第10章 甾体激素类药物的分析 PPT课件

原理：磷酸盐在酸性条件下与钼酸铵反应生成磷钼酸铵，再被1-氨基-2 －萘酚-4-磺酸溶液还原，所得磷钼酸蓝在740nm有最大吸收。比较供试 液与对照液的吸收度控制药物中游离磷酸盐的量。
A B
6
9
C D
C 21 C
7、酯的反应
有些本类药物，在C17或C21位上连接有酯基，可将 其水解，产生相应的羧酸，再根据羧酸的性质进行鉴别 (如醋酸泼尼松，己酸羟孕酮等)。 醋酸,在酸性条件 下与乙醇生成醋 酸乙酯，有香气 己酸，有特臭
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C D A B
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部分本类药物用测定衍生物熔点的方法进行鉴别 1、缩氨基脲的生成 C3位的羰基和氨基脲发生缩合，生成缩氨基脲，可测定其熔点，对 药物进行鉴别。 COCl 如苯丙酸诺龙，产物熔点约为 182℃，熔融同时分解。 CH3 CH3 2、酯的水解 O KOH + +KCl+H2O C O C N OH C HO 若结构是有机酸的酯，可水解后测定产物熔点。 O 如丙酸睾酮C17位是丙酸和睾酮形成的酯，碱性水解后得到睾酮， NH +2HO +2H2O 熔点应为150~156 ℃。 2 m.p.201℃ 炔雌醇 3、酯的生成 O N 某些药物有羟基，可与酰卤生成酯，可测定酯的熔点进行鉴别。 HO 双肟m.p.238℃ 如炔雌醇 C3位上的羟基与苯甲酰氯成酯后，熔点为 200~202℃。 黄体酮 4、酮肟的生成 有些药物C3位的羰基可与羟胺形成肟，可测定肟的熔点对药物进行 鉴别。 如黄体酮与盐酸羟胺反应后生成黄体酮双肟，熔点为235~240℃。
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游离磷酸盐
对于地塞米松磷酸钠，倍他米松磷酸钠来说，二者都是在C21位 上羟基与磷酸形成的磷酸酯二钠盐，在药物的生产和贮存过程中可能 引入磷酸盐，因此，要对药物中的游离磷酸盐进行检查。 例：地塞米松磷酸钠中游离磷酸盐检查
精密称取本品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml使溶解；另取标准磷酸盐溶 液［精密称取经105 ℃干燥2 小时的磷酸二氢钾0.35 g ，置100ml量瓶中，加硫酸 溶液(3→10)10ml 与水适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀；临用时再稀释10倍］ 4.0ml，置另一25ml量瓶中，加水11ml；各精密加钼酸铵硫酸试液2.5ml 与1-氨基2-萘酚-4-磺酸溶液(取无水亚硫酸钠5g、亚硫酸氢钠94.3g 与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸 0.7g，充分混合，临用时取此混合物1.5g加水10ml使溶解，必要时滤过)1ml，加 水至刻度，摇匀，在20℃放置30～50分钟。照紫外-可见分光光度法（附录ⅣA）， 在740nm 的波长处测定吸光度。供试品溶液的吸光度不得大于对照溶液的吸光度。
雄性激素
OH CH3 17 CH3 10 3 O H H H
CH3 H H H
O CH3 O CH3 17 H
CH3
结构特点：
10 3
甲睾酮
O 1. 3-酮基； 丙酸睾酮 2. C17： 有羟基或酯基 丙酸睾酮：C 酯化后延长作用时间 17
O
雄性激素：母核有19个碳原子 蛋白同化激素：母核有18个碳原子 C10一般无角甲基
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C C
6、卤素的反应
对连接在C6,C9或其它位置上的氟或氯进行确认。 (1)卤素连接在母核的环上：需用氧瓶燃烧法破坏， 使有机卤素转变为无机卤素离子，再进行鉴别(如地塞 米松磷酸钠，丙酸倍氯米松)。 (2)卤素连接在侧链上：可通过加热水解方法产生卤 素离子，再进行鉴别(如丙酸氯倍他索)。
C C
21
20
17
结构特点：具有环戊烷并多氢菲母核。
2
C
D
16 15
A环、B环有一个或两个双键
A
4
B
6
8 7
3
甾
2
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肾上腺皮质激素(天然产物或天然产物的结构改造产物)：
O HO H CH3 11 H H CH3 20 OH OH
HO H CH3 11 9 F H H O 20 CH3 17 O OH H
HO H CH3 11 9 F H
1 2 3 O 2019/3/3
1 2
O 20 CH3 OH H 17 CH3
曲安西龙
3 O
地塞米松磷酸钠： 增强水溶性 地塞米松磷酸钠 3
H
雄性激素及蛋白同化激素(天然产物或天然产物的结构改造产物 )：
雄性激素同时具有蛋白同化激素作用，经结构改造后，雄性激素作用减弱， 同化作用保留或增强，成为蛋白同化激素。
