依诺沙星分散片的人体相对生物利用度研究

依诺沙星分散片的人体相对生物利用度研究
谭志荣，欧阳冬生，韩仰，彭亮，陈尧，韩春婷，曾玲，郭栋，郑姣，
周淦，王连生，李智，刘昭前，胡东莉，刘英姿，王丹，周宏灏
（中南大学湘雅医学院临床药理研究所，长沙４１００７８）
［摘要】
目的：研究依诺沙星分散片（受试制剂）和依诺沙星片（参比制剂）的生物等效性。

方法：采用双周期
随机交叉试验设计。

分别予２０名男性健康志愿者依诺沙星受试制剂或参比制剂各０．４ｇ单剂量口服。

用ＨＰＬＣ法测定给药后血样中依诺沙星的浓度。

用ＤＡＳ软件计算药动学参数。

结果：受试制剂与参比制剂的ｃ。

分别为
（５３２０４－１２７５）和（５１６３±１２４１）ｎｇ・ｍＬ～；Ｌ。

（０．８８４－０．３７）和（０．８９４－０．３７）ｈ；ＡＵＣｏ－．２４ｈ（２３３１７４－７１８７）和（２２９０４
４－
７０９８）ｎｇ・ｈ－ｍＬ－。

；Ａｕｃｏ。

（２４５０２４－７３９６）和（２４０８５４－７３７７）ｎｇ・ｈ・ｍＬ～。

受试制剂的相对生物利用度为（１０２±
９）％。

结论：依诺沙星分散片与依诺沙星片生物等效。

［关键词】
依诺沙星；生物利用度；高效液相色谱法
［文献标识码】Ａ
【文章编号】１００３—３７３４（２００７）０５—０４０３—０３
【中图分类号］Ｒ９７８．１；Ｒ９６９．１
ＲｅｌａｔｉｖｅｂｉｏａＶａｉｌａｂｉｌｉｔｙｏｆｅｎｏｘａｃｉｎｄｉｓｐｅｒｓｉｂｌｅｔａｂｌｅｔｓ
ＴＡＮＺｈｉ—ｒｏｎｇ，ＯＵＹＡＮＧＤｏｎｇ—ｓｈｅｎｇ，ＨＡＮＹａｎｇ，ＰＥＮＧＬｉａｎｇ，ＣＨＥＮＹａｏ，
ＨＡＮＣｈｕｎ—ｔｉｎｇ，ＺＥＮＧＬｉｎｇ，ＧＵＯＤｏｎｇ，ＺＨＥＮＧＪｉａｏ，ＺＨＯＵＧａｎ，ＷＡＮＧＬｉａｎ—ｓｈｅｎｇ，
．ＬＩ
Ｚｈｉ，ＬＩＵＺｈａｏ—ｑｉａｎ，ＨＵＤｏｎｇ—ｌｉ，ＬＩＵＹｉｎｇ—ｚｉ，ＷＡＮＧＤａｎ，ＺＨＯＵＨｏｎｇ—ｈａｏ
（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ＸｉａｎｇｙａＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，
ＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１００７８，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙｏｆ
ａ
ｅｎｏｘａｃｉｎ
ｄｉｓｐｅｒｓｉｂｌｅ
ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍｅｔｈ－
ｔｅｓｔ
ｏｒ
ｏｄｓ：２０ｈｅａｌｔｈｙｍａｌｅｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｒｅｃｅｉｖｅｄｗｉｔｈ
ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ
ｓｉｎｇｌｅ
ｃｒｏｓｓｏｖｅｒ
ｄｏｓｅｏｆｅｎｏｘａｃｉｎ
ｔａｂｌｅｔｓ．Ｔｈｅｂｌｏｏｄｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍｔｈｅｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｔｏｍｅａｓｕｒｅｐｌａｓｍａｅｎｏｘａｃｉｎ
ｃｏｎ—
ｅｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
ｂｙＨＰＬＣ．ＴｈｅｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｐａｒａｍｅｔｅｒｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙＤＡＳＶｅｒｌ．０ｐｒｏｇｒａｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：
ｔｅｓｔ
ｏｒ
Ｔｈｅｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｐａｒａｍｅｔｅｒｓｏｆ
ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｔａｂｌｅｔｓｗｅｒｅ
ａｓ
ｆｏｌｌｏｗｅｄ：Ｃｍ“（５
３１７４－７
３２０±１
２７５）ＶＳ．
９０４
Ｐ
４－
（５
１６３４－１
２４１）ｎｇ・ｍＬ～；Ｌ．。

