用于寨卡病毒免疫测定的方法和试剂[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201980056406.2
(22)申请日 2019.09.18
(30)优先权数据
62/732964 2018.09.18 US
(85)PCT国际申请进入国家阶段日
2021.02.26
(86)PCT国际申请的申请数据
PCT/US2019/051630 2019.09.18
(87)PCT国际申请的公布数据
WO2020/061135 EN 2020.03.26
(71)申请人 美国西门子医学诊断股份有限公司
地址 美国纽约州
(72)发明人 S ·帕蒂班德拉　K ·辛格　
(74)专利代理机构 中国专利代理(香港)有限公司 72001代理人 任晓华　李唐(51)Int.Cl.G01N 33/58(2006.01)G01N 33/543(2006.01)G01N 33/569(2006.01)
(54)发明名称
用于寨卡病毒免疫测定的方法和试剂
(57)摘要
本文公开了用于检测来自受试者的生物样
品中的抗寨卡IgM抗体和/或诊断受试者中的寨
卡病毒感染的免疫测定方法和试剂。

还公开了用
于执行公开的方法的算法。

公开的免疫测定方
法、试剂和算法使得能够有效和可靠定性检测抗
寨卡病毒抗体和快速确定人受试者中的寨卡病
毒感染的假定阳性结果。

权利要求书4页 说明书18页 附图1页CN 112585468 A 2021.03.30
C N 112585468
A
1.检测来自人受试者的生物样品中的抗寨卡病毒IgM抗体的方法，所述方法包括第一免疫测定和任选地第二免疫测定，其中所述第一免疫测定包括：
a)将所述生物样品与以下孵育：
抗人IgG Fc抗体，
标记的寨卡病毒抗原，和
包含抗人IgM抗体的固体支持物，
其中，在所述生物样品中存在抗寨卡病毒IgG抗体、抗寨卡病毒IgM抗体或抗寨卡病毒IgG抗体和抗寨卡病毒IgM抗体的情况下，形成复合物I，所述复合物I包含(i)抗寨卡病毒IgG抗体、抗寨卡病毒IgM抗体或抗寨卡病毒IgG抗体和抗寨卡病毒IgM抗体，(ii)标记的寨卡病毒抗原，和(iii)包含抗人IgM抗体的固体支持物；和
b)检测所述复合物I，所述复合物I的存在表明所述生物样品中存在抗寨卡病毒IgM抗体、抗寨卡病毒IgG抗体或抗寨卡病毒IgG抗体和抗寨卡病毒IgM抗体，且如果检测到所述复合物I，则进行所述第二免疫测定，所述第二免疫测定包括：
c)将所述生物样品与以下孵育：
包含抗人IgM抗体的固体支持物，和
标记的寨卡病毒抗原，
其中，在所述生物样品中存在抗寨卡病毒IgM抗体的情况下，形成复合物II，所述复合物II包含(i)包含抗人IgM抗体的固体支持物，(ii)抗寨卡病毒IgM抗体，和(iii)标记的寨卡病毒抗原；和
b)检测所述复合物II，所述复合物II的存在表明在所述生物样品中存在所述抗寨卡病毒IgM抗体。

