薄层色谱讲义ppt课件

氧化铝、离子交换纤维素、硅藻土、乙酰 化纤维素及聚酰胺等。
2〕薄层板的制备
将1份吸附剂加3份左右的粘合剂 〔0.2%-0.5%羧甲基纤维素钠〕在研钵中向 一个方向充分研磨，使成均匀的糊状物， 然后再倒入已预备好的涂布器中，在玻璃 板上平稳地以直线方向挪动涂布器，使硅 胶浆均匀平整地涂布。室温枯燥后置烘箱 活化，普通在105-110℃加热30min，置枯 燥器中备用。薄层厚度普通为0.2-0.3mm
增修订工程
项目 类别
鉴别
检查
含量测定
特征
或指
纹图
显微
TLC
HP LC
GC
理化
通则
重金属 有害元
素
毒性 成分
其 他
谱
HPLC
TL CS
UV GC
其 他
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中成药
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提取物
10版 新增
05版 收载
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3
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2〕溶解样品的溶剂均有不同程度的洗 脱力，所以在上样的同时，样品在原位置 就呈环形展开，原点直径的分散促进了这 种展开，即所谓“上样环形色谱效应〞。 如样品在溶剂中溶解度很大，原点将变成 空心圈，这种效应对随后的线性展开呵斥 不利的影响，因此应选择样品在溶剂中溶 解度不宜太大的溶剂。
3〕供试液的溶剂在原点的残留，也会 改动展开的选择性，特别是供试液的溶剂 极性与展开剂的溶剂极性相差较大时更为 明显；因此，上样时同步枯燥或上样后枯 燥以除去原点残存的溶剂。如甲醇点后， 有残存甲醇时，就参与了流动相。所以应 该枯燥除去甲醇。
前往
技术参数 1.点样方式：喷雾式点样； 点样平台：最大可放
20x20cm薄板； 2.平台驱动：步进马达3200步/转，80步/mm，速
度10mm/s； 3.点样带长度：0〔点状〕-190mm；进样针规格：
100ul或500ul； 4.进样针驱动：步进马达1600步/转；〔接下〕 5.100nL/120步，100ul进样针；100nL/24步，
4〕固液萃取：将样品的提取液经过 小柱〔如：硅藻土柱〕萃取，萃取液再 经浓缩等处置后作为供试液。用固液萃 取或洗脱的方法制备样品，是色谱分析 常用的方法，目前用的较多的是AL2O3柱。
谢 谢！
薄层扫描仪 系指用一定波长的光 对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后 能发射出荧光的斑点，进展扫描，将扫 描得到的谱图和积分数据用于物质定性 或定量的分析仪器。
17 10
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10版 新增
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中药材
05版 收载
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10版 新增
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合计
05版 收载
620
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16
16
298 1363
37
32 162 6
709 12 8 24 1
10 90 1
321 33 16 19 4
本卷须知
1.玻璃板必需外表光洁、平整。假设洗 不净、有油斑，展开时就会有空缺的景象， 还会影响展开的质量。
2.要在室温下枯燥后，再放入烘箱中活 化。假设直接放入烘箱中，会出现裂痕 〔迅速枯燥，失水呵斥的〕，伸展不平整。
预制薄层板分常规薄层板及高效板两种。 运用预制板可提高时效及色谱的重现性。
预制板与自制板的比较：自制板吸附剂 相对多而且厚，吸附样品量比较大，展开 分别的效果比较好，显色明显。
2)分段萃取法：如龙胆泻肝丸先用正 己烷萃取，供当归鉴别用；经用丙酮萃取， 供用以鉴别马兜铃酸；最后用甲醇萃取再 经氧化铝小柱用甲醇洗脱，以鉴别龙胆苦 苷，是利用了各自不用的溶解度，用不同 极性的溶剂分段萃取，从而到达样品供试 液净化的目的
3〕液液萃取法：如小儿化毒散中牛黄 的鉴别，先用稀碱液将胆酸类成分溶出， 用乙酸乙酯洗涤；再在酸性条件下，用醋 酸乙酯萃取，以减少其他成分和杂质的干 扰。
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四、显 色
展开后的薄层挥尽展开剂，可用以下 几种方法察看被分别化合物在薄层色谱的 位置。
因此薄层色谱，尤其是常规薄层色谱，
有被视为是一种“难以驾驶〞的技术。为 了充分发扬薄层色谱技术在中药分析方面 的优势，提高色谱的分别度和重现性，留 意控制影响色谱质量的要素是非常重要的。 以下所述的几个方面不仅对定量分析是必 需留意的问题，对提高定性分析的质量也 是不可忽视的。