（０．８８±０．３７）ＶＳ．（０．８９４－０．３７）ｈ；ＡＵＣｏ．２４ｈ（２３
５０２４－７
ｎｏ
１８７）ＶＳ．（２２
７０９８）ｎｇ・ｈ・ｍＬ～；ＡＵＣｏ。

（２４
ｕｅ￥ｏｆｔｈｅｓｅｐａｒａｍｅｔｅｒｓｓｈｏｗｅｄ
ｅｎｏｘａｃｉｎ
３９６）ＶＳ．（２４０８５
４－７
３７７）ｎｇ・ｈ・ｍＬ～，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；ｔｈｅ
Ｖａｌ—
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＞０．０５）．Ｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙｏｆ
ｂｉｏ－
ｄｉｓｐｅｒｓｉｂｌｅｔａｂｌｅｔｓｗａｓ（１０２４－９）％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｅｎｏｘａｅｉｎｄｉｓｐｅｒｓｉｂｌｅｔａｂｌｅｔｓｗｅｒｅ
ｔｏ
ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ
ｅｎｏｘａｃｉｎｔａｂｌｅｔｓ．
ｅｎｏｘａｃｉｎ；ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ；ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］
依诺沙星（ｅｎｏｘａｃｉｎ，ＥＮＸ）为喹诺酮类抗菌药，广泛用于敏感细菌引起的呼吸系统、泌尿生殖系统、胃肠道、皮肤软组织、骨和关节感染及败血症等的治疗。

本试验在文献［１—７］的基础上建立了一个简单、快速、灵敏的ＨＰＬＣ方法，进行了依诺沙星分散片的相对生物利用度研究，为依诺沙星分散片的临床应用提供依据。

‘
股份有限公司成都迪康制药公司生产，规格：每片
０．１
ｇ，批号：０５０３０１。

参比制剂：依诺沙星片，山东
新华制药股份有限公司生产，规格：每片０．２ｇ，批号：０４０４１１６。

依诺沙星标准品由广东永正药业有限公司提供（纯度：９９．５％，批号：０５０３２１），内标帕珠沙星由北京集才医药技术开发有限公司提供。

甲醇和乙腈为色谱纯，购自广州迪马公司，其余试剂为分析纯。

仪器：岛津ＬＣ—ＩＯＡ型高效液相色谱仪，紫外检测器，带自动进样器和Ｃｌａｓｓ—ＶＰ５．０软件。

．．．——４０３．．．——
材料与方法
１药品、试剂和仪器
受试制剂：依诺沙星分散片，四川迪康科技药业
万方数据
蔓！ｉ！！竺』！！望型丛盟！！旦型ｇ！！塑！：！！！：！！塑！：１
２
受试者
２０例受试者均为男性，年龄（２４±２）岁，体重
（６７±１１）ｋｇ，身高（１７２±７）ｃｍ。

无烟酒嗜好。

实验前经病史询问、体格检查和实验室检查未发现异常。

无喹诺酮类药物过敏史。

试验前２周内未服任何药物。

试验前均签署知情同意书。

３试验方案与血样采集
采用双周期随机交叉试验设计。

２０例受试者随机分成两组，每组１０例。

一组首先服用受试制剂依诺沙星分散片，经１周清洗后再服用参比制剂；另一组给药顺序相反。

试验前禁食一夜，试验当Ｅｌ晨空腹ＩＺｌ服依诺沙星受试制剂或参比制剂０．４
ｇ，２００
ｍＬ温开水送服。

服药２ｈ后饮水。

试验期间统一饮食。

试验过程中由研究人员记录准确采血时间和药物不良事件。

于服药前（０时）和服药后０．２５，０．５，０．７５，１，
１。

５，２，３，４，６，８，１２，２４
ｈ从静脉采血５ｍＬ。

置于
ＥＤＴＡ抗凝试管中，立即将血样离心，分离血浆，于一２０℃保存待测。

４血浆浓度测定
４．１色谱条件
色谱柱为ＨｙｐｅｒｓｉｌＢＤＳ色谱柱（２５０ｍｍ
ｘ
４．６
ｒｆｌｍ，５肛ｍ）；流动相为０．５％磷酸（每ｌ
０００
ｍＬ中加
入５００肛Ｌ三乙胺）一乙腈＝８６：１４，流速为１．０ｍＬ・ｒａｉｎ一，柱温为４０℃。

