准化，为医学研 究和诊断提供了强有力的支持。
应用领域
临床病理诊断
冷冻切片技术可用于手术中的快 速病理诊断，帮助医生确定病变 的性质和范围，为手术方案提供
重要依据。
教学
冷冻切片技术可用于制作教学标 本，为医学生和病理医生提供直
观的学习材料。
科学研究
二氧化碳冷冻喷射固定设备。
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冷冻固定设备的特点
冷冻固定设备具有操作简便、冷冻速度快、温度低等特点，能够有效地
保持组织或细胞的结构和成分不变。
切片机与刀片
切片机
切片机是用于将冷冻固定的组织或细胞样品进行切片的仪器。其工作原理是通过将组织或 细胞样品放置在切片机的工作台上，利用机械或激光等方式将样品切成薄片。
生物科学研究
利用冷冻切片技术进行细胞结构和功能的深入研 究。
药物研发
利用冷冻切片技术评估药物对细胞的作用机制。
发展前景展望
自动化与智能化
01
通过自动化与智能化技术的引入，降低冷冻切片制备的难度和
操作成本。
高分辨成像
02
发展高分辨成像技术，以获得更清晰、更深入的细胞结构和功
能信息。
跨学科，如生物工程、神经科学
将切片贴在载玻片上
将切好的切片贴在预处理的载玻片上，使其平整、无气泡。
干燥与固定
使切片在室温下干燥，并进行必要的固定处理，如用醛类化合物 进行醛化处理，以增强切片的稳定性。
染色与观察
染色
根据研究或诊断需求，选择适当 的染色方法对切片进行染色，如 H&E染色、免疫染色等。
观察
用显微镜观察染色后的切片，根 据需要调整焦距和光源强度，观 察并记录组织结构和细胞成分等 细节信息。
冰冻切片制片实验步骤及注意事项
冰冻切片制片实验步骤及注意事项冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。
因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。
冰冻切片制片实验步骤1、组织固定：新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上。
将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整。
2、脱水：将修切好的组织放于15%的蔗糖溶液内4°冰箱脱水沉底后转入30%的蔗糖溶液内4°冰箱脱水沉底。
3、OCT包埋：将脱好水的组织取出用滤纸将表面水稍吸干后切面朝上放于包埋台上，组织周围滴上OCT包埋剂，将包埋台放在冰冻切片机的速冻台上速冻包埋，OCT变白变硬后即可进行切片。
4、切片：将包埋台固定于切片机上，先粗切将组织面修切平整后即可开始切片，切片厚°8-10μm。
将干净的载玻片平放于切出的组织片上方即可将组织贴于载玻片上。
-20°保存备用。
注意事项1、组织尽可能新鲜、骤冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的骤冷剂有：① CO2气（-78℃）② 丙酮干冰冷却的轻石油醚、乙烷和庚烷（-80℃）③ 液氮（-190℃）④ 液氮冷却的丙烷（-19℃）。
液氮适用于组织化学，较安全。
缺点：组织块易发生龟裂。
2、为防止水解酶和其他物质的移位、弥散，常用4℃、24小时的甲醛固定能很好地保存酶类。
但对许多脱氢酶和转移酶能灭活。
故不宜使用，低温，冷甲醛短时间固定（10分钟左右）固定，可显示琥珀酸脱氢酶。
3、电镜出现后，需要保存细胞的超微结构，以4%缓冲戊二醛（25%戊二醛16ml；0.1M二甲胂酸（pH7.）84ml；蔗糖8g）固定较好。
这些固定液主要用于水解酶，而不适于许多氧化还原酶和转移酶。
冰冻切片法ppt课件
方法：
• 切片固定30秒－1分钟。 • 水洗。 • 染苏木素3－5分钟。 • 分化。 • 于碱水中返蓝20秒。 • 伊红染色10－20秒。 • 脱水，透明，中性树胶封固。
操作过程中常见问题与处理
标本固定应充分
