质粒大提--自制试剂配制和操作步骤总结大全

质粒大提--自制试剂配制和操作步骤总结大全
第一篇：质粒大提--自制试剂配制和操作步骤总结大全
质粒提取试剂配制和操作步骤
试剂配制(小量)
1.1M（M代表摩尔浓度即mol∕L）NaOH(400ml): 分子量为40，秤取16g NaOH, 溶于400ml DDW中。

2.2M Tris-HCl(500ml): 分子量为121.14, 秤取121.14g Tris,放入干净的500ml烧杯中，加400 ml DDW，置于搅拌器上搅拌溶解，用HCl调节pH值为8.0（首先直接加12M的浓盐酸约20ml，接近8.0时再用1M HCl 调节）, 定容至500ml，4℃保存。

3.10%SDS(200ml): 称量20gSDS,放入干净的烧杯中，加100 ml DDW，定容到200ml，室温保存。

（SDS具有较强的刺激性，称量时一定带好口罩，动作轻柔）。

4.Buffer P1(500ml): 用50ml离心管量取10ml 0.5M的EDTA，然后量取12.5ml 2M 的Tris-HCl，放入干净的烧杯中，加入300ml DDW,置于搅拌器上搅拌溶解，用HCl调节pH值为8.0（大约加12M 的浓盐酸1ml），定容至500ml，4℃保存。

5.Buffer P2（100ml）: 20ml 1M NaOH和10ml 10%SDS放入200ml的玻璃瓶中，然后加入70ml DDW，混匀，室温放置过夜，使其自溶，最后室温保存。

(注：不需要定容，严格按步骤操作)。

6.Buffer P3(500ml)：秤取14
7.21g乙酸钾，溶于300ml DDW 中，置于搅拌器上搅拌溶解，用冰醋酸调节pH值为5.5，（约加80–100ml冰醋酸）, 定容至500ml，4℃保存。

7.Buffer QBT（500ml）：分别称取NaCl 21.915g, MoPS 5.23g, 放于干净的500ml烧杯中，加入300ml DDW,置于搅拌器上搅拌溶解，用1M NaOH调节pH值为7.0（约加10–15ml NaOH）,然后加入75ml 异丙醇，定容至500ml，4℃保存。

8.Buffer QC（500ml）：分别称取NaCl 29.22g, MoPS 5.23g,放于干净的500ml烧杯中，加入300ml DDW,置于搅拌器上搅拌溶解，
用1M NaOH调节pH值为7.0（约加9ml NaOH,然后加入75ml 异丙醇，定容至500ml，4℃保存。

9.Buffer QF（500ml）：称取NaCl 36.525g, 量取2M Tris-HCl 12.5ml,放于干净的500ml烧杯中，加入300ml DDW，置于搅拌器上搅拌溶解，用1M NaOH调节pH值为8.5（约加0.1ml NaOH），然后加入75ml异丙醇，定容至500ml，4℃保存。

10.配制RNase:
(1)将RNase粉末溶于10mM的乙酸钾（即Buffer P3），配制成浓度为10mg/ml的溶液。

(2)将配好的RNase溶液100℃加热10min, 随后冷却至室温。

(3)用1M 的Tris-HCl调节pH值至7.4，大约需要0.1体积的Tris-HCl。

(4)分装RNase溶液于1.5ml EP管中，-20℃保存。

试剂配制(大量)
1.1M NaOH(400ml): 分子量为40，秤取16g NaOH, 溶于400ml DDW中。

2.2M Tris-HCl(500ml): 分子量为121.14, 秤取121.14g Tris,溶于400 ml DDW中，用HCl调节pH值为8.0, 定容至500ml。

3.Buffer P2（1000ml）: 称取10g SDS, 放入1000ml的玻璃瓶中，然后加入750ml DDW，最后加入200 ml 1M的NaOH，混匀，室温放置过夜，使其自溶。

(注：不需要定容，严格按步骤操作。

)
4.Buffer P1(1000ml): 用50ml离心管量取20ml 0.5M的EDTA，然后量取25ml 2M 的Tris-HCl，加入700ml DDW, 用HCl调节pH 值为8.0，定容至1000ml。