紫外波长为２６６
ｎｍ。

４．２样品处理
取血浆２００弘Ｌ，加内标６９．５１／Ｌｇ・ｍＬ。

帕珠沙星１０卢Ｌ混匀，加５０％三氟醋酸２０ｐＬ，振荡２ｒａｉｎ，
４℃离心１０ｒａｉｎ（１３
０００
ｒ・ｒａｉｎ“），取上清液１００肛Ｌ
进自动进样器，２０肛Ｌ进样旧ｐ。

４．３标准曲线的制备
用空白血浆将标准储备液稀释成不同浓度的标准曲线浓度，按上述样品处理后，测定依诺沙星血浆标准曲线线性范围为４９．５—６
３３３．３
ｎｇ・ｍＬ～，浓度
（Ｙ，ｎｇ・ｍＬ一）与峰面积比（ｘ）的线性回归方程为
ｙ＝３９１５．２Ｘ一４８．６６５
５，回归系数（ｒ２）为０．９９９，最
小检测浓度为２４．８ｎｇ・ｍＬ～。

４．４提取回收率
配制高中低不同浓度６
３３３．３，７９１．５，４９．５
ｎｇ・ｍＬ“的依诺沙星标准溶液（未加内标）各５份，直接进样，得峰面积。

配制高中低不同浓度依诺沙星６
３３３．３，７９１．５，４９．５
ｎｇ・ｍＬ。

标准血浆各５份，按“样品处理”项处理后进行分析，得依诺沙星的峰面积。

根据标准溶液和血浆溶液峰面积比较得提取一４０４一
万
方数据生国堑麴銎查！塑！至笙！！鲞笙！塑
回收率，依诺沙星的血浆提取回收率均＞７０％。

４．５准确度与精密度
配制高中低不同浓度依诺沙星（６
３３３．３，
７９１．５，４９．５
ｎｇ・ｍＬ“）各５份，连续测定３ｄ，依诺沙
星高、中、低浓度的平均日内ＲＳＤ分别为１．８％，０．４％和０．５％，均＜１０％。

平均相对回收率分别为９９．０５％，９９．１１％和９５．１８％，在８０％一１２０％范围内。

日间ＲＳＤ分别为１．８％，０．４％和０．５％，均＜１０％。

４．６稳定性考察４．６．１溶液中的稳定性配制高中低不同浓度依诺沙星（６
３３３．３，７９１．５，４９．５
ｎｇ・ｍＬ“）各１０管，其
中各５管放置在室温下，另外各５管放置在４℃下，分别于０，２４和４８ｈ取出，按样本预处理过程处理后进样，计算依诺沙星浓度，室温、４℃下３ｄ变异系数均＜１５％，不同时间（０，２４，４８ｈ）的测定结果差异无统计学意义。

４．６．２冻融条件下的稳定性配制高中低不同浓度依诺沙星（６
３３３．３，７９１．５，４９．５
ｎｇ・ｍＬ。

１）血浆各
５份，在２４ｈ内２５℃一一２０℃之间反复融冻３次，分别于０，８，１２和２４ｈ按样品处理项对血浆进行处
理后测定，比较０，８，１２和２４ｈ依诺沙星浓度，无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。

４．６．３血浆中的稳定性配制高中低不同浓度依诺沙星（６
３３３．３，７９１．５，４９．５
ｎｇ・ｍＬ‘１）各１０管，置
于室温考察２４ｈ，分别于０，１２和２４ｈ按样品处理项对血浆进行处理后测定，比较０，１２和２４ｈ的依诺沙星浓度，无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。

４．６．４长期稳定性配制高中低不同浓度依诺沙星（６
３３３．３，７９１．５，４９．５
ｎｇ・ｍＬ。

）各５管，置于
一２０℃考察２０ｄ，分别于１，１０，２０ｄ按样品处理项对血浆进行处理后测定，比较１，１０，２０ｄ依诺沙星浓度，无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。

