定性实验方法学验证
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验证目的 : 1.评价和验证各定性检测项目的准确度、
精密度、灵敏度、特异性、等各项参数， 满足临床检测和认可组织的要求 . 2.验证厂家提供的试剂参数能在本实验室 得到重现 .
Method validation of the qualitative test
验证的内容 : 准确度 (Accuracy) 精密度 (Precision) 诊断敏感性（ sensitivity of diagnosis ） 特异性（ specificity ）:
Method validation of the qualitative test
一.准确度验证 :
1 . 检测已知值的 参考物质 ? 室间质评材料 (卫生部或者 CAP) ? 厂商提供的已赋值的参考材料 ? 分析用参考方法或决定方法定值的材料。 (如
dsDNA 检测 ) 2. 方法比较试验：样本数为 10-20 个，两种方法同
Method validation of the qualitative test
参考资料 :
1.《定性实验方法学验证管理程序》 KM-MP0301.20 2. User Protocaln for Evaluation of Qualitative Test
Performance Performance;Approved Guideline ，NCCLS-EP12-A
? 观察一致率 P0=（A+D）/ N
? 机遇一致率 Pc=(R1C1/N + R2C2/N) / N
? 实际观察一致率 = P0 — Pc
? 非机遇一致率 = 1- Pc
? Kappa= （ P0 — Pc）/ （1- Pc）
阳性 方 法 阴性 A
合计
方法 B 阳性 阴性 合计
A
B
R1
C
D
R2
C1 C2 N
Method validation of the qualitative test
四.特异性 :
1.验证方法 ：选取 20份正常健康人血清（一般取自健康体检 者），计算其检测阴性结果所占百分率。
2.样本来源 :体检样本 ,体检者本人填写 <健康调查表 >确认符合 要求后即可 .
NOTE: 部分项目在健康体检人群中阳性率也很高 ,此类项目特 异性验证很难执行 ,建议引用厂家说明书 .
三.诊断敏感性 :
1.验证方法 :取10-20 份已知真阳性的样本（样本来源困难时 可以酌情减少）。用常规检测方法检测，计算检测阳性的 样本占样本总数的比例。
2.样本来源 : 临床上明确诊断的阳性病人血清； 厂家提供的明确为阳性的样本； PT 中的阳性样本； 决定性参考方法检测阳性的样本；
以上阳性样本来源紧张时，可以进行稀释（如 2：3，3：4这 样稀释）
评价和验证各定性检测项目的准确度精密度灵敏度特异性等各项参数满足临床检测和认可组织的要求
定性实验的方法学验证
Method validation of the qualitative test
李慧源 临床免疫学实验室 Kingmed clinical immunology Lab
Method validation of the qualitative test
适用范围 :一个项目有两种以上的方法或者两台以上 的仪器 (包括同一型号的仪器 )同时检测 ,需要进行一 致性比对 . 定量检测中 ,报告单位不同的不需要比对
首次比对选取 40份(20) 样本 ,最好阴阳性各半
↓
随机每 8份分成一组
↓
两种方法 (或两台仪器 )每天平行检测一组样本
↓
将所有检测结果汇总
Method validation of the qualitative test
几个重要概念及计算公式的回顾 :
1.诊断敏感性真阳性 /（真阳性 +假阴性） X 100% .
2.特异性 :
指将实际无病者检测为阴性的百分率。 计算公式为：真阴性 /( 真阴性 +假阳性） X 100% .
时测定同样的样品，用 KAPPA 检验方法分析两种 方法检测结果一致性 .(比如 HBV 酶免法和发光法 比对 )
Method validation of the qualitative test
二.精密度验证 :
1.批内精密度 :同一份样本在同一批次内平行重复检测 10 次.然后计算均值 ,SD 和CV.
2.批间精密度 :同一份样本连续检测 10 天,每天平行检 测双孔 .然后计算均值 ,SD 和CV.
