非小细胞肺癌组织中miR-105、KIFC1的表达变化及其临床意义

山东医药2020年第60卷第30期
非小细胞肺癌组织中miR-105、KIFC1的
表达变化及其临床意义
李丹，朱静，吴君华，徐维国，陈明勇
绵阳市中心医院，四川绵阳621000
摘要：目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)癌组织中微小RNA-105(miR-105)及驱动蛋白家族成员Cl(KIFC1)的表达变化,并探讨其临床意义。

方法NSCLC患者120例，均接受手术治疗,术中留取癌组织及癌旁组织，采用qPCR法检测NSCLC癌组织与癌旁组织中miR-105、KIFC1,采用Pearson相关分析法分析NSCLC癌组织中miR-
105、KIFC1表达的相关性,分析癌组织中miR-105、KIFC1相对表达量与NSCLC患者临床病理参数的关系。

结果
NSCLC癌组织组织中miR-105、KIFC1的相对表达量分别为0.52±0.11,2.16±0.25,癌旁组织中miR-105、KIFC1的相对表达量分别为1.13±0.16,1.23±0.15,两者相比,P均＜0.05o NSCLC癌组织中miR-105、KIFC1相对表达 量呈负相关关系(=-0.602,P=0.000)。

NSCLC癌组织中miR-105JC IFC1相对表达量与肿瘤分期、组织分化程度有关(P均＜0.05)。

结论NSCLC癌组织中miR-105表达降低、KIFC1表达升高，两者负相关,miR-105、KIFC1表达与肿瘤分期及组织分化程度有关,有望成为新的NSCLC诊断、治疗的肿瘤标志物。

关键词:微小RNA-105；驱动蛋白家族成员C1;肺癌与非小细胞肺癌
doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2020.30.015
中图分类号:R734.2文献标志码:A文章编号：1002-266X(2020)30-0060-03
肺癌是全球范围内最常见的恶性肿瘤,近年来肺癌发病率及病死率逐渐增高，严重威胁人类健康［］。

目前肺癌的治疗主要包括手术治疗、化疗及靶向治疗等,但中晚期肺癌患者远期生存率较低,5年生存率仅约20%［2］。

非小细胞肺癌(NSCLC)是肺癌最为常见的类型男勺占肺癌所有类型的80%,但由于肿瘤具有较大的异质性，不同患者治疗的敏感性及预后差异较大⑶。

因此，有必要深入研究NSCLC的病因及发生发展的分子机制，寻找具有临床意义的诊断治疗靶点。

微小RNA(miRNA)是小的内源非编码RNA,近年来研究发现miRNA参与细胞增殖、迁移和凋亡过程，与感染、免疫及肿瘤等疾病密切相关⑷。

miR-105基因位于Xq28，在胃癌［5］、肝癌⑷等多种肿瘤组织中均存在异常表达的现象，并且miR-105的异常表达参与促进肿瘤的恶性进展，与患者不良远期生存率有关。

驱动蛋白家族成员Cl(KIFC1、又称为HSET,位于6p21.32,在肝细胞肝癌［7］、食管鳞癌［］中存在表达异常升高的现象，并具有促进肿瘤细胞恶性增殖和迁移的作用,有可能成为肿瘤的诊断治疗新靶点。

本研究观察了NSCLC癌组织中miR-105及KIFC1的表达变化，分
基金项目：四川省医学科研青年创新课题计划(Q18052)
通信作者:徐维国(E-mail：xwg522630@)析两者与NSCLC患者临床病理参数的关系，探讨其。

1资料与方法
1.1临床资料选取2018年6月~2019年12月绵阳市中心医院收治的NSCLC患者120例,男72例、女48例，年龄30~78(56.2±6.5、岁，腺癌75例、鳞癌45例，肿瘤直径＜5cm者67例、M5cm者53例，肿瘤分期I期30例、□期44例、皿期37例、W期9例男中瘤分化程度高分化33例、中分化40例、低分化47例，淋巴结转移49例、无转移71例。