５
数据处理
‘
用ＤＡＳＶｅｒ１．０计算药动学参数，用ＳＰＳＳ软件进行统计分析。

ＡＵＣ。

．＋：。

，ＡＵＣ¨。

和Ｃ…经对数转换后，进行方差分析。

结
果
１
Ｉ－ＩＰＬＣ色谱图
空白血浆、空白血浆加依诺沙星标准品和内标、
服药后血浆样品的色谱图见图１。

依诺沙星及内标的保留时间分别为４．７和５．５ｒａｉｎ左右。

空白血浆中内源性物质不干扰样品的测定。

０
１
２
３
４
５６７
８
９
１０
ｆ，ｍｍ宅Ｆｌ血浆
０
√一
１
２
３
４
５６７８９
１０
ｔｌｍｌｎ
牵自血浆＋标准品＋ＩｌＩ标
０１２３４５５，墨ｇ１Ｕ
ｔｌｍｌｎ服药后２
ｈｍＬ样
１依诺沙星；２内标
图１依诺沙星ＨＰＬＣ测定法的色潜图
２血药浓度及药动学参数
依诺沙星受试制剂与参比制剂平均药一时曲线见图２，两制剂的体内药动学过程相似。

受试制剂与参比制剂的主要药动学参数见表ｌ，受试制剂对参比制剂的相对生物利用度Ｆ（ＡＵＣ¨。

）为（１０２±９）％（９５％一１３０％）。

６
｛
色４蠢
鬈２
鲁
０
６
１２１８
２４
Ⅳｈ
图２口服依诺沙星２种制荆０．４ｇ后的平均
血药浓度一时问曲线（ｎ＝２０）
表１
依诺沙星受试制剂和参比制剂的药动学参数
３生物等效性评价
、
依诺沙星受试制剂和参比制剂ｒ。

经Ｍａｎｎ—
Ｗｈｉｔｎｅｙ检验，２制剂间差异无统计学意义（Ｕ＝
０．１１１４，Ｐ＝０．９１１
３）。

ＡＵＣ¨２４ｈ，ＡＵＣ¨。

和Ｃ…经对
数转换后ｊ进行方差分析，结果表明两者在制剂间和
万
方数据生垦堑堑盘查！塑！堡星！垒鲞蔓ｉ塑
周期间以及服药顺序问差异无统计学意义。

Ｃ～，ＡＵＣ¨２４ｈ和Ａｕｃ¨。

双单侧ｌ一检验结果表明ｔｈｉｇｈ和ｔｈ均大于单侧ｔ。

．∞（１．７３４）。

受试制剂Ａｕｃ¨ｍ和ＡＵＣ¨。

的９０％可信区间分别为９７．９３％一
１０５．０３％和９７．９４％一１０５．０２％，均未超出参比制剂相应ＡＵＣ¨“。

和ＡＵＣ¨。

的８０％一１２５％的范围；受试制剂的Ｃ…的９０％可信区间为９８．７１％～１０６．７３％，也未超出参比制剂Ｃ…的７０％一１４３％的范围。

结果表明两制剂具有生物等效性。

讨
论
文献测定依诺沙星的方法大多采用液液萃取¨“］，本研究采用５０％三氟醋酸直接沉淀法进行测定，方法简便、结果准确、灵敏度高，适合于人体药动学研究。

邹建军等口１报道了利用高氯酸直接沉淀法对依
诺沙星直接检测，然而高氯酸的强酸性和强氧化性，对依诺沙星的稳定性有影响；另外，高氯酸属于危险品，使用过程需要时刻注意其安全性。

本试验采用三氟醋酸作为沉淀剂，避免了高氯酸的这些缺陷。

［作者简介】
谭志荣（１９７７一），男，硕士研究生，联系电话：
（０７３１）４８０５３８０，Ｅ—ｍａｉｌ：ｔａｎｚｒ＠１６３．ｃｏｍ。

［通讯作者】周宏灏（１９３９一），男，中国工程院院士，博士
生导师，主要从事临床药理学研究。

联系电话：（０７３１）
４８０５３７９．Ｅ．ｍａｉｌ：ＨＨｚｈｏｕ＠ｐｕｂｌｉｃ．ｃｓ．ｈｎ．ｃａｏ
【
参考文献］
Ｖ’ＩＬＣＨＥＺ
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ｅｎｏｘａｃｉｎ
ａｎｄ
４－ｏｘｏ—ｅｆｌｏｘａｃｉｎ
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编辑：况扶华／接受日期：２００６—０８—３１
．－－——４０５・－－——。