2.权利要求1的方法，其中所述标记物包括酶缀合物、荧光探针、放射性同位素、化学发光化合物、生物发光化合物或其组合。

3.权利要求2的方法，其中所述标记物包括吖啶酯(AE)或其类似物。

4.权利要求3的方法，其中所述AE或其类似物是DMAE、NSP‑DMAE、HQYAE、ZAE、Iso‑Di‑ZAE、TSP‑AE或HEG‑GLU‑AE。

5.任一前述权利要求的方法，其中所述寨卡病毒抗原是寨卡病毒NS1抗原或其免疫原性片段。

6.权利要求5的方法，其中所述寨卡病毒NS1抗原或其免疫原性片段是重组的。

7.任一前述权利要求的方法，其中所述抗人IgG Fc抗体是单克隆或多克隆抗体。

8.任一前述权利要求的方法，其中所述抗人IgG Fc抗体是山羊抗人IgG Fc抗体。

9.任一前述权利要求的方法，其中所述抗人IgM抗体间接连接至所述固体支持物。

10.权利要求9的方法，其中所述抗人IgM抗体是生物素化的，且所述固体支持物包含链霉抗生物素蛋白。

11.权利要求1的方法，其中所述抗人IgG Fc抗体间接连接至所述固体支持物。

12.权利要求11的方法，其中所述抗人IgG Fc抗体是生物素化的，且所述固体支持物包含链霉抗生物素蛋白。

13.任一前述权利要求的方法，其中所述生物样品是血清或血浆。

14.权利要求13的方法，其中所述生物样品进一步包含抗凝剂。

15.权利要求14的方法，其中所述抗凝剂包括EDTA或肝素。

16.任一前述权利要求的方法，其中在寨卡病毒感染的症状发作或暴露于寨卡病毒的风险之后至少8天，从所述受试者获得生物样品。

17.任一前述权利要求的方法，其中，在所述第一免疫测定中，所述抗人IgM抗体和所述固体支持物存在于缓冲液中，所述缓冲液包含tricine、氯化钠、Tween 20、EDTA二钠、防腐剂、巯基修饰的牛血清白蛋白和抗人IgG Fc抗体，且其中，在所述第二免疫测定中，所述IgM 抗体和所述固体支持物存在于缓冲液中，所述缓冲液包含tricine、氯化钠、Tween 20、EDTA 二钠、防腐剂、巯基修饰的牛血清白蛋白，但没有抗人IgG Fc抗体。

18.任一前述权利要求的方法，其中所述固体支持物包括柱基质材料、培养板、管、皿、烧瓶、微量滴定板、珠粒或其组合。

19.任一前述权利要求的方法，其中所述固体支持物包括顺磁颗粒(PMP)或乳胶磁性颗粒(LMP)。

20.前述权利要求中任一项的方法，其中所述寨卡病毒抗原包含表位标签，其中所述表位标签是6‑组氨酸标签、血凝素标签、谷胱甘肽‑S‑转移酶、麦芽糖结合蛋白或几丁质结合蛋白。

21.权利要求1的方法，其进一步包括测定所述生物样品中的抗寨卡病毒IgG抗体、抗寨卡病毒IgM抗体或抗寨卡病毒IgG抗体和抗寨卡病毒IgM抗体的水平。

22.权利要求21的方法，其中所述生物样品中的抗寨卡病毒IgG抗体、抗寨卡病毒IgM抗体或抗寨卡病毒IgG抗体和抗寨卡病毒IgM抗体的水平与检测到的复合物I或复合物II的水平成正比。

23.任一前述权利要求的方法，其中所述检测包括测量来自所述标记物的信号，和将所述信号与来自已知对于抗寨卡病毒抗体阴性的人的生物样品的对照信号进行比较。

24.权利要求1的方法，其中如果检测到所述复合物II，则进行第二免疫测定进一步包括至少一式两份重复步骤c)和d)。

25.权利要求24的方法，其中所述方法进一步包括，如果在3个重复中的至少2个的等同重复中检测到所述复合物II，则确定人受试者对于抗寨卡病毒IgM抗体是阳性的。

26.检测人受试者中的针对寨卡病毒的抗体的方法，所述方法包括进行第一免疫测定，所述第一免疫测定包括：
a)将来自所述受试者的生物样品与以下孵育：
包含抗人IgM抗体的固体支持物，
抗人IgG Fc抗体，和
标记的寨卡病毒抗原，
其中，在所述生物样品中存在抗寨卡病毒IgG抗体、抗寨卡病毒IgM抗体或抗寨卡病毒IgG抗体和抗寨卡病毒IgM抗体的情况下，形成复合物I，所述复合物I包含(i)包含抗人IgM 抗体的固体支持物，(ii)抗寨卡病毒IgG抗体、抗寨卡病毒IgM抗体或抗寨卡病毒IgG抗体和抗寨卡病毒IgM抗体，和(iii)标记的寨卡病毒抗原；
b)检测所述复合物I，且
b
)如果未检测到所述复合物I，则确定所述受试者对于针对寨卡病毒的抗体是阴性的；
i
或
b
)如果检测到所述复合物I，则确定所述受试者对于抗寨卡病毒抗体是阳性的。

