微生物的无菌操作及接种

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2、常用的接种方法
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连续划 ※划线 线法 接种
2、常用的接种方法
用接种针从菌种斜面上挑取少量菌体并把它穿刺到固体或半固体的深层培养基中的接种方法。
○ 用于厌气性细菌培养、检查细菌的运动能力、保藏菌种。 ○ 只适宜于细菌和酵母的接种培养
穿刺接种
2、常用的接种 方法
穿刺接种
斜面接种
三．接种：
四．接种:
○ 在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入待接斜面管。 从斜面培养基底部向上作“Z”形来回密集划线，勿划 破培养基。
○ 有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线 作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。
斜面接种
3）接种：
七．塞管塞： 取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。不要用试管去迎 棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。
殖动态。
无菌环境 的要求与 保持
2、超净工作台
超净工作台是为实验 室工作提供无菌操作 环境的设施，以保护 实验免受外部环境的 影响，同时为外部环 境提供某些程度的保 护以防污染并保护操 作者。
原理：超净工作台的 洁净环境是在特定的 空间内，洁净空气(进 滤空气)按设定的方向 流动而形成的。以气 流方向来分，现有的 超净工作台可分为垂 直式，由内向外式以 及侧向式。
八
七
六
五四
三
二一
接 穿 透 培 养 基 ？
． 穿 刺 接 种 时 能 否
放 ？
． 种 时
，
为
何
要
尽
包 括 哪 些 内 容 ？
． 验 操 作 过 程 的 无
备 工 作 ？
． 进 入 无 菌
室
前
要
． 无 菌 操 作 的 目 的
养 ？
． 如 何
做
好
超
净
台
污 染 工 作 ？
． 如 何 做 好 无
菌
室
． 什 么 是 无 菌 技 术
衣、帽、鞋。
无菌操作 要求
一．在操作中不应有大幅度或快速的动作； 二．使用玻璃器皿应轻取轻放。 三．在火焰上方操作； 四．接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌； 五．在接种培养物时，协作应轻、准。 六．不能用嘴直接吸吹吸管。 七．带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有
5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒。
垂直流超净工作台 水平流超净工作台 垂直流超净工作台
无菌环境的要求与保持
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风速保持在米/秒
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使用前打开紫外灯 照射40~60min
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请保持超净台整洁、 干燥，不要堆积杂 物；
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使用完毕，关闭煤 气开关或酒精灯；
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开启超净工作台工作 电源，关闭紫外灯， 并用75%的酒精或 0.5%过氧乙酸喷洒 擦拭消毒工作台面。
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使用完毕后，用消毒 液擦拭工作台面，关 闭工作电源，重新开 启紫外灯照射 15min.
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使用中，有机玻璃 罩受到污染，严禁 用酒精棉球擦拭， 请用含水棉布檫拭；
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定期做无菌试验， 以测定净化台是否 符合无菌要求。
超净台的使用与维 护
3、无菌器 材准备
无菌环境的要求 与保持
灭菌器材：玻璃器皿、培 养基、无菌衣等.
2. 旋松管塞 3. 接种环灼烧灭菌
斜面接种
斜面接种
3）接种：
拔管塞： 用右手的无名指、小指和手掌边先后取 下菌种管和待接试管的管塞，让试管口缓缓过火 灭菌(切勿烧得过烫)
斜面接种
3）接种：
取菌: 接种环冷却，轻沾取少量菌 体或胞子，然后将接种环移出菌种 管，注意不要使接种环碰到管壁， 取出后带菌接种环不可通过火焰。
接种的操作方法
（一）接种的准备工作
无菌环境
无菌室
超净工作台 无菌环境的 要求与保持
（1）无菌室的 结构：
应有更衣间、缓 冲间、操作间
应有良好的通风 条件，安装空调 设备及过滤设备
无菌环境的要求与保持
无菌室
无菌室的结构
无菌环境 的要求与 保持
