牛冷冻精液的质量检测与管控

国畜禽种业
中2019.01作者简介:马振华(1990-),男,甘肃省定西市人,大学本科,助理兽医师,主要从事牛冷冻精液制作,家畜繁殖技术推广工作。

牛冷冻精液的质量检测与管控
马振华
(甘肃省家畜繁育改良管理站733000)
摘要:在畜牧生产中,牛人工授精作为一项先进的实用技术得到应用和推广。

目前实验室进行的冷冻精液质量常规检验主要有剂量、精子活力、前进运动精子数、精子畸形率、细菌数等。

牛冷冻精液的生产包括精液采集、精液处理、精液冷冻3个环节,每个环节都会影响冷冻精液品质,种公牛冷冻精液生产的质量检测对提高种公牛饲养管理、营养调控、采精管理、牛冷冻精液制作程序把控等具有非常重要的指导意义。

关键词:牛冷冻精液;精子活力;精子数;畸形率;菌落数;质量控制1工作准备
(1)检测标准,牛冷冻精液检测标准按照GB4143-2008中
的技术要求和判定标准
[1]
,对0.25ml 牛冷冻细管精液的容量、有效精子数、精子活力、畸形率、菌落数5项指标进项检测。

检测严格按照“牛冷冻精液质量检测技术操作规程”完成。

(2)牛细管冷冻精液来源,甘肃省佳源畜牧生物科技有限责任公司库房随机批次抽取。

检测牛品种XM、XL、PA。

(3)检测室环境,室内保持清洁卫生,整齐、安静、无异
味。

室内配备控温、控湿设施,保证工作期间室温能控制在20~25℃,相对湿度控制在35%~55%。

工作时应穿洁净的工作服、鞋子,戴手套、口罩、帽子等。

(4)仪器设备,检测仪器设备的数量、性能和精度能满足检测工作要求,完好率为100%。

玻璃器皿类刷洗干净消毒、干燥后备用。

(5)耗材试剂类,无论是一次性的还是可重复使用的都必
须是无菌、无毒的。

化学试剂尽量使用分析纯,培养基及染色试剂可选择商品化的半成品。

2精液检测2.1剂量
每头牛随机抽取3支细管冷冻精液室温解冻,剪去超声波封口端,用细管专用推针把精液逐一推入小试管内,用玻璃吸管与捡卵器连接后吸尽小试管内的精液,读取吸管内精液量值,检测每剂量细管冻精容量不少于0.18ml。

2.2精子活力
2.2.1精液解冻
每头牛取3支细管冷冻精液置于37℃水浴中解冻40s,解冻后擦干水珠,用专用剪剪去超声波封口端,细管精液专用推针把精液逐一推入试管内,混匀活力≥35%。

2.2.2目测法
用移液器取解冻精液约10uL 置于载玻片的一端,为第一
样片,同样方法取精液约10uL 置于载玻片的另一端,为第二样片,分别盖上盖玻片立即在显微镜(10×40)下观察精子运动图像。

载物台温度应保持在38℃。

观察部位选择盖玻片的中部,每个样片观察3个以上视野,观察不同液层内的精子运动状态,进行全面评定。

至少观察2个样片,所有观察样片的平均值为最终评定结果。

2.2.3前进运动精子数
精液解冻方法同2.2。

用移液器吸取20μL 精液注入盛有
0.98ml 的3.0%氯化钠溶液的试管内混匀。

血球计数板用血盖片将计数室盖好,用移液器吸取10μL 稀释精液于血盖片边缘,
使稀释精液自行流人计数室,均匀充满,无气泡。

2.2.4精子畸形率
(1)抹片,各牛均取精液1滴,滴于载玻片一端,用另一边缘光滑的载玻片与有样品的载玻片呈一定夹角,将样品均匀地拖布于载玻片上。

自然风干5~10min,每样品制作2个抹片。

(2)固定,在已风干的抹片上滴上1.0~2.0ml 中性福尔马林固定液,固定15min 后用清水缓缓冲去固定液,自然风干。

(3)染色:将固定好后的抹片反扣在带有平槽的有机玻璃
面上,把姬姆萨染液滴于槽和抹片之间,让其充满平槽并使抹片接触染液,染色1.5h 后用清水缓缓冲去染液,晾干待检。

(4)镜检,将制备好的抹片在显微镜(400~600倍)下观
察,每个抹片观察200个以上的精子(分左、右两个区),取两片的平均值。

2.2.5细菌数
在超净化工作台内点燃酒精灯,平皿盖面标记上每个牛的
编号,75%酒精棉球擦抹整支细管,细管剪用酒精灯火焰消毒,剪去细管超声波封口端,用细管推针将整支细管的精液注入平皿内,及时将恒温53℃的营养琼脂培养基倾倒入平皿内10~15ml,并转动平皿使其与精液混合均匀。