ii
27.权利要求26的方法，其进一步包括进行第二免疫测定，所述第二免疫测定包括：
c)将所述生物样品与以下孵育：
包含抗人IgM抗体的固体支持物，和
标记的寨卡病毒抗原，
其中，在所述生物样品中存在抗寨卡病毒IgM抗体的情况下，形成复合物II，所述复合物II包含(i)包含抗人IgM抗体的固体支持物，(ii)抗寨卡病毒IgM抗体，和(iii)标记的寨卡病毒抗原；
d)检测所述复合物II，且
d
)如果未检测到所述复合物II，则确定人受试者对于抗寨卡病毒IgM抗体是阴性的。

i
28.权利要求27的方法，其进一步包含：
)如果检测到所述复合物II，则至少一式两份重复步骤c)和d)，且
d
ii
e)如果在3个重复中的至少2个的等同重复中检测到所述复合物II，则确定人受试者对于抗寨卡病毒IgM抗体是阳性的。

29.权利要求26或27的方法，其中所述检测包括测量来自所述标记物的信号，和将所述信号与来自已知对于抗寨卡病毒抗体阴性的人的生物样品的对照信号进行比较。

30.试剂盒，其包含：
固体支持物，
抗人IgM抗体，
抗人IgG Fc抗体，和
标记的寨卡病毒抗原。

31.权利要求30的试剂盒，其中所述标记物包括酶缀合物、荧光探针、放射性同位素、化学发光化合物、生物发光化合物或其组合。

32.权利要求31的试剂盒，其中所述标记物是吖啶酯(AE)或其类似物。

33.权利要求30至32中任一项的试剂盒，其中所述固体支持物包括柱基质材料、培养板、管、皿、烧瓶、微量滴定板、珠粒、微粒或其组合。

34.权利要求33的试剂盒，其中所述固体支持物是顺磁颗粒(PMP)或乳胶磁性颗粒(LMP)。

35.试剂盒，其包含用于第一免疫测定的试剂和用于第二免疫测定的试剂，
其中用于第一免疫测定的试剂包括：
固体支持物，
抗人IgM抗体，
抗人IgG Fc抗体，和
标记的寨卡病毒抗原；和
其中用于第二免疫测定的试剂包括：
固体支持物，
抗人IgM抗体，和
标记的寨卡病毒抗原。

36.权利要求35的试剂盒，其进一步包含用于进行第一和第二免疫测定的说明书，其中
所述说明书指导使用者进行第一免疫测定以确定来自人受试者的生物样品中存在或不存在抗寨卡病毒抗体，且其中所述说明书进一步指导使用者仅在所述第一免疫测定中确定所述生物样品对于抗寨卡病毒抗体是阳性的情况下，才进行第二免疫测定。

用于寨卡病毒免疫测定的方法和试剂
技术领域
[0001]本文公开了检测来自人受试者的生物样品中的抗寨卡病毒IgM抗体的方法和诊断所述受试者中的寨卡病毒感染的方法。

[0002]背景
寨卡病毒是属于黄病毒科的单链正义RNA病毒(Musso D, Gubler DJ. Zika virus. Clin Microbiol Rev. 2016 Jul;29(3):487‑524)，黄病毒科包括密切相关的登革热、西尼罗河、日本脑炎和黄热病毒(Rabe IB, Staples JE, Villanueva J, 等人 Interim guidance for Interpretation of Zika virus antibody test results. MMWR. 2016;65(21):543–546)。

1947年，从乌干达的寨卡森林中的恒河猴首次分离出寨卡病毒(Musso等人，2016)。

1954年，在尼日利亚首次报道在人中的寨卡病毒感染，并且第一次流行在2007年在雅浦(Yap)的西太平洋岛上报道，并且后来在2013年和2014年在法属波利尼西亚报道。

寨卡病毒爆发首先在2015年3月在美洲的巴西出现，并且到2016年3月传播至几个国家和地区(Petersen LR, Jamieson DJ, Powers AM, Honein MA. Zika virus. N Engl J Med. 2016;374 (16): 1552–1563)。

[0003]寨卡病毒感染主要通过被感染的蚊子(埃及伊蚊(Aedes aegypti))的叮咬传播。

然而，已经报道，在怀孕期间从母亲传播给胎儿以及通过与被感染伴侣的性接触的传播(同上)。

已经记录了通过输血的潜在传播(Musso等人，2016)。

大多数被寨卡病毒感染的人表现出轻度症状或无症状(不发展症状)(Zika: The basics of the virus and how to protect against it. CDC's response to Zika. Centers for Disease Control and Prevention website. https://www_cdc_gov/zika/pdfs/fs‑zika‑basics_pdf. 2017年6月27日出版。