Note:1. 用S/CO 比值进行统计计算 . 2.最好选择临界值 ,或弱阳性样本 .
判断标准 :批内 CV 小于 15%, 批间 CV 小于 25%.
Method validation of the qualitative test
比如麻疹病毒 IgG,CP-IgG,MP-IgG 等一系列病毒抗体 IgG. 因为很难确认体检者既 往是否有过感染史 ,而IgG 抗体在体内存留时间长 .因此很难收集到真正意义上的阴 性样本 .
Method validation of the qualitative test
补充 1: 同一项目不同检测方法或仪器的比对
验证方法 1: 找临界浓度的标准品 (可要求厂家提供 ), 连续检测 20次,95% 的结果落在临界范围 即可 .
验证方法 2: 连续统计一段时间的检测结果 ,处于临界 范围的结果比例小于 5% 即可 .
Method validation of the qualitative test
甲肝 IgM 定性项目方法学验证 .doc 2008 年3月优生仪器比对 .doc
同一项目不同检测方法或仪器的比对 CUTOF值F 验证
Method validation of the qualitative test
实施验证的时机 : ? 引进新检测项目及方法。 ? 已确立的检测方法的更新。 ? 原有的检测方法应用扩大到新的检测范
畴。 ? 质控指标表明已确立的检测方法性能正
随时间而改变。
↓
Kappa 检验 ,评价一致性
Method validation of the qualitative test
补充说明 :关于 CUTOFF 值验证 定量实验但是报告定性结果的才需要做 CUTOFF 值验证 .(比如 PCR 室的乙肝 DNA 定性 ).
Method validation of the qualitative test
Method validation of the qualitative test
3.Kappa 检验 :
用与两组定性结果一致性比较 .用公式 计算得到一个 kappa 值. kappa 值位 于〔 -1,1〕, Kappa ≥075时两组结果一 致性较好； 0.75>Kappa≥0.4 两者一致 性一般； Kappa<0.4 表示两者一致性 很差 .
精密度、灵敏度、特异性、等各项参数， 满足临床检测和认可组织的要求 . 2.验证厂家提供的试剂参数能在本实验室 得到重现 .
Method validation of the qualitative test
验证的内容 : 准确度 (Accuracy) 精密度 (Precision) 诊断敏感性（ sensitivity of diagnosis ） 特异性（ specificity ）:
Method validation of the qualitative test
一.准确度验证 :
1 . 检测已知值的 参考物质 ? 室间质评材料 (卫生部或者 CAP) ? 厂商提供的已赋值的参考材料 ? 分析用参考方法或决定方法定值的材料。 (如
dsDNA 检测 ) 2. 方法比较试验：样本数为 10-20 个，两种方法同
Method validation of the qualitative test
参考资料 :
1.《定性实验方法学验证管理程序》 KM-MP0301.20 2. User Protocaln for Evaluation of Qualitative Test
Performance Performance;Approved Guideline ，NCCLS-EP12-A
? 观察一致率 P0=（A+D）/ N
? 机遇一致率 Pc=(R1C1/N + R2C2/N) / N
? 实际观察一致率 = P0 — Pc
? 非机遇一致率 = 1- Pc
? Kappa= （ P0 — Pc）/ （1- Pc）
阳性 方 法 阴性 A
合计
方法 B 阳性 阴性 合计
A
B
R1
C
D
R2
C1 C2 N
Method validation of the qualitative test
四.特异性 :
1.验证方法 ：选取 20份正常健康人血清（一般取自健康体检 者），计算其检测阴性结果所占百分率。
2.样本来源 :体检样本 ,体检者本人填写 <健康调查表 >确认符合 要求后即可 .
NOTE: 部分项目在健康体检人群中阳性率也很高 ,此类项目特 异性验证很难执行 ,建议引用厂家说明书 .