同时将营养琼脂培养基倾倒入一没有精液的灭菌平皿内作空白对照。

待琼脂凝固
后,翻转平板,放置在恒温培养箱内,37℃培养48h [2]。

为保
持箱内湿度和防止水分的过分蒸发,可放置一小烧杯水,到达
培养时间立即计数。

3检测结果
冻精检测结果见附表。

4小结
(1)冻精外观和剂型、剂量检测结果为100%合格。

目前
各公牛站均采用精液细管封装机,只要设备正常使用,不会影响精液质量。

检测精液密度每剂量有效精子数低于800万个/剂,可通过精子密度测定仪调整
[3]。

精液处理室空气采用负压
通风方式,人员着消毒服进入,生产结束后进行全面清洗消毒操作台面,细管分装软管,创造无菌环境可有效降低细菌数。

资源育繁|畜业技术
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国畜禽业
中种2019.01
作者简介:尤伟(1979.11-),男,湖北省十堰市人,大学本科,助理畜牧师,主要从事畜禽生态养殖及技术推广。

*
通信作者。

人工授精+胚胎移植法诱发黄牛双胎的研究
尤伟1周剑辉2*陆丹2蒋莹2
(1,桂林绿缘农业开发有限责任公司541508;2,桂林市畜牧站541004)
摘要:本试验旨在探索自然发情的黄牛采用人工授精配种后,再运用胚胎移植的技术植入一枚胚胎从而获得双胎的技术;将20头3~6岁繁殖力强、健康无病的黄母牛随机分成2组,每组设10个重复,第2组为试验组,在母牛自然发情后采用人工授精后,再运用胚胎移植技术植入一枚胚胎;第1组为对照组,母牛发情后仅进行人工授精,观察母牛双胎率,并对比二者经济效益。

结果表明,第2组母牛双胎率70%,第1组母牛双胎率0%,第2组带来的经济效益大于第一组。

关键词:黄牛;自然发情;人工授精;胚胎移植;诱发双胎;经济效益;试验
(2)做好种公牛早期培育与调教工作,严格控制体型防止
形成草腹、保证公牛营养均衡合理供给,加强运动不少于2h/d,不得粗暴对待公牛,防止套采,避免公牛应激反应,采精场保持安静,采精器械、场地严格消毒,采取适宜的防滑措施,凡是接触精液的器具都应严格清洗消毒。

稀释液现配现
用,鸡蛋来源于无疫病的鸡场,新鲜洁净,冷藏保存,产后7d 后的鸡蛋不宜使用。

避免夏季、冬季高温和极寒冷天气,阴雨雪和异常气候天气、种公牛免疫注射后15d,疾病治疗期间均应停止生产,影响精液质量和种公牛健康。

参考文献:
[1]杨学时,等.全国牛冷冻精液国家标准培训论文汇编[C].吉林:吉林省农业科学院,1985.
[2]张坚中,徐铁铮.家畜冷冻精液[M].北京:中国农业科技出版社,1988.[3]金穗华.提高家畜冷冻精液质量的技术研究[J].中国奶牛,2005(4):29-31.
附表
检测结果
检验项目 评定标准
合格率% 不合格率%
冻精外观 细管无裂痕两端封口严密
100 0 剂型、剂量 微型 ≥0.18ml/剂
100 0 精子活力 ≥35% 97.20 2.80 前进运动精子数 ≥800万个/剂
94.30 5.70 精子畸形率 ≤18% 91.50 8.50 细菌数
≤800个/剂
98.60
1.40
牛品种改良在桂林市已推广几十年,并且获得很大成功。

品种改良对养牛业具有十分重大意义,具体表现在以下几个方面:第一、可以提高本地牛的杂交优势,如生长速度、增加单个体重、肉的产量和品质、减少生产成本等,增加饲养户的经济收入,促进牛业可持续发展;第二、提高牛业养殖的经济和社会地位,增加从业人员的经济收入;第三、增加人们对牛肉的需求量,提高人们身体体质和生活质量。

现阶段牛品种的改良主要方法有人工授精技术(AI)、胚胎移植技术、外源激素诱发双胎技术等
[1-3]。

引进优秀品种公牛冻精进行人工授精,
虽为养牛业带来巨大经济效益,但要品种改良做到可持续发展下去,必须推广更先进的品改技术。

随着科技工作者的不断努力,胚胎移植技术,外源激素诱发双胎技术应运而生。

但胚胎
移植技术成本高,受胎率低,生产时容易损伤母牛,难产概率大,以致犊牛存活率低等不足;而外源激素诱发双胎技术则操作程序太过繁琐,养殖户易产生抵触情绪,操作人员工作量大,因母牛陆续排卵时间达到3~5d,配种次数频繁,操作过程中母牛直肠容易受伤
[4]。

为解决上述两种技术存在的不足,笔
者进行母牛自然发情配种加配一枚胚胎技术,从而简化操作程序、提高母牛受孕率和降低成本。

1材料与方法1.1试验设计
将20头3~6岁繁殖力强、健康无病的黄母牛,随机分成2组,每组设10个重复,第2组为试验组,在母牛自然发情后采用人工授精后再运用胚胎移植的技术植入一枚胚胎(具体步
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