一、样品的预处置
普通地将被检样品用适宜的溶剂〔常用 甲醇、乙醇〕提取，直接上样，即可到达 分别，但未经处置的甲醇或乙醇提取液却 经常由于杂志太多无法得到高质量的薄层 色谱，尤其是复方中药制剂，样品的预处 置是一个值得留意的步骤。
• 第一节 概 述 • 第二节 薄层色谱的根本技术 • 第三节 影响薄层色谱分析的主要要素
第一节 概 述
• 薄层色谱法 是kirchner等人在五 十年代从经典柱色谱法及纸色谱的根 底上开展起来的一种色谱技术。薄层 色谱法具有设备简单、操作方便、分 别快速、灵敏度及分辨率高、显色剂 选择性大，以及制备薄层载量较纸色 谱大，而切割色带较柱色谱方便等优 点。并且在2019版药典中运用的更加 广泛
2.喷雾点样技术相比,接触式点样可将更多样品点在薄层板上
3.在点样过程中样品被浓缩到所选取长度的狭窄条带中条带状点样可得到最高的分辨率，对一
切薄层色谱任务都有益
4.CAMAG半自动点样仪5可以经过IQ/OQ质量认证并且运用于GMP/GLP环境中。
前往
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一、薄层板的制备
1〕吸附剂的选择 常用的吸附剂有：硅胶G、硅胶GF254 、
2.经常会出现拖尾景象，它会 使斑点间界限模糊，分别不好。产 生这种景象常与点样量、展开剂的 pH值等要素有关。
ⅰ点样过量，会导致超载拖尾， 处理的方法是选择适宜的点样量。ⅱ 展开剂的pH值，会影响中药材点样液 中酸、碱性成分在其中的解离方式， 不同方式的物质极性不同，在薄层板 上挪动的速度就不同，即会产生拖尾， 抑制方法是根据化合物的性质，选择 不同的pH值的展开剂；
50 16
17
7
1 56
9
115
14 31
412 3 17 9 34
17 71
175 13 20 7 30
40 243 22 1138 15 25 16 32
28 217 1
505 47 37 31 34
操作方法
• 薄层色谱就是将吸附剂均匀地铺 在玻璃板上，把欲分析的样品加到薄 层上，然后用适宜的溶剂展开而到达 分别、鉴别和定量的目的，由于层析 是在薄层上进展，所以称它为薄层色 谱法
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二、点 样
首先，将样品溶于适当溶剂中〔普 通选用的溶剂应该 1.尽量防止溶解度最 大的 2.粘度应小 3.沸点不宜太低 ，或 太高，普通用乙醇、丙酮等最好采用与展 开剂极性类似的溶剂，尽量防止用水〕。
然后，汲取溶液后，以垂直方向小心接触
板面点成圆点状，点样基线与底边的间隔，视 所用板的大小普通为1-2cm。点间间隔视情况为 1、1.5、或2cm，原点直径应不大于3mm如样品 容量较大或为了改善分别度，也可点成不同长 度，宽约2-3mm的狭细条带。点样后普通晾干， 或用电吹风吹干，这样跑的均一，效果好。
用单一溶剂不能分别时，可用两 种以上的混合展开剂，并不断改动混 合展开剂的组成和比例，以到达分别 的目的。
每种溶剂在展开剂中都有其一定作用：
1.展开剂中比例较大的溶剂起溶 解物质和根本分别的作用，极性相对 较小。
2.展开剂中比例较小的溶剂，极性 较大，对被分别物质有较强的洗脱力， 协助化合物在薄层上挪动，可以增大 Rf 值，但不能提高分辨率。
点样是薄层色谱的第一步，也是非 常关键的一步，它既关系到能否得到可 以重现的薄层色谱。也关系到定量测定 结果的准确与否，不良的点样是测定误 差的最主要来源。不良的点样主要有以 下几个方面。
1〕薄层板的原点位置对样品容积的 负荷量是极为有限的，假设上样容积过大
将会使斑点明显扩展，降低分别效率，还 会引起拖尾严重，斑点不清。
500ul进样针；
主要特点
1.点样准确度：优于0.5%；点样重现性：优于1.0%；
2.记忆：可储存10个方法，断点可保管至少十年；
3.显示：LCD，2行16位；
4.气体压力：4-6bar；气体耗费：1.0L/min；
5.电源：85-250V/47-63Hz/20VA
仪器引见 ：
1.把样品以条带状放射在TLC/HPTLC薄层板上
3.点样后也要用溶剂洗净毛细管，防止有 残留，或是由于供试品中含有大量的糖或 盐构成结晶，阻塞毛细管
三、展 开
a 展开剂的选择： 可根据待测成分的根 本理化性质，凭阅历或参考有关文献或按 照展开剂优化计算方法挑选，主要思索的 要素是溶剂系统的极性和选择性。
常用溶剂的极性次序是：
己烷〔石油醚〕﹤二硫化碳﹤苯﹤ 四氯化碳﹤二氯甲烷﹤乙醚﹤乙酸乙酯 ﹤丙酮﹤乙醇﹤甲醇﹤水。
例如：参苓白术散中的人参和甘
草的薄层鉴别，用甲醇直接提取有两 个扩斑点〔黑红色〕掩盖了人参很多 斑点。甲醇提取液用正丁醇处置后， 糖点去除后，图谱好多了。再经上注 后，那么斑点分别更明晰了，可得到 质量高的薄层色谱。
样品供试液净化的方法通常有：
1)单一溶剂萃取法：如浙贝母、平 贝母、洋金花等均利用在碱性介质下用 氯仿或苯将其所含的生物碱有选择地萃 取出来，而舍弃其他成分，使供试液得 以净化.