• 标本经固定或不固定均可，但经过固定的组织切片冰晶少 ，细胞挤压变形小，切片完整，染色清晰，而未固定的组 织冰晶多，细胞挤压变形大，甚至会影响观察结果。因此 ，除特别需要外，一般较多采用组织固定后再行切片。固 定方法有浸入法和灌注法，浸入法主要用于活检和手术标 本，以及其它不能进行灌注的组织固定。灌注法适用于动 物实验研究。用于组织固定的固定剂种类很多，包括醛类 、非醛类、丙酮及醇类等，其中以中性缓冲液配制多种聚 甲醛较为常用2’，- 3组织固定时，一方面固定液要有足 够的量，另一方面还要保持一定时间，一般在快速灌注固 定取材后，多用相同的固定剂再固定! % " ，以使组织充分 固定，这对保持切片的完整性尤为重要。
不甚清晰, 背景模糊。 通过使用两种不同固定方法结果的比较, 我们认为 双重固定液法在冰冻切片中应用良好, 明显优于Clarke 氏单液固定法, 值得推 广应用。
合成胶水的影响
• 临床病理工作中经常遇到一些微小组织做冰冻切片,我们 体会到,异体脏器组织包埋法中的异体脏器组织存留在载 玻片上,不易擦除干净,留有背景对切片外观有影响,时有微 小组织与异体脏器组织间包埋时易产生间隙,给切片带来 不便。石蜡包埋托法往往因包埋托有一定厚度影响冷冻时 间,而且仍然需要OCT 包埋剂。合成胶水水溶性好,与组织 结合紧密,二者形成完整整体,而且冷冻后硬度相当,利于切 片,切片上的胶膜水洗后完全溶解,不会造成污染和遗留背 景色。合成胶水用量少,冷冻时间短,组织不会形成冰晶 , 因此镜检时细胞形态完整,染色清晰。合成胶水来源简便 、经济、冷冻快速。实为一种实用的替代方法。
常规冰冻制片常见问题分析 ppt课件
每台冰冻切片机都有 一个速冻台，好的冰 冻切片机可以在几分 钟内将速冻台的温度 下 降 至 -50℃ ～ -60℃ 度之间。
冷冻锤从上面压在组 织上，可以使组织上 下两面同时冷冻
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一台冰冻切片机有多个冷冻锤
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6、液氮和急冻剂
使用液氮和急冻 剂来快速冷冻组织
7、专用冷冻机
• 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭 • “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我
笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
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一、冰冻切片制片中冰晶的问题
冰晶的产生：当组织缓慢冷冻时，组织间隙的 水份凝固形成的，这时由于电解质析出，渗透压 升高，细胞内的水分子渗透到细胞外，使组织间 隙的冰晶变得更大，挤压周围组织，使组织细胞 的形态发生明显的改变，严重影响病理诊断。
1、正确选择染色试剂苏木素、伊红的配方 2、注意染色过程中的细节问题
ppt课件
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1、苏木素、伊红配方的选择
（1）改良Gill苏木素液：
苏木2.5克溶于乙二醇250ml中。硫酸铝铵17.6克溶于蒸馏水 730ml,以上二液充分溶调后混合，加碘酸钠0.2克，使用前加 冰醋酸20ml.
（2）酸化沉淀伊红液 贮 备 液 ： 伊 红 20 克 ， 蒸 馏 水 500ml, 经 充 分 溶 解 后 加 浓 盐 酸
5、购置专用冷冻机、急冻剂、专用液氮灌
ppt课件
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二、常规与冰冻制片中常见问题
切片染色的问题
冰冻切片制作与染色过程中常见问题与处理精品PPT课件
– 未经固定的脑组织、肝组织：-10- -15℃左右 – 甲状腺、脾、肾、肌肉等组织：-15～20℃ – 含脂肪组织，-25℃左右 – 含大量的脂肪 -30℃
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保持切片的完整性
• 切片破碎不全、有缺损的常见原因
– 固定不完全 – 温度设置不当 – 组织块过冷、过硬，则切片就容易破碎 – 组织块冷冻不够，硬度和韧度达不到，切片也同
样易粘、易碎 – 组织块带有皮肤、包膜、过大或冰晶过多 – 切片刀钝或较脏，切片出现刮痕，使切片不完整 – 操作手法不当，如速度不适宜