5.Buffer P3(1000ml)：秤取294.42g乙酸钾，溶于800ml DDW 中，用冰醋酸调节pH值为5.5，定容至1000ml。

6.Buffer QBT （1000ml）：分别称取NaCl 43.83g, MoPS 10.46g, 加入600ml DDW, 用NaOH调节pH值为
7.0，然后加入150ml 异丙醇，定容至1000ml。

7.Buffer QC（1000ml）：分别称取NaCl 5
8.44g, MoPS 10.46g, 加入600ml DDW, 用NaOH调节pH值为7.0，然后加入150ml 异丙醇，定容至1000ml。

8.Buffer QF（1000ml）：称取NaCl 73.05g, 量取2M Tris-HCl 25ml, 加入800ml DDW，用NaOH 调节pH值为8.5，然后加入150ml 异丙醇，定容至1000ml。

9.配制
RNase:
(1)将RNase粉末溶于10mM的乙酸钾（即Buffer P3），配制成浓度为10mg/ml的溶液。

(2)将配好的RNase溶液100℃加热10min, 随后冷却至室温。

(3)用1M 的Tris-HCl调节pH值至7.4，大约需要0.1体积的Tris-HCl。

(4)分装RNase溶液于1.5ml EP管中，-20℃保存。

操作步骤准备工作：
• 大提质粒的前两天用50ml离心管摇菌，在5-7ml加有氨苄抗生素AMP的LB液体培养基中挑菌，37℃下摇菌12-16h。

• 大提质粒前一天将50ml离心管摇好的菌液500ml大三角瓶中加入含有氨苄抗生素AMP的LB液体培养基200ml，37℃下摇菌12-16h。

1.沉淀菌液：向离心机配套的50 ml离心管中，加入30 ml菌液，6000 g离心10min, 大约沉淀菌液200 ml。

(注意：配平离心管，离心时要在离心管壁和盖上都做好标记，且离心时写字的管壁侧朝向外，以便容易找到沉淀物)。

离好一管，取回弃去上液保留沉淀物，再反复离心直到所有200ml菌液全部离完），打开盖倒置吸水纸上控干。

2.溶解沉淀: 量取10 ml Buffer P1, 加入100μl RNase A, 混匀后，加入到离心沉淀的菌中，用振荡器充分溶解菌液沉淀（可用15ml离心管量取，Buffer P1 加入沉淀离心管是管口不要接触，以防互相污染）。

3.加入10 ml Buffer P2，液体呈现蓝色，轻轻混匀，使其充分反应，冰上放置2-3min即可。

（此步主要是碱裂解细菌，使其中的蛋白质和DNA变性，反应时间不能太长，否则容易使大肠杆菌的基因组DNA断裂成小片段，污染质粒DNA）
4.加入10 ml 预冷的Buffer P3，轻轻颠倒混匀，直到蓝色全部消失，出现白色蛋白沉淀，冰上放置20min。

（此步发生酸碱中和反应，pH值降低，使变性的DNA双链结构恢复，其中的SDS可以充分与蛋白质结合，使其析出）
5.20 min后，6000 g 4℃离心25min。

同时，向柱子中加入5ml Buffer QBT，使其全部流过柱子，平衡柱子。

如果是重复使用的柱子，
先使其中的HCl全部流尽，然后加满DDW清洗2遍柱子，最后再加入Buffer QBT平衡柱子。

6.剪一小块纱布，折叠4层，放于柱子上部。

将离心后的液体缓慢倒入纱布中，最后挤压纱布使其中的液体全部直接过滤到柱子中，使其充分流过柱子。

（如果此步不只1个质粒时，挤压不同质粒的纱布时，一定要换手套，避免污染质粒）
7.清洗柱子: 液体全部流过柱子后，向柱子中直接加满Buffer QC，使其全部流过柱子，清洗2遍，弃去废液。

