临床输血前免疫血液学检查1

临床输血前免疫血液学检查
一、输血前检查的目的和要求
输血前检查的目的是选择与患者血型配合的各类血液成份，使之能在患者体内有效地存活，无不良反映，从而达到安全、有效输血的目的。

二、输血前检查的内容
输血前检查的内容包括如下几个方面：
1.患者的病史和标本等的检查、查对及处置。

2.受血者、献血者ABO和Rh血型鉴定。

3.不规则抗体的挑选和鉴定。

4.交叉配合实验。

5.血小板输注前的抗体检查和配合实验。

6.交叉配血结果的报告和发血。

(一)受血者的病史和标本等检查、查对及处置
1.病史资料和信息
受血者的有关资料，包括受血：者姓名、年龄、性别、床号、种族、临床诊断、输血史、药物史、怀胎史，专门是以往输血反映的记录等等，有助于解决有可能出现的血清学问题。

2.标本的要求
要求不超过3天的期限，反复输血的受血者更应注意抽取新的标本作配血实验，避免因回忆反映而产生的抗体漏检。

若是患者利用肝素医治，则应用鱼精蛋白，使标本凝结。

若是患者利用右旋糖酐等医治，应注意将红细胞作洗涤。

(二)受血者和供血者ABO和Rh定型
定型最适的反映温度为4℃，但在室温反映良好，所以常规的ABO定型实验仅在室温进行。

(1)定型方式：正、反定型的试管离心方式目前仍被以为是最可信赖的ABO定型方式。

1)定型试剂：有些ABO血型诊断试剂是以人的血清汇聚而制成的，但必需具有以下条件：第一，高效价(1：128)的IgM抗A或抗B。

第二，具较好的亲和性并非含冷凝集素。

第三，必需具有检测A2，A2B血型的能力。

第四，血清必需通过HIV，HCV，HBV等检查或经病毒灭活。

另外一些ABO定型试剂是由来自培育细胞株的单克隆抗体所制成。

2)ABO亚型的鉴定：ABO亚型的鉴定通常利用下列试剂：抗A、抗B、抗A1、抗H、抗AIA1红细胞、A2红细胞、B型红细胞和O型红细胞。

有些工作者在定型实验中，常规地选择应用抗AB抗血清，以避免错误地把弱反映性A或B型红细胞分类为O型。

一般抗AB试剂对Ax型红细胞可增加凝集反映的强度。

(2)ABO定型实验中的常见问题：造成这种正反定型不一致的原因主要有：
1)技术和管理错误：这是ABO定型中产生异样结果的主要原因，包括：标本或试剂弄错；器材不洁；试剂污染或失效；离心过度或不足；阳性反映产生溶血现象未能识别；漏加试剂；结果记录或判断错误；细胞与血清间比例不适当。