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防止切片卷缩
• 常见原因
– 切片刀钝或粘有组织碎屑 – 防卷板位置不正确或防卷板较脏 – 静电或者气流作用 – 防卷板温度高、室温高
• 采取对策：
– 保持防卷板干净、平整、无缺损、无刮伤 – 戴口罩，以避免呼出的气流直接吹到防卷板 – 切片时间过长时，应注意间隔一会儿，盖上冷冻室
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同一载玻片上 • 包括各个所有组 • 染色齐性
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为防止冰晶的形成 • 采取如下方法
– 速冻法：将组织置入低温环境，使组织骤然降 温
– 利用高渗溶液吸收组织水分子：将组织置于 20% —30%的蔗糖溶液中，置4摄氏度冰箱足够 时间（多长时间? 判定？）
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冰冻切片免疫组化染色步骤
冰冻切片免疫组化染色步骤引言冰冻切片免疫组化染色是一种常用的实验方法，用于研究细胞和组织的分子表达。
它结合了冷冻样本的切片技术和免疫组织化学染色的原理，能够可视化特定分子在组织中的位置，从而帮助我们理解生物过程和疾病机制。
本文将介绍冰冻切片免疫组化染色的步骤和注意事项。
步骤一：样本制备1.收集组织样本，根据需要进行切割和处理。
2.快速冷冻组织样本，可用液氮或乙醚等方法冷冻，并保存在低温环境中。
步骤二：切片制备1.取出冷冻样本，将其置于切片机或切片冷冻器中。
2.进行组织切片，通常厚度为5-10微米，利用切片刀或者切片冷冻器的微调装置。
3.将切片收集在清洁的载玻片上，可以使用专门的载玻片来增强切片与载玻片间的附着力。
步骤三：固定和脱水1.将载玻片上的切片放入4%的中性缓冲福尔马林缓冲液中固定细胞和蛋白质。
2.固定15-30分钟后，用PBS或其他缓冲溶液洗涤切片，将福尔马林去除。
3.将切片脱水，使用逐渐浓度的乙醇和脱水溶液，如70%乙醇、95%乙醇和100%乙醇。
步骤四：抗原修复1.对于有些抗原，如细胞核抗原，需要进行抗原修复。
这可以通过热、酸或酶消化等方法进行。
2.一种常用的抗原修复方法是将切片置于高温或高压下进行热诱导抗原修复。
步骤五：阻断和孵育1.使用蛋白质阻断剂，如牛血清蛋白、BSA等，在切片上进行孵育，以防止非特异性结合。
2.孵育时间通常为30分钟至1小时。
步骤六：一抗孵育1.加入一抗，即特异性抗体，与切片上的靶分子结合。
2.一抗浓度和孵育时间根据实验需要和抗体质量进行优化。
步骤七：洗涤1.使用PBS或其他缓冲溶液洗涤切片，将未结合的一抗去除。
2.洗涤时间和次数根据实验要求和抗体特性进行优化。
步骤八：二抗孵育1.加入荧光标记的二抗，与一抗结合形成复合物。
2.二抗可以识别一抗的种类，常见的二抗有荧光标记的抗鼠IgG、抗兔IgG等。
步骤九：洗涤1.使用PBS或其他缓冲溶液洗涤切片，将未结合的二抗去除。
浅析冷冻切片常见的质量问题及处理方法
大密度投影（ Ｍ Ｉ Ｐ ） 图像上 画线 ， 重组 出单体素的曲面图像 。 曲面
重组的优点是可 以将弯 曲的肋 骨重组在一个断面 图像显示 ， 不 受周围组织的干扰［ ４ １ 。Ｖ Ｒ利用了容积 内的全部信息 ， 将扫描容 积 内投影线通过容积数据 的全 部像 素总投影 ， 以不 同灰 阶显示
浅 析冷 冻切 片 常见 的质 量 问题 及 处 理 方 法
杨 国霞
（ 中信机电制造公司总医院 ， 山西 运城 ０ ４ ３ ８ ０ １ ）
冷冻切 片是 指借助低温 条件对 尚未 固定 的手术切 除标本
组织块 快速冷冻 ， 达到一定 的硬度 之后 ， 进行切 片 的一 种制片
织块过大或偏位等 四种状况。
【 ３ ］ 姚 以刚． ６ ４ 层容积 ｃ Ｔ 对肋 骨骨折 的诊断价值 们． 中国 ｃ Ｔ和 Ｍ Ｒ Ｉ
杂志 ， ２ ０ ０ ９， ７ （ ４ ） ： ３ ９ — ４ １ ．
组３ ２ 例， 发现不完全 Ｉ 生骨折 ５ 处、 无移位的完全型骨折 ４处。 总之 。 ｌ ６层螺 旋 Ｃ Ｔ对肋 骨骨折 的诊 断价值 明显优 于 Ｄ Ｒ 胸片， 图像后处理发挥 了其优越性 。其 中 Ｖ Ｒ图像直观 ， 近似解 剖位置 ， 对肋骨 骨折 的位 置 、 数量 和移位 情况显示清楚 ， 但 对微 细骨折确诊需结合原始 薄层图像及 Ｃ Ｐ Ｒ重建 图像 ， 可检 出 Ｄ Ｒ 平片不易发现的骨折 ， 确 定骨折的部位 、 范围 、 类 型及 与周围组
