荧光分光光度计的工作原理
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荧光分光光度计的工作原理
在激发阶段,样品被激发光源发出的激发光照射。
激发光通过光源产生,并经过单色器产生具有特定波长和能量的单色激发光。
这个单色激发
光通过一个镜片聚焦到样品上。
在这个过程中,样品吸收光的一个部分,
将其激发到激发态。
在发射阶段,样品的激发态荧光发出。
样品中的分子经过激发态转换
成能量较低的荧光发射态。
发射光的波长较激发光长,且具有比激发光显
著更低的能量。
发射光通过样品室中样品表面进入分光器。
在分光器内,发射光被分为不同波长的成分。
分光器的主要作用是将
光按波长分散成不同的光束,方便探测器进行接收和处理。
分光器将不同
波长的发射光分别引导到探测器上。
探测器接收并检测发射光的强度。
常见的探测器包括光电二极管(Photomultiplier Tube, PMT)和光电二极管阵列(Photodiode Array)。
探测器可以测量发射光的强度,并将结果传输到计算机上进一
步处理和分析。
通过测量样品荧光发射光的强度和特定波长下的荧光发射光,我们可
以确定样品中特定成分的存在和浓度。
具体而言,对于有荧光标记的样品,其荧光发射强度与其浓度成正比关系。
因此,我们可以通过测量发射光的
强度来测定样品中特定成分的浓度。
1.高灵敏度。
荧光分光光度计能够检测非常微量的荧光发射光,因此
对于低浓度样品的检测非常敏感。
2.宽波长范围。
荧光分光光度计能够检测多个波长范围内的光,因此
适用于多种样品的测量。
3.选择性。
通过选择特定的激发波长和检测波长,可以选择性地测量
特定组分的浓度。
4.可定量分析。
荧光分光光度计能够通过测量荧光发射光的强度来定
量分析样品中特定成分的浓度。
总结起来,荧光分光光度计是一种基于样品在吸收光激发下发出荧光
发射的光学仪器。
通过测量样品发射光的强度和特定波长下的发射光,我
们可以确定样品中特定成分的存在和浓度。
荧光分光光度计具有高灵敏度、宽波长范围、选择性和可定量分析等优点,因此在科学研究和化学分析等
领域得到了广泛应用。