登录：2016年8月12日)。

常见症状包括发烧、皮疹、关节痛和红眼，并且这些症状可以被观察到最长达一周(Petersen等人，2016)。

孕妇中的寨卡病毒感染可能引起胎儿的头小畸型，这是一个主要的公共健康问题。

也已经报道寨卡病毒感染与吉兰‑巴雷综合征(一种可引起暂时性麻痹的神经系统疾病)之间的关联(Musso等人, 2016; Petersen等人, 2016)。

[0004]在寨卡病毒感染期间，预期在症状发作后病毒血症持续一周，并且寨卡病毒特异性IgM抗体据报道在症状发作后的第一周期间发展，并且预期其持续最长达12周(Rabe等人，2016)。

寨卡病毒特异性IgM抗体的检测用于疑似寨卡病毒感染患者的诊断和适当的临床管理(同上)。

[0005]在2015‑2016年美洲的寨卡病毒感染爆发的出现需要紧急开发诊断测试以检测近来感染寨卡病毒的个体中的寨卡病毒特异性IgM抗体，以用于对他们适当的临床管理。

[0006]已经开发了用于检测来自人受试者的生物样品中的抗寨卡IgM抗体的免疫测定，但可用的免疫测定具有各种缺陷，包括：1)与来自正常供体和孕妇的血清/血浆的非特异性反应，引起寨卡非流行群体中的特异性差；2)与来自人受试者的样品中的寨卡IgG抗体的交叉反应性，导致寨卡流行群体中的特异性差；3)需要在同一测定中测试具有最多达3种不同抗原的单一样品，增加产生结果的时间和成本；和/或4)需要用至少两种不同的测定测试每
份样品，也增加产生结果的时间和成本。

因此，仍然需要用于可靠和有效地检测来自受试者的生物样品中的抗寨卡病毒IgM抗体的免疫测定方法和试剂。

[0007]概述
本文公开了检测来自人受试者的生物样品中的抗寨卡病毒IgM抗体的方法，所述方法包括第一免疫测定和任选地第二免疫测定，其中所述第一免疫测定包括：a)将所述生物样品与抗人IgG Fc抗体、标记的寨卡病毒抗原和包含抗人IgM抗体的固体支持物孵育，其中，在所述生物样品中存在抗寨卡病毒IgG抗体、抗寨卡病毒IgM抗体或抗寨卡病毒IgG抗体和抗寨卡病毒IgM抗体的情况下，形成复合物I，所述复合物I包含(i)抗寨卡病毒IgG抗体、抗寨卡病毒IgM抗体或抗寨卡病毒IgG抗体和抗寨卡病毒IgM抗体，(ii)标记的寨卡病毒抗原，和(iii)包含抗人IgM抗体的固体支持物；和b)检测复合物I，所述复合物I的存在表明所述生物样品中存在抗寨卡病毒IgM抗体、抗寨卡病毒IgG抗体或抗寨卡病毒IgG抗体和抗寨卡病毒IgM抗体，且如果检测到所述复合物I，则进行所述第二免疫测定，所述第二免疫测定包括：c)将所述生物样品与包含抗人IgM抗体的固体支持物和标记的寨卡病毒抗原孵育，其中，在所述生物样品中存在抗寨卡病毒IgM抗体的情况下，形成复合物II，所述复合物II包含(i)包含抗人IgM抗体的固体支持物，(ii)抗寨卡病毒IgM抗体，和(iii)标记的寨卡病毒抗原；和b)检测所述复合物II，所述复合物II的存在表明在所述生物样品中存在所述抗寨卡病毒IgM抗体。