2)血清异样：血清蛋白引发缗钱状形成，影响反定型结果。

3)红细胞致敏：受免疫球蛋白致敏的红细胞，在含高蛋白介质的试剂中，可发生凝集。

4)异样基因型：ABO亚型的检查中，A、B抗原可能为弱抗原，难以检出。

5)近期输血：实验前曾输入过其它ABO血型不一致的血液，使血液标本成为混合血型的红细胞悬液，定型时显示“混合外观凝集”现象。

6)嵌合体血型：这种血型者体内有两类血型红细胞群体，定型时能够出现“混合外观凝集”现象。

7)疾病因素致使抗原减弱：某些白血病患者和难治性贫血患者中，ABO血型系统的抗原性可受到抑制，检出困难。

8)红细胞多凝集现象：红细胞因遗传或取得性的表面异样，发生多凝集现象。

9)取得性B：由于革兰阴性杆菌的作用，红细胞可取得“类B”的活性。

10)血型特异性物质太高：一些卵巢囊肿病例，血型物质的浓度很高，可中和抗A和抗B定型试剂，要取得正确的正定型结果，必需洗涤红细胞多次。

11)近期内进行大量的血浆置换医治：由于利用大量的非同型的血浆作置换医治，标本血清中含有所输供体提供的抗A或抗B抗体，造成反定型错误。

12)异样的血浆蛋白：受检者血浆中异样的白蛋白、球蛋白比例和高浓度的纤维蛋白原等致使缗钱状形成，造成假凝集现象。

13)不规则抗体的存在：受检者血浆中，含有ABO血型抗体之外的不规则抗体，与试剂红细胞上其他血型抗原系统的抗原起反映。

14)低丙种球蛋白血症：低丙种球蛋白血症(丙种球蛋白量减低)病例，可能会因免疫球蛋白水平下降而使血清定型时不凝集或弱凝集反映。

15)药物等因素：药物、右旋糖醉及静脉注射某些造影剂可引发红细胞凝集或类似凝集。

16)年龄因素：免疫系统尚未健全的婴儿、由母亲被动取得抗体的婴儿，或抗体水平下降的老人，实验时可出现异样的结果。

17)防腐剂因素：患者体内可能含有对防腐剂中的成份或对混悬介质的抗体，致使ABO定型过失。

2.Rh(D)定型和定型实验中应注意的问题
Rh定型主要鉴定D抗原（IgG抗D和IgM抗D）。

(1)致使Rh血型鉴定可能出现假阳性的原因：
1)受检细胞已被免疫球蛋白致敏，或标本血清中含有引发红细胞凝集的因子。

2)受检细胞与抗血清孵育的时刻太长，含高蛋白的定型试剂会引发缗钱状形成。

3)标本抗凝不妥，受检进程中出现凝血或小的纤维蛋白凝块，误判为阳性。

4)定型血清中含有事前未被检测的其它特异性抗体，造成假阳性定型结果。

5)多凝集细胞造成定型的假阳性。

6)鉴定用器材或抗血清被污染，造成假阳性。

(2)可能出现假阴性的原因
1)受检细胞悬液浓度太高，与抗血清比例失调。

2)漏加或错加定型血清。

3)定型血清的利用方式错误，没有按说明书进行。

4)离心后重悬细胞扣时，摇动使劲过度，摇散微弱的凝集。

5)抗血清保留不妥，致使失效。

(3)弱D型(D u型)血型及其鉴定：
D u型抗原是RhO(D)的弱抗原，这种抗原通常与大部份盐水抗D 试剂不产生直接凝集反映，而与部份的IgG抗D血型用间接抗球蛋白实验反映阳性。

因此当咱们第一次取得Rh阴性结果时，必需进行作Rh阴性确认实验，即用三种不同批号的IgG抗D定型，若是全数阴性方能够为该被检者为Rh阴性，不然，只要有一批为阳性，则能够为是
D u型。

3.弱D型(D u型)的临床意义
虽然D u比正常D阳性细胞抗原弱，但输给Rh阴性的受血者后，自然有免疫产生抗D的可能。

同时若同意Rh阳性的细胞后，D u型人也有可能产生抗D抗体。

因此，作为供血者，D u型归类为Rh阳性，作为受血者D u型者归类为Rh阴性者。

(三)不规则抗体挑选和鉴定
1.目的和原则
对受血者的血清和血浆，应作常规的抗体挑选实验，以发觉有临床意义的不规则抗体，所谓不规则抗体是指抗A和抗B之外的血型抗
体。

抗体挑选实验可在交叉配合实验之前进行或一路进行，如此有利于对患者抗体的初期确认及鉴定临床上具成心义的抗体，避免一些可能的情形而造成病情的延误。

抗体挑选实验的原则是让受检的血清与已知血型的试剂红细胞即挑选红细胞起反映，以发此刻37℃中有反映的抗体。

2.抗体挑选和鉴定技术
抗体挑选实验用的试剂挑选红细胞，一般是2或3个人份的O型红细胞成为一套试剂，每套试剂挑选红细胞中至少有以下常见的抗原：D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、Le a、Le b、K、k、Le、Fy a、Fy b、Jk a、Jk b，条件不足的实验室不必然具有Lu a、V、C w、Kp a、Js a类的抗原。