患者均接受手术治疗，术中留取绿豆粒大小的癌组织及癌旁组织(距离癌组织5cm以上)，液氮速冻后,转运至标本库后置于-80七冰箱保存。

纳入标准:①经病理学检查明确诊断为NSCLC；②首次诊治,患者既往均未接受过放化疗、免疫治疗等治疗;
③临床病理资料完整。

排除标准:①合并感染性疾病、免疫系统疾病等;②合并其它器官恶性肿瘤;③合并心肝等严重器官功能不全。

患者及家属均知情同意并已签署知情同意书，本研究经绵阳市中心医院伦理委员会审核批准通过。

1.2NSCLC癌组织与癌旁组织中miR-105、KIFC1检测方法采用qPCR法。

取约100mg组织标本, TRIzol法提取组织中总RNA,DEPC水稀释，分光光度计测定总RNA溶液的浓度及纯度。

以总RNA为
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模板，按照TaqMan RNA反转录试剂盒说明书将总RNA反转录合成cDNA,并进行PCR扩增。

弓|物序列如下：miR-105正向引物为5'-AGGACU-CAAAUGCUCAG-3,,反向引物为5'-UCAAAUGCU-CAGACUCCUGU-3'；内参基因U6正向引物为5'-CGCTTCGGCAGCACATATACTAA-3',引为5'-TATGGAACGCTTCACGAATTTGC-3'；KIFC1正向引物为5'-TGAGCAACAAGGAGTCCCAC-3'，反向引物为5'-TCACTTCCTGTTGGCCTGAG-3',内参基因p-actin正向弓|物为5'-TGACGTGGACATCCG-CAAAG-3',反向弓|物为5'-CTGGAAGGTGGA-CAGCGAGG-3'。

总反应体系20p L,包括2p L cD-NA,0.1p L TaqDNA聚合酶、1p L上下游引物,p L 20x SYBR GreenI及0.4p L浓度为10mmol/L dNTPs o miR-105PCR反应条件为：95C、30s,95 C变性5s,0C退火34s、72C延伸10s,共40个循环。

KIFC1PCR反应条件为：95C,min,95C 变性15s,60C退火60s,72C延伸10s,共40个循环。

所有反应均在ABI7500实时定量PCR仪上完成。

以2-AA Ct表示组织中miR-105,KIFC1的相对表达量。

重复3次，取平均值。

1.3统计学方法采用SPSS20.0统计软件。

计量资料以心s表示，组间比较用t检验湘关性分析采用Pearson相关分析法。

P<0.05为差异有统计学。

2结果
2.1NSCLC癌组织与癌旁组织中miR-105,KIFC1相对表达量比较NSCLC癌组织组织中miR-105“KIFC1的相对表达量分别为0.52±0.11,2.16±0.25，癌旁组织中miR-105,KIFC1的相对表达量分别为1.13±0.16,1.23±0.15，两者相比，P均< 0.05。

2.2NSCLC癌组织miR-105、KIFC1对量的性NSCLC癌组织miR-105、KIFC1对表达量呈负相关关系（=-0.602,P<0.05）o
2.3癌组织中miR-105、KIFC1相对表达量与NSCLC患者临床病理参数的关系癌组织中miR-105、KIFC1相对表达量与NSCLC患者临床病理参数的关系见表1。

由表1可知,NSCLC癌组织中miR-105、KIFC1相对表达量与肿瘤分期、组织分化程度有关（P均<0.05、，而与性别、年龄、病理类型、肿瘤大小及淋巴结转移无关（P均>0.05）。

3讨论
肺癌是最常见的人类恶性肿瘤之一，也是全球癌症死亡的主要原因，发达国家高于发展中国家⑼。

表1癌组织中miR-105、KIFC1相对表达量与NSCLC患者临床病理参数的关系（珔±s）
临床病理参数n miR-105KIFC1
年龄
<60岁520.53±0.13 2.13±0.22
M60岁680.51±0.11 2.18±0.26
性别
男性720.51±0.10 2.17±0.26性480.54±0.14 2.14±0.24
病理类型
腺癌750.53±0.11 2.15±0.24
鳞癌450.50±0.10 2.18±0.26
肿瘤分期
I~ U期740.54±0.12 2.04±0.22
皿~W期460.48±0.08 2.35±0.29
组织分化程度
高中分化730.56±0.12 1.96±0.22
低分化470.46±0.08 2.47±0.28
肿瘤直径
W5cm670.54±0.12 2.15±0.26
>5cm530.50±0.10 2.17±0.24
淋巴结转移
有490.51±0.09 2.20±0.27
无710.53±0.12 2.13±0.23
近几十年来,我国肺癌的发病率和病死率有所增加。

