Tunel染色步骤

Tunel染色步骤
染色是生物学实验中常用的一种技术手段，它可以标记和可视化细胞或组织中的特定分子或结构。

TUNEL（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling）染色技术是一种常用于检测细胞凋亡的方法。

以下是TUNEL染色的步骤：
准备工作：
1.去离子水：除去离子，避免离子干扰反应。

2. 去氧核酸酶（DNase）的酶标：新鲜制备，如购买的DNase酶标已开封或保存时间较长，需要用氧化热焓（将无水乙酸用过氧化氢气化后灭菌）处理一晚才可以使用。

步骤一：样本固定
1.取细胞或组织样本，放入离子缺失的缓冲液中，使其完全被液体覆盖。

2. 加入4%的 paraformaldehyde（或其他细胞或组织固定液），室温下固定10-15分钟。

3.将样本漂洗3次，每次10分钟，使用冷PBS漂洗。

4.用细胞色素染色法染色检测固定细胞总蛋白质。

步骤二：处理样本
1. 将细胞或组织样本渗透处理：将固定的细胞或组织置于PBS中含有0.5% Triton X-100（或0.1-0.2%的Bis-vinylsulfonyl] ethane等亲水试剂）的溶液中，室温下渗透30分钟。

2.将样本漂洗3次，每次10分钟，使用冷PBS漂洗。

3. 用DNase酶标法探测样本中DNA裂解。

步骤三：TUNEL反应
1.取TUNEL反应液，根据实验需要，在冷冻时保持在冰上。

2.用比色皿将样本恢复到PBS中，将足量的TUNEL反应液加入标本中，使标本完全浸润，尽量避免气泡。

3.在37℃下孵育1-2小时。

步骤四：反应终止
1.将标本移至冷藏，室温下用PBS漂洗3次，每次10分钟。

2.用缓冲液漂洗标本3次，每次10分钟。

步骤五：可视化与分析
1.在镜下放置标本。

2.加入螢光抑制剂或DAPI等染料，使用荧光显微镜检测标本。

总结：
TUNEL染色技术是一项用于检测细胞凋亡的重要方法。

它通过检测DNA的断裂末端来间接检测细胞凋亡。

整个TUNEL染色过程包括样本固定、样本处理、TUNEL反应、反应终止和可视化与分析等步骤。

通过这些步骤
的串联，我们可以获得较准确的细胞凋亡数据，并对生物学实验的结果进
行解释和评估。