抗体挑选实验不必然能检出所有临床意义的抗体，一些抗低频率抗原的抗体或有剂量效应的抗体，可能被漏检。

这时需安排抗原性更完全和特异性更强的挑选细胞做实验，或用敏感度更高的技术做检查。

一旦抗体被检出，应作抗体鉴定实验，以肯定其特异性。

抗体鉴定实验包括以下主要内容：
(1)自身细胞检查：观察患者(受者)的血清与患者(受者)自身细胞的反映情形，肯定血清内是不是有自身抗体或自身抗体和同种抗体二者同时存在。

(2)利用试剂细胞中的谱细胞，应用各类抗体检查技术，检测患者的血清，肯定其抗体的特异性。

试剂谱细胞一般是由8--16个人的已知血型的O型红细胞配套组成，具有各类不同的抗原成份，按照谱细胞的反映格局一般能够鉴定常见的抗体。

选择不同的谱细胞，能够鉴定不同特异性的抗体
(3)当患者体内的同种抗体有二种或二种以上时，可采用吸收放散实验。

作抗体鉴按时，必需灵活应用盐水实验法、白蛋白介质法、酶技术、抗球蛋白实验、低离子强度介质法(Liss)、聚凝胺(Polybrene)法及凝胶法等各类技术，再结合吸收、放散等血清学手腕，对抗体的特异性作分析。

(4)要对谱细胞的反映结果有正确的解释，必需第一对一些特异性抗体的血清学特性进行了解，再分析反映结果。

肯定抗体特异性时能够综合运用以下的资料：
1)观察受检血清与每一个试剂谱细胞的反映结果。

2)观察受检血清与其自身细胞的反映结果。

3)观察受检血清与酶处置细胞的反映结果。

4)观察反映的格局，检查各个反映相的结果，包括不同的温度、悬浮介质或酶作用的情形，一些抗体的特异性与反映介质直接相关。

5)有否溶血现象。

6)在阳性反映的细胞中，反映强度有否不同，是不是出现剂量效应。

7)对自身红细胞上的抗原详细检查，从所缺少的抗原情形，提示是不是存在相应的抗体。

(四) 具有自身抗体的患者血清学检查
患者血清中存在的不规则抗体可分为两类:一类是同种抗体，另一类是自身抗体。

自身抗体又可分为冷自身抗体和温自身抗体两类。

1、患者血清中存在自身抗体的几种情形及其对血清学实验的影响
1．1 冷自身抗体
冷自身抗体是较常见的一种自身抗体，一般是IgM型的抗体，能在盐水介质中和自身红细胞反映。

理论上讲凡是37℃与自身红细胞不反映，而只有在低于37℃环境下才能和自身红细胞反映的抗体都可称为冷自身抗体。

实际上，冷自身抗体大多数只能在很低的温度下(例如4℃)与自身细胞反映。

因此，虽然大多数人的血清中都存在冷自身抗体，但在体内温度下，不会和自身细胞发生反映，也不会造成任何不良影响。

在罕有的病理情形下，患者的血清中存在极高效价的冷自身抗体，而且，在相对较高的温度下(例如室温)也能和自身细胞反映，这种情形会对患者血样的定型和相关血清学检查造成专门大影响，有时也对输血造成必然的影响。

温自身抗体
温自身抗体是指在37℃条件下能和自身红细胞反映的抗体。

当患者血清中含有温自身抗体时，患者一般均有些贫血或溶血症状。

温自身抗体可分为两类:大多数情形下为lgG类温自身抗体，极少数情形下也会存在IgM性质的温自身抗体。

患者血清里存在温自身抗体，实际上将难以取得在血清学上相配合的输血。

但这种情形特别要当心，因为自身抗体可能掩盖同种抗体
的存在，而同种抗体造成的输血反映极可能是致命的。

因此，倘使时刻允许，在输血前应排除自身抗体的影响，肯定是不是存在同种抗体。

2、自身抗体的处置和相关血清学检查
冷自身抗体的血清学检查
当怀疑患者血清中存在冷自身抗体时，可进行下列必要的检查:（1）若是患者血清中的抗体在室温(22℃左右)条件下和任何红细胞都不发生反映，则能够以为该抗体无临床意义，不需要做进一步的检测。