参考文献
结构 ， 但Ｖ Ｒ图像对 肋骨骨皮质微 细裂 折不能确诊 。曲面重组
成像在显示肋骨骨质内在结构及微细骨皮质裂折方面有独特价 值目 ， 可多次重复重组 图像 ， 直至骨 折线显示最佳 。本组病例 均 行冠状位 和矢状位平 面重组 ， 再行 Ｖ Ｒ重组 ， 作出基本诊 断 ； 对
常规冰冻制片常见问题分析 ppt课件
脱蜡试剂的问题
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怎样使 切片染色更漂亮
1、正确选择染色试剂苏木素、伊红的配方 2、注意染色过程中的细节问题
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1、苏木素、伊红配方的选择
（1）改良Gill苏木素液： 苏木2.5克溶于乙二醇250ml中。硫酸铝铵17.6克溶于蒸馏水
730ml,以上二液充分溶调后混合，加碘酸钠0.2克，使用前加 冰醋酸20ml. （2）酸化沉淀伊红液 贮 备 液 ： 伊 红 20 克 ， 蒸 馏 水 500ml, 经 充 分 溶 解 后 加 浓 盐 酸
废液倒掉后，试剂瓶要清洗干净并且擦干。 更换试剂后要预先试染一批切片。 更换试剂时要注意不要弄错试剂摆放的顺序。 由于天气的原因，试剂容易挥发，要及时添加或更换。
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细节决定成败
在常规和冰冻切片制片过程中，切片染 色也是 比较重要的一个环节，如果这个环节没做好，也一 样地影响病理诊断，所以，我们在实际工作中除了 注重常规的组织标本的前期处理、冰冻切片的速冻 方法外，我们还要正确选择染色液的配方，并且在 染色过程中把每一个细节都做得很好，我们的切片 质量肯定会好的。
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2、 取材不能太大、太厚
组织块的大小、厚 薄决定了冷冻的速度， 太大、太厚的组织由 于冷冻时间长，难免 有冰晶的产生。所以， 取材组织块小于 1.5*1.5*0.3cm。
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取材3mm 厚
取材4mm厚
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3、使用吸水纸 可以吸干组织表面的水分
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4、样本托和打底胶预冷
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打底胶预冷
常规及冰冻切片制片中常见的 问题分析及解决方法
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常规、冰冻制片常见问题及对策
冰晶的问题----冰冻切片制片时如何减少冰晶 染色的问题----怎样使切片染色更漂亮 标本切开与固定----如何做好标本的切开与固
冰冻切片制作与染色过程中常见问题与处理课件
加强操作人员技能培训与交流学习
总结词
加强操作人员技能培训和交流学习可以提高冰冻切片 制作和染色技术的水平。
详细描述
操作人员的技能水平对冰冻切片制作和染色结果具有 重要影响。因此，应加强操作人员的技能培训，使其 掌握正确的操作方法和技巧。此外，组织操作人员之 间的交流和学习，可以分享经验和技巧，提高整体技 术水平。同时，鼓励操作人员积极参与学术会议和技 术研讨会，了解最新的技术和进展，也是提高技术水 平的有效途径。
04
冰冻切片染色常见问题及 处理方法
染色不均匀
总结词
冰冻切片染色不均匀可能是由于染色时间不足或过长、染色液浓度不合适、切片温度不均匀等原因引 起的。
详细描述
染色不均匀的问题可以通过控制染色时间和浓度来解决。一般来说，染色时间不宜过长或过短，应根 据染色液的浓度和切片厚度来适当调整。同时，确保切片温度保持均匀，避免局部温度过高或过低。