CH3 H
CH3 H H
CH3 17
3
H
3 O
H
O CH3
黄体酮
醋酸甲地孕酮 结构特点：
1. 3-酮基； 2. C17： 有甲酮基 有些药物有羟基或酯基Fra bibliotek2019/3/3
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雌性激素 (天然产物或天然产物的结构改造产物)：
天然雌性激素为雌二醇，经结构改造得到高效及长效衍生物。
CH3 H A 3 HO H H
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•特殊杂质检查
甾体激素类药物通常要做“其他甾体”检查； 根据药物在生产和贮存过程中可能引入的杂质，有的药 物还需做“游离磷酸盐”、“硒”及有机溶剂残留量检 查等。
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其它甾体检查 甾体激素药物多由其它甾体化合物结构改造而来， 可能引入的杂质有合成的原料，中间体，副产物， 降解产物，异构体等，其结构一般未知，但具有 甾体结构，与药物结构类似。 方法：TLC或HPLC法进行检查。
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HPLC法
不少甾体激素药物用HPLC法测定含量，一般可在相同条件下检查其他 甾体。方法为主成分自身对照法。以供试品溶液的稀溶液为对照液， 将对照液主峰的面积作为参比，来控制药物中杂质的量。
例：黄体酮中“有关物质”检查： 取本品适量，精密称定，以甲醇溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶 液，作为供试品溶液，精密量取1ml，置50ml 量瓶中，加甲醇稀释至 刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶 液10μ l，注入液相色谱仪，调整检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高 约为满量程的50%。再精密量取供试品溶液 与对照溶液 各10μ l，分 别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的1.5倍。供试品 溶液色谱图中如有杂质峰，不得多于1个。其峰面积不得大于对照溶液 主峰面积的3/4 。
孕激素：：母核有21个碳原子C17-甲酮基 雌性激素 ：母核有18个碳原子A环为苯环，C17上常有炔基
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•鉴别试验
化学鉴别法 呈色反应：⊕与强酸反应(维生素D：醋酐+硫酸)
官能团反应
制备衍生物测熔点 光谱法 色谱法 UV IR TLC HPLC
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甾体激素与硫酸、盐酸、磷酸、高氯酸等强酸反应呈色。
第十章 甾体激素类药物的分析
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甾体激素类药物是一类具有甾体结构的激素类药物， 有非常重要的生理功能。
分类(按药理作用): 肾上腺皮质激素 甾体激素 类药物
肾上腺皮质功能不全 休克 重症肌无力 类风湿性关节炎、频发性哮喘等
性激素
雄性激素 蛋白同化激素 雌性激素 孕激素
11 12 1 19 10 5 9 18 13 14
药品名称 醋酸可的松 氢化可的松 泼尼松 醋酸泼尼松 泼尼松龙 醋酸泼尼松龙 地塞米松磷酸钠 炔雌醇 炔雌醚 颜色 黄或微带橙色 棕黄至红色并显绿色荧光 橙色 橙色 深红色 玫瑰红色 黄或红棕色 橙红色并显黄绿色荧光 橙红色并显黄绿色荧光 加水稀释后 颜色消失溶液澄清 黄至橙黄，微带绿色荧光，有少 量絮状沉淀 黄至蓝绿 黄至蓝绿 红色消失，有灰色絮状沉淀 红色消失，有灰色絮状沉淀 黄色絮状沉淀 玫瑰红色絮状沉淀 红色絮状沉淀
3 HO
H
OH
CH3 H A H H
OH C CH
17
17
雌二醇
炔雌醇
结构特点：
1. A环为苯环 2. 3-酚羟基； 3. C17： 羟基 有些药物有羟基成酯，或有炔基
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几种甾体激素类药物结构的比较：
皮质激素：有21个碳原子，C17-酮醇基，或该醇基形成的磷酸酯或磷酸酯的二 钠盐 雄性激素：母核有19个碳原子 蛋白同化激素：母核有18个碳原子 同：C17- 羟基或它形成的酯 异：C10一般无角甲基
-醇酮基有还原性，可与碱性酒石酸酮试液(红色Cu2O↓)，氨 制硝酸银试液(黑色Ag↓)，四氮唑试液反应。
O CH3 CH3 11 H H 20 OH
C6H5 C N N N Cl
+
C6H5 C 2e (H) C6H5 C6H5 N N H N N C6H5
17
3
H
C6H5
N