在病理上，肺癌分为NSCLC和小细胞肺癌，NSCLC 占所有肺癌病例的75%~80%。

目前手术仍然是NSCLC患者最有效的治疗方法，有助于延长患者的生存时间［0］。

但是，在早期阶段,NSCLC很少表现出明显的症状，很多患者在疾病中晚期被诊断出，手术治疗效果不佳。

近年来，尽管在化学疗法、放射疗法和靶向疗法等方面均取得了进步，但晚期NSCLC 患者的预后仍然很差，严重威胁患者生活质量及生命健康［1］。

miRNA的表达及功能失调与肿瘤、自身免疫等多种人类疾病密切相关。

miRNA是一类天然的小非编码RNA,长度为18~22个核昔酸，能够转录后抑制其靶信使RNA的表达。

单个miRNA可以通过特异性结合mRNA的3'-UTR区来调控数百种靶mRNA的表达，有望成为预测或早期诊断NSCLC的肿瘤标志物［2］。

本研究中,NSCLC癌组织中miR-105的相对表达量为显著低于癌旁组织，目前其机制尚不清楚，可能与长链非编码RNA如LINC00261能够直接结合并抑制miR-105靶基因表达有关。

研究［13］发现,肺癌中LINC00261表达升高,过抑制miR-105,抑制游FHL1基的表达,促进肿瘤细胞的无限增殖。

本研究结果表明，NSCLC癌组织miR-105的分期及组织分化程度有关,表明癌组织中miR-105可能作为种抑癌基抑制NSCLC的生展。

究［14］报道,miR-105能够直接抑制磷脂酰肌醇3激
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酶/AKT信号通路的传导，发挥抑制肿瘤细胞恶性增殖的作用,而肿瘤发生时miR-105表达降低，其抑癌能力降低,导致肿瘤的分期分级升高。

驱动蛋白超家族蛋白(KIFs)是一类运动相关蛋白，可以附着在微管上并沿微管移动，以运输细胞器、蛋白复合物和信使RNA o此外男午多KIF通过参与染色体和纺锤体的运动，在有丝分裂中发挥重要作用［5］。

KIFs家族由45个成员组成，包括39个N-驱动蛋白、3个M-驱动蛋白和3个C-驱动蛋白。

KIFC1是KIFs家族中唯一在哺乳动物细胞中具有负端定向运动的成员，它位于6号染色体的短臂上,有4个转录本,正向链上共有20个外显子。

KIFC1参与许多生理和病理过程，是细胞内物质的交换并维持细胞存活的驱动力［6］。

KIFC1是潜在的癌症生物标志物和癌症治疗的分子靶标［7］。

本研究中，癌组织中KIFC1相对表达量显著高于癌旁组织，其机制可能是肿瘤细胞中转录因子TCF4表达增加，其能够结合KIFC1基因启动子区域并促进KIFC1基因转录，导致KIFC1表达升高［7］。

此外,本研究中，癌组织中KIFC1表达与肿瘤分期及组织分化程度有关，表明KIFC1表达随着分期和组织学分级的升高而表达增加,与促进肿瘤发生发展有关。

我们分析,其机制可能是KIFC1一方面促进Akt磷酸化,进而激活GSK30信号通路，促进肿瘤细胞的增殖,分期升高；,KIFC1子Snail的表达，促进上皮间质转化等基因的表达，导致肿瘤进展，组织分化程度降低［18］。

本研究中，癌组织中miR-105的相对表达量与KIFC1的相对表达量呈明显负相关，因而推测两者可能存在相互调控的关系。

有研究［19］通过双荧光素酶报告基因实验证实,KIFC1可作为miR-105的直接靶基因，miR-105结合于KIFC1的mRNA3'-UTR区，降低mRNA稳定性，降低KIFC1表达,从而抑制细胞性增殖及等生为。

综上所述,NSCLC癌组织中miR-105表达降低、KIFC1表达升高，两者负相关，miR-105、KIFC1分期及组织分程，
NSCLC的发生发展,有望成为新的NSCLC诊断、治疗的肿瘤标志物。