（2）若是患者血清在室温下和自身红细胞反映，第一应确认抗体的冷反映性抗体特性可将被自身血清凝集的红细胞别离置于37℃水浴和4℃冰箱中，当凝集在37℃完全散开而在4℃明显增强时，能够以为该抗体是冷反映性抗体。

（3）排除同种抗体，因为自身抗体能够掩盖具有临床意义的同种抗体，因此有必要确认血清中是不是存在与自身细胞不反映的同种抗体。

确认的方式是用自身红细胞在4℃进行吸收实验。

（4）在患者近期曾输过血或没有足够的红细胞等情形下，冷自身抗体吸收实验难以进行，现在能够在严格的37℃条件下，以抗球蛋白实验方式进行同种抗体挑选和鉴定实验。

温自身抗体的血清学检查
温自身抗体大多为IgG型抗体，因此患者直抗实验中抗IgG往往为阳性，同时血清中的抗体在盐水介质中并非和自身或试剂红细胞反映。

（1）血清中是不是存在温自身抗体
许多具有温自身抗体的患者，所有的温自身抗体均已被自身红细胞吸收.因此其血清中并没有可测出的温自身抗体。

只有在自身红细胞对温自身抗体的吸收已经饱和时，才可能在患者血清中出现温自身抗体。

（2）自身吸收法排除同种抗体
在患者血清中存在较强的温自身抗体时，温自身抗体可能掩盖同种抗体的存在，现在，可用自身吸收法测定同种抗体。

温自身抗体吸收实验的方式是:用通过放散的自身细胞与自身血清在37℃反映30min左右，检测自身吸收是不是完全。

当吸收上清液与被完全去除自身抗体的自身细胞不反映，则证明自身吸收已完全，能够进一步进行同种抗体的检测。

（3）异体细胞吸收法排除同种抗体
用异体细胞能够吸收自身抗体，但异体细胞也能吸收可能存在的同种抗体。

（4）稀释技术在同种抗体的效价比存在的自身抗体效价高时，能够将患者血清进行适当的稀释，以排除自身抗体的干扰，肯定同种抗体特异性。

（五）交叉配血实验
1、交叉配血实验原则和方式
原则
除非极为紧急情形，输血前病人(受血者)必需与献血者(待输血)进行交叉配血，其重要性，犹如在输血前必需再次确认受血者和献血者ABO血型必需相容。

可是为保证安全输血，受血者和献血者只是
ABO血型相容还远远不够，必需保证受血者血清中没有即刻或迟发性地凝集和/或溶解所输入的红细胞的抗体。

不论是IgM或IgG抗体，都可能在体内溶解所输入的红细胞，该类抗体称之有临床意义抗体。

献血者(待输血)血清中也不该有凝集和/或溶解受血者红细胞的抗体。

总之，输血前，必需进行交叉配血实验，交叉配血实验包括主侧交叉和次侧交叉配血。

主侧交叉配血:病人(受血者)血清(血浆)+献血者(待输血)红细胞；
次侧交叉配血:献血者(待输血)血清(血浆)+病人(受血者)红细胞。

应注意:
（1）用于交叉配血的病人(受血者)血液标本应该是方才抽取的新鲜血，而不是病人的陈腐血液标本。

待输血的标本应是从血袋方才剪下的，原已加热封锁两头的小管中的血液。

(2)应注意不能用玻片血凝实验进行交叉配血，要用试管法。

(3)要用生理盐水洗涤红细胞标本，去除血浆，预防纤维凝块的形成。

(4)红细胞浓度一般是2%－5%红细胞生理盐水悬液。

盐水交叉配血实验
生理盐水介质配血主次管中混合的红细胞和血清，当即离心，观察实验结果，只能检
出IgM类抗体所致受血者和献血者血型不相容。

人体内IgM类血型抗体最主如果ABO血型系统抗体。

交叉配血实验必需确认受血者和献血者ABO血型相容，但临床上最多见的迟发型输血反映是因为ABO血型之外的其它血型(如Rh血
型)IgG类抗体致使血型不相容。

IgG类抗体所致血型不相容在盐水交叉配血实验中不出现凝集，不能直接检出。

检测不完全抗体的交叉配血实验
只要病人(受血者)有输血史、怀胎史或病人血清已检出有临床意义抗体，只进行盐水交叉配血有专门大危险性，必需进行检测不完全抗体的交叉配血实验。