详细描述
在冰冻切片制作过程中，组织固定 是关键步骤之一。如果固定不当， 会导致细胞结构变形、组织结构松 散等问题。
处理方法
应掌握组织固定的最佳时间和方法 ，根据组织类型和实验要求选择合 适的固定剂，并严格控制固定时间 。
切片温度不适宜
总结词
切片温度不适宜可能引起细胞结 构破坏，影响切片质量。
详细描述
感谢您的观看
THANKS
总结词
切片温度和厚度的调整对切片质量和染色效果具有重 要影响。
要点二
详细描述
在冰冻切片制作过程中，应根据组织类型和实验需求 ，选择合适的切片机和切片刀，并调整切片温度和厚 度。一般来说，较薄的切片更容易染色和观察，但过 薄的切片可能会导致组织结构破坏和细胞丢失。同时 ，应根据染液特性，选择合适的染色时间和温度，以 确保染色效果。
冰冻切片的步骤及注意事项
冰冻切片的步骤及注意事项嘿，友友们！今天咱来唠唠这冰冻切片的那些事儿，可别小看它哟，这里头的步骤和注意事项那可不少呢！
先说这第一步，取材那可是相当关键呐！就好比你要做一道超级美味的菜，原料得新鲜吧！取材的时候就得眼疾手快，别磨蹭，不然那材料都不新鲜啦！而且取的位置也得准，不然切出来的片子可就不地道喽。
然后就是速冻啦，这就像是给材料来个急速冰镇。
嘿，可别慢悠悠的，得赶紧把它冻得邦邦硬，不然切片的时候可就不好玩啦。
想象一下你切个软不拉几的玩意儿，那能成啥样！
接着就是切片啦，这可是个技术活。
就跟咱削苹果似的，你得手法稳，不然切出来那一片片厚的厚，薄的薄，那可不行！我跟你说，这时候就得开启“大师模式”，每一刀都得恰到好处，别整那些歪七扭八的片子出来。
哎呀，这过程中可得注意好多事儿呢。
比如说温度得控制好，太高了不行，太低了也不行。
温度不对，那切出来的片子不是皱皱巴巴就是碎成渣，这可不是咱想要的结果嘛。
还有呢，切片机也得爱护好，就跟咱的宝贝似的，不然它捣乱起来，你可就有的愁喽。
有时候啊，这冰冻切片就跟一场战斗似的，你得和各种因素斗智斗勇。
一不小心哪里出点差错，那片子可不就给你颜色看啦！但咱也不能怕呀，就得勇敢面对，慢慢摸索，找到最佳的方法。
我还记得刚开始接触冰冻切片的时候，那真叫一个手忙脚乱啊。
不是这儿出问题就是那儿不行，简直让我哭笑不得。
不过呢，随着经验的积累，现在咱也能轻松应对啦。
总之呢，冰冻切片虽然有些麻烦，但只要咱掌握了步骤和注意事项，加上那么一点点的耐心和细心，就一定能把它搞定！友友们，加油干吧，让我们在冰冻切片的世界里闯出一片天！。
冰冻切片技术原理ppt课件
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四、冷冻切片的制作方法
• 5.以粗切削的方式进行标本的粗切削至暴露标本的最大平 面，用毛笔清除机头、标本托及刀片上的组织碎屑。
• 6.确认切片的厚度，一般6~10um不等，根据组织的不同 可适当调整切片的厚薄。
• 1.切片前，厚度应预先调制好，刀具提前安放好。 • 2.刀的角度调好位置，并多备几个冷冻托，以供速冻组织
块使用。 • 3.切片时，观察窗不可打开过大，以防温度升高影响切片。 • 4.每一例冷冻切片完成后都应及时清理冷冻组织碎屑，以
防造成污染。 • 5.切片污染是病理组织制片的大忌，在冷冻切片粗削后必
• 二、冷冻切片染色的注意事项
• 1.提倡使用新鲜苏木精染液，每天过滤，防止沉渣及结晶 的形成，保证高质量的冷冻切片以利诊断。
• 2.室温过低时，影响着色，可适当加温促进染色。 • 3.盐酸酒精分化应适度，显微镜下控制，否则易造成核着色
不佳，染色质不清晰，影响诊断。
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七、冷冻切片机的使用注意事项及日常维护
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二、恒温冷冻切片机的结构与功能
• 1.结构：恒温冷冻切片机主要由冷箱体及切片机构成，具 有快速双重制冷、自动除霜、自动消毒、负压等功能。
• 2.功能：利用物理降温的方法将新鲜组织标本冷冻使其产 生一定的硬度进行切片，与石蜡切片相比，冷冻切片不需 要脱水处理，因此制片速度快，是为术中提供快速病理诊 断的良好方法。
冷冻切片制作技术