8.洗脱质粒: 向柱子中加15ml Buffer QF，靠重力作用使其全部通过柱子，收集洗脱液。

(注：要收集到一个新的管中)9.沉淀质粒：向收集的液体中，加入0.7倍体积（即10.5 ml）异丙醇，轻轻混匀，6000 g 4℃离心25 min。

（异丙醇可以充分沉淀质粒，但同时会沉淀很多盐分）
10.清洗质粒：离心后，注意质粒贴壁的方向，应从其侧面倒掉废液。

然后加入10 ml 70%的乙醇，轻轻晃动（不能用枪吹散，否则会损失很多质粒）。

11.沉淀质粒：6000 g 4℃离心10min，轻轻吸弃废液，将质粒开盖晾置，使乙醇充分会发。

（质粒中的乙醇会影响后续反应中的酶活性）
12.溶解质粒：用300ulDDW或TE溶解步骤11中的质粒，转移到新的1.5mlEP管中，做好标记，检测浓度。

13.柱子回收:
(1)先用自来水冲洗柱子内外；
(2)再用蒸馏水和DDW冲洗柱子内外，最后加满DDW，使其全部通过柱子，清洗2次。

(3)向柱子中加满1 M HCl，柱子底部盖上盖子，顶部用封口膜封上，室温放置过夜。

（HCl可充分降解DNA）
第二篇：碱液配制工作安排及操作步骤
碱液配制工作安排及操作步骤
一、碱液配制工作：
1、蒸馏岗位早班操作人员负责将上、下两个碱液桶配制好规定的浓度，保证三个班的正常使用。

2、经常检查储存桶内碱液存量情况，及时把化碱桶的碱液放入储存桶。

3、随时观察储存桶的碱液是否被消化，防止计量泵出故障，影响成品质量。

二、碱液配制步骤：
1、用自来水先将化碱桶装至规定位置，（把氢氧化钠添加管淹完）。

2、开启搅拌器，到楼上把氢氧化钠倒入下碱管，一次加75kg （三袋）。

3、搅拌5分钟后，停止搅拌，静置待用。

4、在加水和倒氢氧化钠时，要特别小心，防止碱对人体造成伤害。

二0一一年六月二日生产部
第三篇：质粒提取的原理、操作步骤、各溶液的作用
质粒提取的原理、操作步骤、各溶液的作用
(2010-11-11 17:19:05)转载标签：质粒
溶液
无水乙醇
大肠杆菌
杂谈▼
分类： Biology
细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb 以上不等。

各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份，通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传递到后代。

质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子，重要的条件是可获得大量纯化的质粒DNA分子。

目前已有许多方法可用于质粒DNA 的提取，下面主要介绍碱裂解法提取质粒DNA的方法。

碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，其基本原理为：当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变
性，当加入中和液后，质粒DNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。

纯化质粒DNA的方法通常是利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性质。

例如，氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心、离子交换层析、凝胶过滤层析、聚乙二醇分级沉淀等方法，但这些方法相对昂贵或费时。

对于小量制备的质粒DNA，经过苯酚、氯仿抽提，RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA，所得纯化的质粒DNA 已可满足细菌转化、DNA片段的分离和酶切、常规亚克隆及探针标记等要求，故在分子生物学实验室中常用。

碱裂解法：此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。

方法如下：
1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基。

2、37℃振荡培养过夜。

3、取1.5ml菌体于Ep管，以4000rpm离心3min，弃上清液。

4、加0.lml溶液I（1％葡萄糖，50mM/L EDTA pH8.0，25mM/L Tris-HCl pH8.0）充分混合。

5、加入0.2ml溶液II（0.2 mM/L NaOH，1％SDS），轻轻翻转混匀，置于冰浴5 min.
6、加入0.15m1预冷溶液III（5 mol/L KAc，pH4.8），轻轻翻转混匀，置于冰浴5 min.
7、以10，000rpm离心20min，取上清液于另一新Ep管
8、加入等体积的异戊醇，混匀后静置10min.9、再以10，000rpm离心20min，弃上清。

10、用70％乙醇0.5ml洗涤一次，抽干所有液体。

11、待沉淀干燥后，溶于0.05mlTE缓冲液中
试剂准备
1.溶液Ⅰ: 50mM葡萄糖，25mM Tris-HCl(pH 8.0)，10mM EDTA(pH 8.0）1M Tris-HCl(pH 8.0）1
2.5ml，0.5M EDTA（pH 8.0）10ml，葡萄糖4.730g，加ddH2O至500ml。