而该类实验又包括对不完全抗体的挑选检测和肯定检测实验。

蛋白酶(主如果术瓜酶)方式，促凝剂方式等都是筛检不完全抗体方式。

而肯定不完全抗体存在的最靠得住方式仍然是抗球蛋白实验。

微管凝胶实验用于抗球蛋白实验，又称微管凝胶抗球蛋白实验，维持了传统的抗球蛋白实验准确、靠得住的特点，克服了其烦琐费时的缺点。

因微管凝胶抗球蛋白实验不需洗涤进程，故应用微管凝胶抗球蛋白实验，可能使抗体筛检和与交叉配血实验同时进行，使对不完全抗体的检测和肯定实验同时进行。

2、抗体筛检和交叉配血实验结果分析
抗体筛检阴性，交叉配血相容
临床上绝大部份被检标本抗体挑选实验是阴性，交叉配血实验是相容的。

阴性的抗体挑选实验并非保证血清中就不含有临床成心义抗体，可能只是因为所应用的技术方式和对被检测的筛检红细胞没检测出病人血清中抗体。

盐水直接凝集实验交叉配血相容一般只是表示IgM类抗体和相应红细胞抗原相容，主如果ABO血型抗体，检测不出来具有临床意义的IgG抗体，因此，只用盐水直接凝集实验交叉配血，对体内可能有血型免疫抗体的病人仍是有专门大危险存在。