[0008]还公开了检测受试者中的针对寨卡病毒的抗体的方法，所述方法包括进行第一免疫测定，所述第一免疫测定包括：
a)将来自所述受试者的生物样品与以下孵育：
包含抗人IgM抗体的固体支持物，
抗人IgG Fc抗体，和
标记的寨卡病毒抗原，
其中，在所述生物样品中存在抗寨卡病毒IgG抗体、抗寨卡病毒IgM抗体或抗寨卡病毒IgG抗体和抗寨卡病毒IgM抗体的情况下，形成复合物I，所述复合物I包含(i)包含抗人IgM抗体的固体支持物，(ii)抗寨卡病毒IgG抗体、抗寨卡病毒IgM抗体或抗寨卡病毒IgG抗体和抗寨卡病毒IgM抗体，和(iii)标记的寨卡病毒抗原；
b)检测所述复合物I，且
b
)如果未检测到所述复合物I，则确定所述受试者对于针对寨卡病毒的抗体是阴
i
性的；或
)如果检测到所述复合物I，则确定所述受试者对于抗寨卡病毒抗体是阳性的。

b
ii
[0009]公开的方法可以进一步包括进行第二免疫测定，所述第二免疫测定包括：
c)将所述生物样品与以下孵育：
包含抗人IgM抗体的固体支持物，和
标记的寨卡病毒抗原，
其中，在所述生物样品中存在抗寨卡病毒IgM抗体的情况下，形成复合物II，所述复合物II包含(i)包含抗人IgM抗体的固体支持物，(ii)抗寨卡病毒IgM抗体，和(iii)标记的寨卡病毒抗原；
d)检测所述复合物II，且
d
)如果未检测到所述复合物II，则确定人受试者对于抗寨卡病毒IgM抗体是阴性
i
的。

[0010]公开的方法可以进一步包括：
d
)如果检测到所述复合物II，则至少一式两份重复步骤c)和d)，且
ii
e)如果在3个重复中的至少2个的等同重复中检测到所述复合物II，则确定人受试者对于抗寨卡病毒IgM抗体是阳性的。

[0011]还公开了试剂盒，其包含：固体支持物、抗人IgM抗体、抗人IgG Fc抗体和标记的寨卡病毒抗原。

所述试剂盒可以包含用于第一免疫测定的试剂和用于第二免疫测定的试剂，其中用于第一免疫测定的试剂包括：固体支持物、抗人IgM抗体、抗人IgG Fc抗体和标记的寨卡病毒抗原；且其中用于第二免疫测定的试剂包括：固体支持物、抗人IgM抗体和标记的寨卡病毒抗原。

所述试剂盒可以进一步包含用于进行第一和第二免疫测定的说明书，其中所述说明书指导使用者进行第一免疫测定以确定来自人受试者的生物样品中存在或不存在抗寨卡病毒抗体，且其中所述说明书进一步指导使用者仅在所述第一免疫测定中确定所述生物样品对于抗寨卡病毒抗体是阳性的情况下，才进行第二免疫测定。

[0012]本文还公开了用于执行公开的方法的算法和使用公开的方法和算法诊断受试者中的寨卡病毒感染的方法。

[0013]附图简述
当结合附图阅读时，进一步理解概述以及以下详述。

为了举例说明公开的方法和试剂盒的目的，在附图中显示所述方法和试剂盒的示例性实施方案；然而，所述方法和试剂盒不限于公开的具体实施方案。

在附图中：
图1是“寨卡测试”算法的一个实施方案的示意图，由此对于来自受试者的给定生物样品确定针对寨卡病毒的抗体阴性或推定的寨卡阳性的结果。

[0014]说明性实施方案的详述
通过参考与附图相关联的以下详述，可以更容易地理解公开的方法和试剂盒，所述附图形成本公开的一部分。

应理解，公开的方法和试剂盒不限于本文描述和/或显示的具体方法和试剂盒，并且本文使用的术语是为了仅通过实例的方式描述具体实施方案的目的，并且不意欲限制请求保护的方法和试剂盒。

[0015]除非另有特别说明，否则关于可能的作用机制或模式或改进原因的任何描述仅仅意在是说明性的，并且公开的方法和试剂盒不应受任何此类建议的作用机制或模式或改进原因的正确性或不正确性的约束。

[0016]在整个该文本中，本说明书涉及检测抗体的方法和诊断寨卡病毒感染的方法。

在本公开描述或请求保护与检测抗体的方法相关的特征或实施方案的情况下，这种特征或实施方案同样适用于诊断寨卡病毒感染的方法。

同样，在本公开描述或请求保护与诊断寨卡病毒感染的方法相关的特征或实施方案的情况下，这种特征或实施方案同样适用于检测抗体的方法。

[0017]在本文叙述或确立数值范围的情况下，该范围包括其端点以及该范围内的所有单个整数和分数，并且还包括由那些端点以及内部整数和分数的所有可能组合形成的其中的较窄范围中的每个，从而形成在所述范围内的较大值组的子组，其程度与明确地叙述那些较窄范围中的每个的程度相同。