参考文献：
［1］Fathi Z,Syn NL,Zhou JG,et al.Molecular epidemiology of lung cancer in Iran：implications for drug development and cancer pre-vention［J］.J Hum Genet,2018,63(7)783-794.
［］钱桂生，余时沧•肺癌流行病学最新资料与启示［J］.中华结核和呼吸杂志,012,5(2)：36
［］黄渊锋，赵健，孙梅辉，等•非小细胞肺癌一代EGFR-TKI耐药
后使用三代EGFR-TKI的患者随访及治疗总结[J].中国医师杂志,020,2(5)：656-661.
[4]Rupaimoole R,Slack FJ.MicroRNA therapeutics:towards a new
era for the management of cancer and other diseases[J].Nat Rev Drug Discov,2017,16(3)：203-222.
[5]Zhou GQ,Han F,Shi ZL,et al.DNMT3A-mediated down-regula­
tion of microRNA-105promotes gastric cancer cell proliferation [J].Eur Rev Med Pharmacol Sci,2017,1(15)3377-3383.
[6]Ma YS,Wu TM,Lv ZW,et al.High expression of miR-105-1
positively correlates with clinical prognosis of hepatocellular carci­noma by targeting oncogene NCOA1[J].Oncotarget,2017,8(7): 11896-11905.
[7]Fu X,Zhu Y,Zheng B,et al.KIFC1,a novel potential prognostic
factor and therapeutic target in hepatocellular carcinoma[J] .Int J Oncol,2018,52(6)：1912-1922.
[8]Imai T,Oue N,Yamamoto Y,et al.Overexpression of KIFC1and
its association with spheroid formation in esophageal squamous cell carcinoma[J].Pathol Res Pract,2017,13(11):1388-1393.
[9]Torre LA,Bray F,Siegel RL,et al.Global cancer statistics,2012
[J].CA Cancer J Clin,2015,5(2)87-108.
[10]李武军，王朝晔，陈城，等•两种术式治疗早期非小细胞肺癌的
安全性和疗效比较[J]•中国药物与临床,2019(11)1831­1833.
[11]宋勇，杨雯.2014年晚期非小细胞肺癌内科治疗进展[J].解放
军医学杂志,015,0(1)：10-15.
[12]崔胜金，曹朝鹏,郭伟权，等•非小细胞肺癌早期诊断的潜在生
物标志物:血浆miRNA-23a和miRNA451[J].南方医科大学学报,019,39(6)：705-711.
[13]Wang Z,Zhang J,Yang B,et al.Long intergenic noncoding RNA
00261acts as a tumor suppressor in non-small cell lung cancer via regulating miR-105/FHL1axis[J].J Cancer,2019男0(25): 6414-6421.
[14]Shen G,Rong X,Zhao J,et al.MicroRNA-105suppresses cell
proliferation and inhibits PI3K/AKT signaling in human hepatocel­lular carcinoma[J].Carcinogenesis,2014,35(12)：2748-2755.
[15]Hirokawa N,Noda Y,Tanaka Y,et al.Kinesin superfamily motor
proteins and intracellular transport[J].Nat Rev Mol Cell Biol, 2009,10(10)：682-696.
[16]Sun Y,Zhang Y,Lang Z,et al.Prognostic and clinicopathological
significance of kinesin family member C1in various cancers：A me- ta-analysis[J].Medicine(Baltimore),2019,98(40):e17346.
[17]Teng K,Wei S,Zhang C,et al.KIFC1is activated by TCF-4and
promotes hepatocellular carcinoma pathogenesis by regulating HM-GA1transcriptional activity[J].J Exp Clin Cancer Res,2019,38
(1)：329.
[18]Xiao KH,Teng K,Ye YL,et al.Kinesin family member Cl ac­
celerates bladder cancer cell proliferation and induces epithelial-mesenchymal transition via Akt/GSK3p signaling[J].Cancer Sci, 2019,110(9)：2822-2833.
[19]赵继聪，王薇，刘建伟，等.miR-105靶向负调控KIFC1抑制非
小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力[J]•中国病理生理杂志,019,35(8)：1432-1438.
(收稿日期：2020-03-04)
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