在10 lbf/in2高压灭菌15min，贮存于4℃。

任何生物化学反应，
首先要控制好溶液的pH，因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液。

50 mM葡萄糖最大的好处只是悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部。

因此，如果溶液I中缺了葡萄糖其实对质粒的抽提本身而言，几乎没有任何影响。

所以说溶液I中葡萄糖是可缺的。

EDTA呢？大家知道EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂，配在分子生物学试剂中的主要作用是：抑制DNase的活性，和抑制微生物生长。

在溶液I中加入高达10 mM的EDTA，无非就是要把大肠杆菌细胞中的所有二价金属离子都螯合掉。

如果不加EDTA，其实也没什么大不了的，只要不磨洋工，只要是在不太长的时间里完成质粒抽提，就不用怕DNA会迅速被降解，因为最终溶解质粒的TE缓冲液中有EDTA。

如果哪天你手上正好缺了溶液I，可不可以抽提质粒呢？实话告诉你，只要用等体积的水，或LB培养基来悬浮菌体就可以了。

2.溶液II：是用新鲜的0.4 N的NaOH和2％的SDS等体积混合后使用的。

要新从浓NaOH稀释制备0.4N的NaOH，无非是为了保证NaOH没有吸收空气中的CO2而减弱了碱性。

很多人不知道其实破细胞的主要是碱，而不是SDS，所以才叫碱法抽提。

事实上NaOH是最佳的溶解细胞的试剂，不管是大肠杆菌还是哺乳动物细胞，碰到了碱都会几乎在瞬间就溶解，这是由于细胞膜发生了从bilayer（双层膜）结构向micelle（微囊）结构的相变化所导致。

用了不新鲜的0.4 N NaOH，即便是有SDS也无法有效溶解大肠杆菌（不妨可以自己试一下），自然就难高效率抽提得到质粒。

如果只用SDS当然也能抽提得到少量质粒，因为SDS也是碱性的，只是弱了点而已。

很多人对NaOH的作用误以为是为了让基因组DNA变性，以便沉淀，这是由于没有正确理解一些书上的有关DNA变性复性的描述所导致。

有人不禁要问，既然是NaOH溶解的细胞，那为什么要加SDS呢？那是为下一步操作做的铺垫。

这一步要记住两点：第一，时间不能过长，千万不要这时候去接电话，因为在这样的碱性条件下基因组DNA片断会慢慢断裂；第二，必须温柔混合（象对待女孩子一样），不然基因组DNA 也会断裂。

基因组 DNA的断裂会带来麻烦。

3.溶液Ⅲ：醋酸钾（KAc）缓冲液，pH
4.8。

5M KAc 300ml，冰醋酸57.5ml，加ddH2O至500ml。

4℃保存备用。

溶液III加入后就会有大量的沉淀，但大部分人却不明白这沉淀的本质。

最容易产生的误解是，当SDS碰到酸性后发生的沉淀。

如果你这样怀疑，往1%的SDS溶液中加入2M的醋酸溶液看看就知道不是这么回事了。

大量沉淀的出现，显然与SDS的加入有关系。

如果在溶液II中不加SDS会怎样呢，也会有少量的沉淀，但量上要少得多，显然是盐析和酸变性沉淀出来的蛋白质。

既然SDS不是遇酸发生的沉淀，那会不会是遇盐发生的沉淀呢？在1％的SDS溶液中慢慢加入5 N的NaCl，你会发现SDS在高盐浓度下是会产生沉淀的。

因此高浓度的盐导致了SDS的沉淀。

但如果你加入的不是NaCl而是KCl，你会发现沉淀的量要多的多。

这其实是十二烷基硫酸钠（sodium dodecylsulfate）遇到钾离子后变成了十二烷基硫酸钾（potassium dodecylsulfate, PDS），而PDS是水不溶的，因此发生了沉淀。

如此看来，溶液III加入后的沉淀实际上是钾离子置换了SDS中的钠离子形成了不溶性的PDS，而高浓度的盐，使得沉淀更完全。

大家知道SDS 专门喜欢和蛋白质结合，平均两个氨基酸上结合一个SDS分子，钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质沉淀了，让人高兴的是大肠杆菌的基因组DNA也一起被共沉淀了。