在本文中将数值范围规定为大于规定值的情况下，该范围
仍然是有限的，并且在其上端以在如本文所述的本发明的上下文中可操作的值为界。

在数值范围在本文中规定为小于规定值的情况下，该范围在其下端仍以非零值为界。

当定义范围时，无意将本发明的范围限于叙述的具体值。

所有范围都是包括性的和可组合的。

[0018]当通过使用先行词“约”将值表示为近似值时，应理解具体值形成另一个实施方案。

对具体数值的提及至少包括该具体值，除非上下文另外清楚地指出。

[0019]应理解，为了清楚起见，本文在分开的实施方案的上下文中描述的公开的方法和试剂盒的某些特征也可以在单个实施方案中组合提供。

相反，为了简要起见，在单个实施方案的上下文中描述的公开的方法和试剂盒的各种特征也可以分开或在任何子组合中提供。

[0020]如本文所用，单数形式 “一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“该(the)”包括复数。

[0021]在整个说明书和权利要求中使用涉及说明书的各方面的各种术语。

向此类术语给予其在本领域中的普通含义，除非另外指出。

其他特别定义的术语将以与本文提供的定义一致的方式解释。

[0022]术语“包含”意欲包括由术语“基本上由...组成”和“由...组成”涵盖的实例；类似地，术语“基本上由...组成”意欲包括由术语“由...组成”涵盖的实例。

[0023]本文公开了用于检测来自人受试者的生物样品中的抗寨卡病毒IgM抗体和/或诊断人受试者中的寨卡病毒感染的免疫测定法和方法。

[0024]本文公开的方法可以包括将所述生物样品与抗人IgG Fc抗体、标记的寨卡病毒抗原和包含抗人IgM抗体的固体支持物孵育。

在所述生物样品中存在抗寨卡病毒IgG抗体、抗寨卡病毒IgM抗体或抗寨卡病毒IgG抗体和抗寨卡病毒IgM抗体的情况下，形成复合物I，所述复合物I包含(i)抗寨卡病毒IgG抗体、抗寨卡病毒IgM抗体或抗寨卡病毒IgG抗体和抗寨卡病毒IgM抗体，(ii)标记的寨卡病毒抗原，和(iii)包含抗人IgM抗体的固体支持物。

所述方法可以进一步包括检测所述复合物I，所述复合物I的存在表明所述生物样品中存在抗寨卡病毒IgM抗体、抗寨卡病毒IgG抗体或抗寨卡病毒IgG抗体和抗寨卡病毒IgM抗体。

如果检测到所述复合物I，则所述方法可以进一步包括进行第二免疫测定，所述第二免疫测定包括将所述生物样品与包含抗人IgM抗体的固体支持物和标记的寨卡病毒抗原孵育。

在所述生物样品中存在抗寨卡病毒IgM抗体的情况下，形成复合物II，所述复合物II包含(i)包含抗人IgM抗体的固体支持物，(ii)抗寨卡病毒IgM抗体，和(iii)标记的寨卡病毒抗原。