氯化三苯四氮唑 (TTC)
O CH3
17
氢化可的松： 天然皮质激素
2
1
CH3
3 O
H
醋酸地塞米松：肌 注延长作用时间 O
OH C
3
氢化可的松
主要可供分析基团：
1. 3-酮，C20酮基
OH O HO H CH3 11 9 F H H CH3 20 H OH
醋酸地塞米松
O
2. C11 ：
3.C17:
C
CH2OH
O
OH
ONa P O ONa
深红色
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还可用于皮质激素类药物杂质检 查(TLC)时的显色剂，皮质激素类 药物的含量测定
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O CH3 CH3 11 H H
R 20
还可用于含量测定
2、酮基的呈色反应
C3和C20位的酮羰基可与羰基试剂(2,4-二硝基苯肼，硫 酸苯肼，异烟肼等)反应，生成黄色的腙而用于鉴别。 如黄体酮的鉴别：取供试品约0.5mg，置小试管中，加 异烟肼约1mg和甲醇1ml溶解后，显黄色。
TLC： 多数甾体激素类药物的制剂，部分原 料药常采用TLC法进行鉴别。 如丙酸睾酮注射液：供试品和对照品 配制浓度一致。展开后，供试液主斑 点的颜色和位置应与对照液主斑点相 同。 HPLC： 部分甾体激素类药物用HPLC法测定 含量，可同时进行鉴别。 要求在一定色谱条件下，供试品的保 留时间与对照品的保留时间一致。
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3 O
H
3、甲酮基的呈色反应
黄体酮与亚硝基铁氰化钠反应，显蓝紫色，可认为是黄体酮的灵 敏、专属的鉴别反应。其它分子结构中含有甲酮基的甾体激素呈现淡 橙色或不显色。
4、酚羟基的呈色反应
雌激素的C3位上有酚羟基，可与重氮苯磺酸反应生成红色偶氮染 料(JP：苯甲酸雌二醇)。
5、炔基的沉淀反应
具有炔基的甾体激素药物(炔雌醇、炔诺酮等)，遇硝酸银试 液，即生成白色的炔化银沉淀。 R-C≡CH + AgNO3 → R-C≡CAg↓ + HNO3
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UV： 甾体激素类药物有共轭结构或有苯环，有紫外特征 吸收， 可规定其最大吸收波长max，max处的吸收度，或 某两 个波长处吸收度的比值进行鉴别(如中国药典中丙酸 倍氯米 松的鉴别 )。 IR： 对于本类药物，几乎所有药物原料药都采用IR进行 鉴别。
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C17- 羟基或它形成 的酯
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O 3
H2 C H
O CH3 17 H 10 H H H
蛋白同化激素
4
苯丙酸诺龙
孕激素 (天然产物或天然产物的结构改造产物)：
天然孕激素为黄体酮，口服无效，经结构改造后得到口服有效及长效衍生物。
O CH3 O O CH3
O CH3 17 CH3 H H
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TLC法：
多数杂质结构未知且与药物结构相似，用高低浓度对比法来检查。 例：醋酸氟轻松中“有关物质”检查： 取本品，加三氯甲烷-甲醇（9：1）溶解并制成每1ml中约含3mg的 溶液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置50ml量瓶中，加三氯甲 烷-甲醇（9：1）稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照薄层色谱 法（附录Ⅴ B）试验，吸取上述两种溶液各5μ l，分别点于同一 硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（97：3）为展开剂，展开，晾 干，在105℃干燥10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检 视。供试品溶液如显杂质斑点，不得多于2个，其颜色与对照溶液 的主斑点比较，不得更深。 氢化可的松和雌二醇见课本p252 展开剂：不同比例的二氯甲烷-乙醚-甲醇-水混合溶剂；苯-无水乙 醇；二氯甲烷-甲醇-水；三氯甲烷-甲醇等。 显色剂：碱性四氮唑蓝试液；硫酸-乙醇(2:8；1:1；3:7)；20%硫 酸；10%磷钼酸-乙醇液
苯甲酸雌二醇
己酸羟孕酮
黄绿色并显蓝色荧光
微黄色
淡橙色
由绿经红至带蓝荧光的红紫色
甾体激素与硫酸的呈色反应操作简便，不同药物可形成不同 的颜色或荧光而能相互区别，反应灵敏，为各国药典所应用
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不同的甾体激素药物有不同的官能团，利用官能团 反应可区别不同药物。 1、C17--醇酮基的呈色反应——肾上腺皮质激素类