新试验一 芦丁的提取、分离与鉴定

实验一 芦丁的提取、精制与鉴定
一、实验目的与要求
l 、以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法；
2.掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷, 苷元和糖部分的鉴定方法。

R=-glu-rha 芦丁 R=H 槲皮素
芦丁溶解度: 冷水1: 8000 热水1: 200
冷乙醇1: 300 热乙醇1: 30
难溶于乙酸乙酯、丙酮, 不溶于苯、氯仿、乙醚、及石油醚等溶剂。

槲皮素溶解度: 冷乙醇1: 650 热乙醇1: 60
可溶于甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮、吡啶, 不溶于石油醚、乙醚、氯仿和水
中。

二、实验原理
本实验是利用芦丁在热水中和冷水中溶解度相差较大的性质, 用热水提取和精
制；芸香苷属于苷类化合物, 可被稀酸水解成槲皮素（苷元）, 葡萄糖和鼠李糖。

芦丁和槲皮素通过化学反应, 色谱法和光谱分析进行检识与鉴定。

三、实验内容
（一）提取分离和纯化
l 、芦丁的提取:
2.精制（重结晶）:
3、芦丁的水解:
O
O OH
OH OR
OH HO
流程图如下:
槐米（20g）
研碎, 于500ml烧杯中,
加350, 250ml水煮沸15min,10min
棉花过滤
150ml, 1%H2SO4 80倍水加热溶
解, 趁热抽滤
直火加热水解30min
放冷
抽滤, 沉淀水洗至中性不溶物（弃去）滤液
放置 1-1.5h, 抽滤
精品芦丁
（水浴浓缩至2ml）
(二)鉴定
l、化学检识
取芦丁和槲皮素少量, 置2支试管中分别加乙醇8ml使溶解
(1)盐酸—镁粉反应: 取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml, 置2支试管中分别加浓盐酸5滴, 再加少量镁粉, 观察颜色变化。

(2)Molish反应: 取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml, 置2支试管中分别加10%α—萘酚0.5ml摇匀, 倾斜试管, 沿管壁缓缓滴加浓硫酸0.5ml, 静置, 观察二层溶液界面处颜色变化, 并比较芦丁和槲皮素的区别。

(3)FeCL3反应: 取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml, 置2支试管中分别加1%三氯化铁乙醇液几滴, 观察颜色变化。

(4) AlCl3反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml, 置2支试管中分别加1%三氯化铝乙醇液几滴, 先置可见光下观察后, 置紫外灯下观察颜色变化。

(5)Mg(Ac)2反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml, 置2支试管中分别加1%乙酸镁乙醇液几滴, 观察颜色变化。

2.色谱鉴定
(1)槲皮素和芦丁的纸色谱鉴定
点样: 取圆形滤纸, 距圆心1厘米处用铅笔划一同心圆, 为起始线, 间隔1厘米处点样品（a,b,c,d）。

将点好样品的滤纸置于培养皿中分别用展开剂①、②径向展开。

a自制芦丁乙醇液 b芦丁对照品乙醇液 c自制槲皮素乙醇液 d槲皮素对照品乙醇液。

展开剂: ①正丁醇—醋酸—水(4: 1: 5, 上层)
②正丁醇—醋酸—水(4: 1: 5, 下层)
显色: ①可见光下观察色斑。

②喷1％AlCl3乙醇液, 再置紫外灯下观察荧光。

(2)糖的纸层析鉴定
点样: 取圆形滤纸, 同上法点样和展开（e,f,g）。

e水解液 f葡萄糖对照品水溶液 g鼠李糖对照品水溶液
展开剂: 正丁醇—醋酸—水(4: 1: 5, 上层)
显色：喷洒苯胺-邻苯二甲酸, 电炉上加热烘烤至色斑出现。

1，四, 分析讨论
芦丁酸水解时有何现象, 如何解释？
槲皮素和芦丁纸色谱鉴定时, 用BAW（4: 1: 5）上层和下层展开后, 解释两者的相对比移值大小关系？
葡萄糖和鼠李糖的纸层析鉴定时, 用BAW（4: 1: 5）上层展开后, 何者相对比移值较大, 为什么？
一，芦丁, 槲皮素鉴定（二）
二，槲皮素衍生物的制备
三，槲皮素五乙酰化物的制备: 取槲皮素结晶200㎎, 置于干燥三角锥形瓶中, 加5ml醋酐, 用毛细管滴加农硫酸一小滴, 振摇使完全溶解, 水浴上加热30分钟（注意应避免反应过程中引入水份）, 放冷后将反应液在搅拌下倾入100ml水中, 一直搅拌至油滴消失, 且有固体沉淀析出为止, 抽滤沉淀并洗涤, 干燥后以95％乙醇重结晶, 即得槲皮素五乙酰化物无色结晶。

四，芦丁的UV, HPLC, IR分析
（一）芦丁的UV分析（实验地点, 二号试验楼A栋411室）:
（二）芦丁的HPLC分析（实验地点, 二号试验楼A栋411室）:
1, 色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂, 以甲醇－1％冰乙酸溶液（32: 68）为流动相, 检测波长为257nm, 理论塔板数按芦丁峰计算不低于2000
2, 对照品溶液的制备: 精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品适量, 加甲醇制成每1ml含0.1㎎的溶液, 即得。

3, 供试品溶液的制备：取自制精制品约g, 精密称定, 置ml容量瓶中, 加入甲醇溶液ml, 超声处理30分钟, 放冷, 用甲醇定容至刻度, 摇匀, 过0.45μm 微孔虑膜, 即得。

4, 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl, 注入液相色谱仪中, 测定, 即得。

（三）芦丁的IR分析（实验地点, 二号试验楼A栋2室）：。