所述方法可以进一步包括检测所述复合物II，所述复合物II的存在表明在所述生物样品中存在所述抗寨卡病毒IgM抗体。

[0025]在一些实施方案中，所述寨卡病毒抗原是寨卡病毒NS1抗原或其免疫原性片段。

所述寨卡病毒NS1抗原或其免疫原性片段可以是重组的。

[0026]在一些实施方案中，所述抗人IgG Fc抗体可以免疫特异性结合人IgG抗体的Fc区。

例如，所述抗人IgG Fc抗体可以是针对人IgG Fc抗原产生的单克隆或多克隆抗体。

在一些实施方案中，所述抗人IgG Fc抗体是山羊抗人IgG Fc抗体。

即，所述抗人IgG Fc抗体可以是针对人IgG Fc的山羊抗体。

[0027]不希望被理论所束缚，预期在孵育反应中所述抗人IgG Fc抗体可以结合固体支持物或以其他方式与固体支持物偶联。

例如，所述抗人IgG Fc可以非共价结合固体支持物。

因此，在一些实施方案中，所述抗人IgG Fc抗体间接连接至所述固体支持物。

在一些实施方案中，所述抗人IgG Fc抗体是复合物I的组分。

[0028]所述抗人IgM抗体可以直接或间接连接至所述固体支持物。

在一些实施方案中，所述抗人IgM抗体是生物素化的，且所述固体支持物包含链霉抗生物素蛋白。

因此，所述抗人IgM抗体可以通过生物素‑链霉抗生物素蛋白相互作用间接连接至所述固体支持物。

在一些实施方案中，所述抗人IgG Fc抗体间接连接至所述固体支持物。

另外，所述抗人IgG Fc抗体可以是生物素化的，且由此也间接连接至包含链霉抗生物素蛋白的固体支持物。

[0029]所述生物样品可以是血清或血浆，并且其可以进一步包含抗凝剂，包括例如EDTA 或肝素。

在一些实施方案中，所述生物样品来自人。

在寨卡病毒感染的症状发作或暴露于寨卡病毒的风险之后至少8天，从人受试者获得生物样品。

在一些实施方案中，必须在寨卡病毒感染的症状发作或暴露于寨卡病毒的风险之后至少8天，从人受试者获得生物样品，以确保准确检测生物样品中的抗寨卡病毒IgM抗体。

[0030]在第一免疫测定(“寨卡Ab”测定)中、抗人IgM抗体和固体支持物可以存在于缓冲液中，所述缓冲液包含tricine、氯化钠、Tween 20、EDTA二钠、防腐剂、巯基修饰的牛血清白蛋白和抗人IgG Fc抗体。

在第二免疫测定(“寨卡M”测定)中、IgM抗体和固体支持物可以存在于缓冲液中，所述缓冲液包含tricine、氯化钠、Tween 20、EDTA二钠、防腐剂、巯基修饰的牛血清白蛋白，但没有抗‑人IgG Fc抗体。

[0031]本文公开的方法可以进一步包括测定生物样品中的抗寨卡病毒IgG抗体、抗寨卡病毒IgM抗体或抗寨卡病毒IgG抗体和抗寨卡病毒IgM抗体的水平。

在一些实施方案中，生物样品中的抗寨卡病毒IgG抗体、抗寨卡病毒IgM抗体或抗寨卡病毒IgG抗体和抗寨卡病毒IgM 抗体的水平与检测到的复合物I或复合物II的水平成正比。

如本文所用的检测信号可以包括测量来自标记物的信号，并将所述信号与来自已知是抗寨卡病毒抗体阴性的人的生物样品的对照信号进行比较。

[0032]在寨卡M测定中检测到复合物II的情况下，所述方法可以进一步包括至少一式两份重复寨卡M测定的步骤，和如果在3个重复中的至少2个的等同重复中检测到复合物II，则确定人受试者是抗寨卡病毒IgM抗体阳性的。

[0033]本文还公开了诊断受试者中的寨卡病毒感染的方法，其包括公开的检测来自受试者的生物样品中的抗寨卡病毒IgM抗体的方法。

[0034]进一步公开了用于检测生物样品中的寨卡病毒特异性IgM抗体的算法(图1)。

本文公开的算法可以通过以增加本文公开的方法的效率和可靠性的方式检测受试者中的针对寨卡病毒的抗体的步骤，来指导使用者或自动化系统。

例如，所述算法可用于减少对于特定样品确定其例如对于抗寨卡病毒IgM抗体为阴性所需的测定次数。

在一些实施方案中，所述算法包括一组指令，以通过检测生物样品中的针对寨卡病毒的抗体的方法指导使用者或自动化系统。

实例算法可以指示使用者或系统执行检测受试者中的针对寨卡病毒的抗体的方法，所述方法包括进行第一免疫测定，所述第一免疫测定包括：
a)将来自所述受试者的生物样品与以下孵育：
包含抗人IgM抗体的固体支持物，
抗人IgG Fc抗体，和
标记的寨卡病毒抗原，
其中，在所述生物样品中存在抗寨卡病毒IgG抗体、抗寨卡病毒IgM抗体或抗寨卡病毒IgG抗体和抗寨卡病毒IgM抗体的情况下，形成复合物I，所述复合物I包含(i)包含抗人。