4〕上样安装对薄层外表的机械损伤 对色谱质量影响较大，故点样时小心操作 把损伤降低到最低限制。
前往
点样时还应该留意：
1.点样前应该用溶解供试品的溶 剂，清洗毛细管以防止上次点样时， 未洗净的毛细管中有供试品或者对照 品残留。
2.点样时普通应先点供试品再点 对照品。先点对照品的话假设毛细管 没洗净很能够影响实验结果。
多数种类展距7-9cm，少数 需用长度为15或20cm的板，展 距可在10cm以上。
展开时的本卷须知：
1.当运用某种溶剂时，特别是混 合溶剂，有时会出现边缘效应。为抑 制边缘效应，可在双槽展开箱的一侧 参与适量的展开剂或溶剂，密闭一段 时间〔普通为15min〕再行展开，亦可 以在展开箱内壁贴一浸满展开剂的滤 纸来抑制。
采用卡玛Nanomat 4手动点样仪，它操作简 便，点样位置准确，不损伤薄层，结果优于传 统手工点样。
半自动点样仪 全自动点样仪
操作程序：
一、 制 板 二、 点 样 三、 展 开 四、 显 色
薄层色谱法的操作及运用
第三节 影响薄层色谱分析的 主要要素
常规薄层色谱由于是一种“敞开系统
〞的色谱技术，与柱色谱的区别之一是除 资料及器材以外，外界环境条件对被分别 物质的层析行为影响很大，分别机制也很 复杂；其次由于分析全过程是不延续的， 所以操作技巧也明显的影响色谱质量；
前景
近年来，由于薄层扫描仪的出现以及高 质量的预制板、高效薄层板的运用以及上样 技术的改良。目前，薄层色谱曾经进入仪器 化、高效化、定量化及数据处置自动化阶段， 即向仪器化薄层色谱开展。
薄层色谱法作为一种敞开系统的色 谱技术对分析任务者仍具有吸引力。尤 其是对成分复杂的中药有着重要的意义。 中国药典2019年版共收载了784个中药种 类，其中就有1523项用于薄层鉴别工程， 含量测定45项，从而阐明了薄层色谱技 术在中药鉴别方面的重要性
缺乏之处
薄层色谱法在仪器自动化 程度、分辨率及重现性等方面 不如后来开展起来的气相色谱 法和高效液相色谱法。
第二节 薄层色谱的根本技术
原理
薄层色谱法是色谱法中运用最普 遍的方法之一，薄层色谱法按分别机 制可分为吸附、分配、离子交换等方 法。其中吸附色谱是最常用的层析方 法，吸附色谱的原理是利用吸附剂对 不同物质的吸附力大小，从而到达分 别的目的。
因此，当溶剂流过时，不同物质在
吸附剂和溶剂之间发生延续不断地吸附， 解吸附，再吸附，再解吸附。易被吸附 的物质〔吸附性强的物质〕，相对地挪 动慢一些，而较难吸附的物质相对地挪 动快一些。经过一段时间的展开，不同 的物质就被彼此分开，最后构成相互分 别的斑点。
【实验安装】
前沿线
色斑 起始线 图3-6 薄层色谱表示图
3.展开剂中参与少量酸，碱可抑 制某些化合物的拖尾景象。
4.展开剂中参与丙酮等中等极性 溶剂可使不相混合的溶剂混溶，并降 低展开剂的粘度，加快展速。
b. 展开方法
点样后的薄层板置入展开剂 的薄层展开箱中，密闭，用适宜 的展开剂展开。展开剂浸入薄层 下端高度不应超越5mm。点样处不 能接触展开剂，展开至规定展距 后立刻将薄层板取出，晾干，以 备检测。