二．无菌室的消毒和防污染
○ 无菌室内空气测试应基本达到无菌。 ○ 每日（使用前）紫外线照射（1~2小时）. ○ 每周用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时）. ○ 每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。 ○ 定期作实验室沉降菌计数，以检查无菌室微生物生长繁
工业生产中的微生物接种
2 、压差法
先用棉花球蘸消毒剂覆盖在种子罐接种口的橡皮塞上，消毒5 ～ 10min ，将连接在盛有菌悬液的容器上的接种针头迅速插入接 种口的橡皮小孔中，然后平衡种子罐与盛菌悬液的容器之间的压 力，接着降低种子罐的压力，菌悬液就会注入到种子罐里。接种 完后，再用消毒剂拭净接种口的小孔。
微生物无菌操作技术 接种技术 工业生产中的微生物接种
第四章 微生物无 单 击 此菌处操添作加及接正 种文 技具 术体 内 容
一、微生物无菌操作技术
无菌操作技术：指在微生物实 验工作中，控制或防止各类微 生物的污染及其干扰的一系列 操作方法和有关措施。
一、微生物无菌操作技术
一．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 二．接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀
2、常用的接种方法
划线接种
目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌 落，以便获得纯菌、活菌计数。
方法：
○ 分区划线法：适用于含菌量较多的标本 ○ 连续划线法：适用于含菌量较少的标本
2、常用的接种方法
划线接种
2、常用的接种方法
※划线接种
分区划线法
第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一 新鲜斜面培养基上的接种方法。
用于好气性微生物的接种。
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标记：接种前在试管上注明菌名、接种日期、接种 人姓名
点燃酒精灯。 接种：
1. 手持试管 将菌种管和待接斜面管用大姆指和 其他四指握在左手中，中指位于两管之间。斜 面向上，尽量放平。
无 菌 操 作 要 求
无菌操作要求
接种的操作方法
接种的基本程序
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常用接种方法
斜面接种
2 划线接种
液体接种 穿刺接种
（二）接种的操作方法
1、接种的基本程序
灭菌接种环 杀灭接种环沾染的微生物，以免污染标本
问 题 和 讨 论
将
量
菌
做是
的
的？
接
使
操
好什
使
消
种
试
作
哪么
用
毒
针
管
要
些？
与
和
直
平
求
准
保
防
工业生产中的微生物接种
工业生产中培养的菌种接入种子罐时，一般先制成菌悬液。 常用的方法有压差法、火焰封口法等。 、火焰封口法 种子罐的接种口周围设有沟槽，接种时先在沟槽里注入少 量酒精，然后用火焰点燃酒精，使接种口被包围在一堆火 焰之中，接着将菌悬液倒入种子罐中即可。
穿刺接种方法：
一．标记
二．点燃酒精灯
三．接种
1. 手持试管 2. 旋松棉塞 3. 接种针灼烧灭菌，把在穿刺中可能伸入试管的其
他部位也灼烧灭菌
2、常用的接种方法
※穿刺接种
3）接种 （4）拔出棉塞 （5）取菌：用冷却接种针的针尖沾取少量菌种 （6）穿刺：将接种针自培养基中心平稳、快速垂直刺入培养 基，至接近试管底部，然后沿接种线拔出 （7）塞上棉塞 （8）接种针灼烧灭菌
沾取标本 接种
灭菌接种环
•操作需在无菌室或超净工作台内进行 •无菌室、超净工作台使用前后需进行 消毒。 •实验使用的物品使用前后需严格灭菌
杀灭接种环沾染的微生物，以免污染环境
（二）接种的 操作方法
一．常用的接种方法
○ 斜面接种 ○ 划线接种 ○ 液体接种 ○ 穿刺接种
2、常用的接种方法
斜面接种：
一、微生物无菌操作 技术
Part.
微生物无菌操作技术与接种技术
二．原理：
○ 无菌技术：指在微生物实验工 作中，控制或防止各类微生物 的污染及其干扰的一系列操作 方法和有关措施。
○ 接种：将微生物接到适于它生 长繁殖的人工培养基上或活的 生物体内的过程。
二、微生物接种 技术
接种的准备工作
○ 无菌环境的要求与保持 ○ 进入无菌室前的准备 ○ 无菌操作的要求
八．将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。
斜面接种示意图
2、常用的接种方法
液体接种
由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。 操作方法：
○ 与斜面法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上 棉塞再轻轻摇匀。 ● 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种
消毒器材：接种试管、无 菌室内的凳子、试一．定期检查无菌环境的空气是否符合规定； 二．用紫外线灭菌处理30~60min； 三．检查无菌器材是否完备； 四．实验人员进入无菌室前先用肥皂洗手，然后用
75％酒精棉球将手擦干净。 五．缓冲室内换上洗净并经紫外线灯照射过的工作