1 植物生理学实验操作

38℃
20min
观察并比较两管颜色
操作步骤： 3.B管+3ml 斐林试剂 观察颜色变化 作业： 1.记录观察结果并作必要的分析。 沸水浴 2~5min
实验二 植物组织水势的测定
原理：
根据渗透作用的原理，用小液滴法测 得蔗糖溶液与植物组织中之间的等渗 浓度，根据公式 Ψ W (细胞水势) =Ψ s = — CRT 求得溶液的水势，从而得知植物组织的 水势。
材料与实验器具：
植物材料：
ห้องสมุดไป่ตู้
女贞、海桐叶片 实验器具： 分光光度计；电子天平； 研钵； 试管； 小漏斗；滤纸； 吸 水纸； 移液管 ；量筒； 剪刀 试 剂： 95％乙醇（或80％丙酮）； 石英砂；碳酸钙粉
操作步骤：
1.称取剪碎的新鲜样品0.1g 左右，放 入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉 及3～5ml 95％乙醇，研成均浆，继 续研磨至组织变白。静置3～5min。
操作步骤：
2. 取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润， 沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到 10ml试管中，用少量乙醇冲洗研钵、 研棒及残渣数次，最后连同残渣一起 倒入漏斗中。
操作步骤：
3.用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿 体色素全部洗入漏斗中。直至滤纸和 残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容 至10 ml ，摇匀。
作业：
1.计算并比较两种植物叶绿素含量。
思考题： 为什么提取叶绿素时干材料一定要用 80％ 的丙酮，而新鲜的材料可以用无水丙酮提 取？
实验六 过氧化氢酶活力测定
原理：
过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶， 含有铁，它能催化H2O2分解为水和O2 ，可 根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶 的活力大小。用标准高锰酸钾溶液（在酸 性条件下）滴定多余的过氧化氢。即可求 出消耗的H2O2的量。
操作步骤：
2.用移液管从浓度各试管中吸出1ml注 入对应的指形管内，各管均加塞，并 贴上标签。
操作步骤：
3.将女贞叶片在叠在一起，沿中脉两边 用钻孔器打取10片小圆片，分别放入 小指形管内，放置20min(期间摇动2~3 次）后，加甲烯蓝2滴摇匀。
操作步骤：
4.用长滴管吸取着色溶液放入原相应的 蔗糖溶液中，慢慢放出一滴蓝色溶液， 在白色纸片上观察小液滴升降情况， 并作记录。
操作步骤：
4. 把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的 比色杯内。以95％乙醇为空白，在波 长663nm、645nm下或652nm测定吸光 度。
操作步骤：
5. 计算公式： 叶绿素的含量（ mg/g ） = [(O.D652/34.5)× 提取液体积×稀释倍数]/样品鲜重（或干 重）。 Ca=13.95A663－6.88A645； Cb=24.96A645－7.32A663
作业：
1.记录小液流在试管内的移动方向
溶液浓 （mol/ L）
小液流 方向 解释
0.05
0.1
0.2
0.3
0.4
作业：
2.按下列公式计算组织的水势： Ψ W (细胞水势) =Ψ s = — CRT 式中： Ψ s —— 溶液的渗透势，以 MPa 为 单位。 R —— 气 体 常 数 ， 为 0.008314 MPa· L/ （mol· K ）。 T ——绝对温度，即 273 + t ℃, 单位为K。 C ——溶液的摩尔浓度，以 mol/L 为单位。
操作步骤：
1. 酶液提取：取叶片0.5 g（或茎）加 入少量蒸馏水，加 CaCO3 粉及石英砂 少许，研磨成匀浆，再加蒸馏水至总 量25ml，在室温下浸提10分钟，不时 摇动，用脱脂棉过滤于 50ml 锥形瓶 中, 静置上清液即为过氧化氢酶的粗 提液。
操作步骤：
2.吸取5ml酶提取液放入一试管中，置沸水中加热 5分钟，使酶失活。 3.取50ml三角瓶2个（1个测定,另1个为对照） 失活酶液(对照) CAT酶液 +20ml蒸馏水+1% 1ml H2O2 摇匀 40 度水浴反应（ 10min ） +2ml10%H2SO4 终止 反应 0.1mol/LKMnO4滴定
思考题： 1. 用小液流法测定植物组织水势时，为 什么应强调所用试管、毛吸管应保持 干燥 2. 打取小圆片并投入试管中时动作应迅 速，加入甲烯蓝不能太多？
实验三 叶绿素含量的测定

原理：
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸 光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L 成正比 。 叶绿素在652nm(混合）、663nm、645nm 有最大吸收峰。 根据在分光光度计下测定的吸光度，求 得叶绿素的含量。
植物生理学实验操作指南
植物生理实验室 2011，3
实验一 淀粉酶的提取及作用
原理：
1.淀粉 淀粉酶水解 蓝色糊精 红色 糊精 无色糊精 麦芽糖 葡萄糖 2.葡萄糖+斐林试剂 Cu2O↓(砖红色）
植物材料与实验器具：
植物材料：
萌动的小麦 实验器具： 试管 ；玻棒；量筒； 研钵；漏斗；电炉；水浴锅 试 剂： 2%淀粉溶液；稀I-KI 溶液（原液稀释5倍）；斐林试剂
KMnO4与H2O2反应方程式如下：
5H2O2+2KMnO4+3H2SO4→K2SO4+ MnSO4+8H2O+5O2
材料与实验器具：
植物材料：海桐茎、叶片等 实验器材： 研钵；电炉；水浴锅； 酸式滴定管； 量 筒；锥形瓶；漏斗 ；试管；移液管 试 剂： 0.1mol/L 高 锰 酸 钾 标 准 液 ； 1% H2O2 ； 10%H2SO4；CaCO3 粉
操作步骤： 1. 取10粒萌动的小麦种子放入研钵中， 用量筒取10ml蒸馏水作为淀粉酶提 取液总量（包括研钵清洗、种子研 磨），分三次加入，将小麦研成浆 状，用脱脂棉过滤于试管中,摇匀。 滤液静置5-10min ,上清液为淀粉酶 的提取液。
操作步骤： 2. 取2只刻度试管做标记A管、B管 A管：2ml 2%淀粉液+2ml蒸馏水 B管：2ml 2%淀粉液+2ml淀粉酶提取液 加I-KI 2~3滴 变化。
材料与实验器具： 植物材料：女贞叶片 实验器具：细滴管；试管及指形管； 烧杯；镊子、剪刀；移液管；标签 纸 试 剂：1 mol/L蔗糖溶液；甲烯蓝 溶液
操作步骤：
1.用短滴管吸取1M蔗糖溶液取0.5ml、 1ml、 2ml、 3ml 、4ml 分别放入 10ml 刻度试管中，加蒸馏水至10ml， 盖上塞子上下倒转混匀，配成0.05M、 0.1M、0.2M、0.3M、0.4M的糖液。