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• 一、冷冻切片的意义 • 二、恒温冷冻切片机的结构与功能 • 三、冷冻切片组织的取材 • 四、冷冻切片的制作方法 • 五、冷冻切片的固定和染色 • 六、冷冻切片的标准及染色的注意事项 • 七、冷冻切片机的使用注意事项及日常维
冰冻切片中常见问题分析 ppt课件
6、切片皱缩或卷缩：
这也是影响切片质量的重要因素之一。常见的原因有：①刀锋变钝。 ② 防卷板粘有异物，防卷板的作用是防止切片卷缩，但若粘有异物， 切片时组织会被挤压而缩在一起。③ 防卷板与刀锋的位置不平行、 不协调。④ 组织块包埋不完全，缺乏支撑作用。
预防与处理的方法：① 注意检查刀具，及时更换刀口，定期磨刀。 ② 保持防卷板的清洁，每做一例冷冻切片，均应将刀口及防卷板拭 擦干净，防止切片的污染和切片皱缩。③ 调整刀、防卷板的位置， 保证两者平行，且防卷板比刀锋前0.2㎜左右。④ 包埋组织应完全， 没法切片者再滴加包埋胶。
组织内含过多的脂肪或坏死组织：脂肪或坏死组织较一般的组织冷冻 的温度要低些，当活组织达到所需的温度时，其还比较软，从而影响 切片的完整性和拖延冷冻报告发出的时间。 组织块过冷：组织冷冻过度易致切片破碎或呈粉沫状，不能制作一张 完整的切片。
组织块冷冻不均匀：在配合使用液氮时，组织块放入液氮时不能保持 水平状态且液氮量不足的情况下，可产生此现象。 冻头的温度不足： 冷冻切片时要求冻头的温度保持在－ 25 ℃ ～－ 30℃左右，冻头的温度达不到要求时，组织很快回软，也不能保证切 片的完整。
?此原因主要取决于组织含水量的大小尤以组织细胞水肿淋巴结纵隔肿瘤卵巢肿瘤为甚送检取材过程中接触水源速冻过程中使用的液氮时间尚未控制好同是造成冰晶形成的原因其解决方法为使用液氮时间上控制到位保证一次冻透标本组织送检取材时尽量避开水源如遇含水量高的标本时应尽量用干纱布吸干水分后再行冷冻避免由于主要取决于组织含水量的大小，尤以组织细胞水肿，淋巴结， 纵隔肿瘤，卵巢肿瘤为甚，送检取材过程中接触水源，速冻过程中使 用的液氮时间尚未控制好，同是造成冰晶形成的原因，其解决方法为， 使用液氮时间上控制到位，保证一次冻透标本，组织送检取材时，尽 量避开水源，如遇含水量高的标本时，应尽量用干纱布吸干水分后再 行冷冻，避免由于冰晶形成出现诊断上的失误。操作者的动作应迅速。
实验五-冰冻切片法ppt课件
将新鲜材料置于冷台上冰冻组织，组织块冻结的硬度与切片的成败有密切关系，如切削后在刀 片上出现白色而脆的飞散碎片，即组织块冻结太硬；若为软弱的粥状则太软，只有适当硬度切 出的切片才能平展成形。这要根据工作经验，控制适当的致冷温度。
冰冻切片的温度要适宜，温度过低、过高会导致组织过硬或硬度 不够，从而影响切片质量，产生搓板状、梯田状、厚薄不均，破 碎或粉末状现象。根据器官组织形态结构和组成成分的不同，冰 冻组织切片的温度亦不同。推荐：乳腺、卵巢、子宫等：-20~25℃ 胃肠：-18~-20℃-甲状腺、肝，肾、脾等：-15℃左 右·脂肪组织一般在-35℃以下；
封片时要做到无气泡，无溢液、标签清楚端正，保证切片的整洁。
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四、实验结果
观察小鼠肝脏细胞的形态
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五、作业
实验完毕，每人交制好的玻片标本1片，在 标签纸写上玻片名称及自己的姓名和日期；
实验报告（姓名和日期）。
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组织等。 某些酶的显示如ATP酶，琥珀酸脱氢酶等。 神经病理学技术中的某些染色法如：Eager氏法，Marchi氏法，Cajal氏法，
Hortega氏法和Holzer氏法等。 对某些物质所进行的免疫荧光的研究。
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冰冻切片的种类
冰冻切片的种类较多，有低温恒冷箱冰冻切片法、二氧 化碳冰冻切片法、甲醇循环制冷冰冻切片法、半导体冰 冻切片法等。这些方法，随着时代的变迁，科技的发展， 许多年前被认为是非常重要的技术，现在也逐步被淘汰 了。当然有些技术，如低温恒冷箱冰冻切片法，正在受 到青睐。