只有效酶法或促凝剂法等能检出常见免疫抗体的方式交叉配血，再以抗球蛋白
实验进行肯定检测，均呈阴性，才能保证待输的血和受血者血型相容。

抗体筛检阴性，盐水直接离心交叉配血不相容
在下列情形，抗体筛检可能是阴性，但盐水直接离心交叉配血不相容。

(1)献血者红细胞是ABO血型不相容。

(2)抗一A1存在于A2或AA个体血清中。

(3)存在在室温反映的同种异体抗体。

(4)献血者的红细胞是多凝集红细胞。

抗体筛检阴性，酶实验、抗球蛋白交叉配血实验等不相容若是交叉配血程序中有抗球蛋白实验，可能碰到下列情形。

(1)献血者红细胞DAT为阳性。

大约万分之一健康人有包被了IgG 和/或补体红细胞，并在抗球蛋白交叉配血实验中出现不相容。

（2）受血者血清抗体活性很弱，则抗体筛检实验呈阴性。

(3)抗体与低频率抗原反映。

人群中大约1%的未经选择的血清可能含有某些低频率抗原的抗体。

对盐水直接凝集为阴性者，继续做酶实验和抗球蛋白实验，以避免漏检IgG类抗体，如此做更为靠得住且极有必要。

抗体筛检阳性，交叉配血相容
若是血清与所有试剂红细胞反映，可是很多次或所有交叉配血实验相容，下列一些特异性抗体可能是其原因。

(1)自身抗-H。

O型红细胞有大量H抗原，而A1和AS细胞则有很少。

含有自身抗-H的血清可能凝集所有O型筛检试剂红细胞，可是不凝集Al和AS献血者红细胞。

大多数看来是抗-H的抗体实际上是抗
-IH。

这些抗体常是只在室温下发生反映，无临床意义。

(2)抗-LebH。

抗-LebH常常只在室温下反映，但可能由抗球蛋白实验检出。

(3)抗体筛检阳性，但献血员红细胞可能正好不含与其相应的抗原，因此配血能够相合。

抗体筛检阳性，交叉配血不相容
同种异体抗体，自身抗体，与试剂红细胞的不适当反映和"钱串状"红细胞形成都可能引发抗体筛检、交叉配血或二者都呈阳性反映。

除非输血是紧急情形，不然这些都必需在输血前查清楚。

(1)同种异体抗体存在，自身对照呈阴性。

当存在不规则同种异体抗体时，该抗体筛检实验常常是阳性的，可是该抗原频率影响到交叉配血不相容次数的多少。

当抗体筛检实验是阳性，该抗体特异性被鉴定出来时，能够第一用抗体试剂筛检献血者红细胞抗原，再选择其为阴性的血液作交叉配血。

若是存在多种抗体，或是与高频率抗原反映的抗体，或是抗体的浓度很低，这些情形下，由于可利用的试剂等很有限，可能不能鉴定出这些抗体。

若是时刻允许，应将标本送至血型参比实验室去检测。

当病人有抗高频率抗原的抗体时，其兄弟姐妹是相容血液的最有保证的来源。

若是必要，能够查询稀有血型档案。

（2）存在同种异体抗体，自身对照阳性。

在筛检实验检测同种异体抗体时，常规地要进行自身对照。

在2－3个月内已经同意了输血的病人体内同种异体抗体可引发自身对照细胞阳性。

病人血清中同种异体抗体可能和输入的献血员红细胞反映。

部份红细胞与抗体反映，能够出现混合视野凝集现象。

在迟发型输血反映的病人可发觉这种情形。

抗体浓度也可能超级低，只有抗原阳性红细胞经吸收一放散实验来鉴定有此抗体。

（3）冷反映自身抗体能引发难以肯定的阳性反映。

(4)温反映自身抗体也能引发难以肯定的阳性反映
(5)"钱串状"红细胞形成引发非真实的阳性结果。

一般常常是在光镜下鉴定，细胞积聚呈硬币堆积成串状态。

(6)试剂引发的问题。

针对各类药品和添加剂的抗体能引发抗体筛检和/或相容实验的阳性结果。

(五)血小板输注前的检查配血
随着成份输血的普遍开展和应用，和血液成份保留技术的提高，单采血小板的输注量已逐年上升。

但是随之而来的因血小板输血反映及输注无效成为临床上极为突出的问题。

因此，为预防和减少血小板输注反映或输注无效。

做好血小板输注前的标本检查和配型是目前行之有效的办法。

血小板抗体检查血小板的自身免疫和同种免疫是产生血小板输血反映和输注无效的主要原因。

因此通过实验室方式检出患者血清中的血小板抗体及其特异性可指导临床取得有效的血小板输注。

(1)血小板表面和自身抗体检查：
(2)血小板同种抗体检查：
(3)血小板交叉配血：临床输血中，一旦发觉血小板输血反映或输注无效，则必需当即寻觅原因。

若是是由于血小板抗体或HLA相关的
血小板同种抗体所致，应通过SEPSA方式采取配合性输注。

(六)交叉配血后血液的标记和发放
一、大体要求
输血记录要包括受血者姓名等大体资料，每一献血者(或每一袋待输血)辨别编码；ABO和Rh血型；受血者血清抗体筛检；交叉配血的结果和说明；输血日期；进行血清学实验工作人员姓名及本人签名；若是交叉配血实验问题未解决，而血液必需发出，要写明血清学实验发觉和结果。

发出每一袋血液之前，血库工作人员必需做到:
(1)确认每一血袋上的标签，要标明供血者的姓名和辨别编码，与受血者交叉配血实验种类和结果；若是在交叉配血前血液要发出，必需详细说明和标记。

(2)检查血液失效期，避免发出过时的血。

(3)检查血袋中的血，确信外观合格，颜色正常，无絮状物等悬浮异物，并记录检察
结果。

(4)以固定程序记录发、收血的工作人员名字(签名)，血液发出的时刻和日期。

(5)血库工作人员与进行输血操作的医护人员最后检查、核实和确认受血者和血袋血无过失。

二、输血前选择血液
(1)ABO相容性。

只如果可能，病人都应同意ABO血型一致的血液，但也能够选择ABO血型相容的血液。

只如果输给病人的血液成份。