三.诊断敏感性 :
1.验证方法 :取10-20 份已知真阳性的样本（样本来源困难时 可以酌情减少）。用常规检测方法检测，计算检测阳性的 样本占样本总数的比例。
2.样本来源 : 临床上明确诊断的阳性病人血清； 厂家提供的明确为阳性的样本； PT 中的阳性样本； 决定性参考方法检测阳性的样本；
以上阳性样本来源紧张时，可以进行稀释（如 2：3，3：4这 样稀释）
评价和验证各定性检测项目的准确度精密度灵敏度特异性等各项参数满足临床检测和认可组织的要求
定性实验的方法学验证
Method validation of the qualitative test
李慧源 临床免疫学实验室 Kingmed clinical immunology Lab
Method validation of the qualitative test
适用范围 :一个项目有两种以上的方法或者两台以上 的仪器 (包括同一型号的仪器 )同时检测 ,需要进行一 致性比对 . 定量检测中 ,报告单位不同的不需要比对
首次比对选取 40份(20) 样本 ,最好阴阳性各半
↓
随机每 8份分成一组
↓
两种方法 (或两台仪器 )每天平行检测一组样本
↓
将所有检测结果汇总
Method validation of the qualitative test
几个重要概念及计算公式的回顾 :
1.诊断敏感性真阳性 /（真阳性 +假阴性） X 100% .
2.特异性 :
指将实际无病者检测为阴性的百分率。 计算公式为：真阴性 /( 真阴性 +假阳性） X 100% .
时测定同样的样品，用 KAPPA 检验方法分析两种 方法检测结果一致性 .(比如 HBV 酶免法和发光法 比对 )
Method validation of the qualitative test
二.精密度验证 :
1.批内精密度 :同一份样本在同一批次内平行重复检测 10 次.然后计算均值 ,SD 和CV.
2.批间精密度 :同一份样本连续检测 10 天,每天平行检 测双孔 .然后计算均值 ,SD 和CV.
Note:1. 用S/CO 比值进行统计计算 . 2.最好选择临界值 ,或弱阳性样本 .
判断标准 :批内 CV 小于 15%, 批间 CV 小于 25%.
Method validation of the qualitative test
比如麻疹病毒 IgG,CP-IgG,MP-IgG 等一系列病毒抗体 IgG. 因为很难确认体检者既 往是否有过感染史 ,而IgG 抗体在体内存留时间长 .因此很难收集到真正意义上的阴 性样本 .
Method validation of the qualitative test
补充 1: 同一项目不同检测方法或仪器的比对
验证方法 1: 找临界浓度的标准品 (可要求厂家提供 ), 连续检测 20次,95% 的结果落在临界范围 即可 .
验证方法 2: 连续统计一段时间的检测结果 ,处于临界 范围的结果比例小于 5% 即可 .
Method validation of the qualitative test
甲肝 IgM 定性项目方法学验证 .doc 2008 年3月优生仪器比对 .doc
同一项目不同检测方法或仪器的比对 CUTOF值F 验证
Method validation of the qualitative test
实施验证的时机 : ? 引进新检测项目及方法。 ? 已确立的检测方法的更新。 ? 原有的检测方法应用扩大到新的检测范
畴。 ? 质控指标表明已确立的检测方法性能正
随时间而改变。
↓
Kappa 检验 ,评价一致性
Method validation of the qualitative test
补充说明 :关于 CUTOFF 值验证 定量实验但是报告定性结果的才需要做 CUTOFF 值验证 .(比如 PCR 室的乙肝 DNA 定性 ).
Method validation of the qualitative test
Method validation of the qualitative test
3.Kappa 检验 :
用与两组定性结果一致性比较 .用公式 计算得到一个 kappa 值. kappa 值位 于〔 -1,1〕, Kappa ≥075时两组结果一 致性较好； 0.75>Kappa≥0.4 两者一致 性一般； Kappa<0.4 表示两者一致性 很差 .