这个过程不难想象，因为基因组DNA太长了，长长的DNA自然容易被PDS给共沉淀了，尽管SDS并不与DNA分子结合。

1.为什么用无水乙醇沉淀DNA？
用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。

乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。

DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。

一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的最终含量占67％左右。

因而也可改用95％乙醇来替代无水乙醇（因为无水乙醇的价格远远比95％乙醇昂贵）。

但是加95％的乙醇使总体积增大，而DNA在
溶液中有一定程度的溶解，因而DNA损失也增大，尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率。

折中的做法是初次沉淀DNA时可用95％乙醇代替无水乙酵，最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。

也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。

一般在室温下放置15－30分钟即可。

2.在用乙醇沉淀DNA时，为什么一定要加NaAc或NaCl至最终浓度达0.1～0.25mol/L？
在pH为8左右的溶液中，DNA分子是带负电荷的，加一定浓度的NaAc或NaCl，使Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀，当加入的盐溶液浓度太低时，只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合，这样就造成DNA沉淀不完全，当加入的盐溶液浓度太高时，其效果也不好。

在沉淀的DNA中，由于过多的盐杂质存在，影响DNA的酶切等反应，必须要进行洗涤或重沉淀。

第四篇：自制净水器操作实践总结
八（1）班“环保实践，自制净水器”实践
活动总结
大家都知道自然界中绝大多数的水是不能直接饮用的。

为了得到可以直接饮用的水，同学们经常采取沉降、吸附、过滤、杀菌和蒸馏等方法来净化水，比如经过净化处理的自来水经过煮沸就可以饮用，再比如桶装或瓶装的矿泉水和纯净水等。

但是，在一些特殊的场合，比如野外生存自带水源消耗完毕，或者地震之后自来水供应中断、交通断绝等情况下，如何提高饮用水的质量是直接关系到生命安全的问题。

这时，同学们可以通过自己制作简易净水器来得到比较干净、卫生的水源。

一、简易净水器的工作原理：
利用纱布与卵石过滤较大颗粒的不溶性物质、石英砂过滤颗粒较小的不溶性物质、活性炭吸附有色有味的物质、蓬松棉吸附颗粒很小的不溶性物质的性质来净化水源。

二、简易净水器的制作过程
1、材料：饮料瓶、塑料管、清洗过的沙子、纱布、蓬松棉包、活
性炭、清洗过的小卵石20枚左右、剪刀、钻子。

2、步骤和方法：
①拿一个饮料瓶，用剪刀剪去瓶底，将瓶身剪至约二分之一处；
②在瓶盖处用剪刀和钻子刺一个小孔，插入吸管，以便让液体可以流出；
③分别用纱布将小卵石、石英砂、活性炭包裹起来；④把瓶口处倒过来放，依次放入膨松棉、包有纱布的活性炭、包有纱布的石英砂及包有纱布的小卵石；⑤将瓶底与瓶壁粘起来，作为一个可自由开合的盖子。

三、简易净水器净化效果的检验；
为了检验自制简易净水器的净化效果，进行如下实验。

1、实验材料：烧杯，铁架台（带铁夹），玻璃棒，一杯混有蓝墨水、泥沙、杂草和异味的污水、红墨水。

2、步骤和方法：
①将简易净水器固定在铁架台上，下端与烧杯相连；②将污水沿玻璃棒注入简易净水器中，用烧杯盛接流出的水，观察现象。

④持续将红墨水注入简易净水器，观察流出的水的颜色变化；⑤将简易净水器内的填充物从瓶底开始依次取出，把活性炭晒干。

按照简易净水器的制作步骤重新将各种材料填充到饮料瓶中，除了重复使用晒干的活性炭外，其余材料均换成上次使用的同类材料的新材料；将红墨水注入简易净水器，观察现象。

3、现象与分析①现象：
污水注入简易净水器后，过滤出来的水是澄清的；持续将红墨水注入简易净水器，刚开始，过滤出的水是澄清的，一段时间之后，过滤出来的水逐渐变红，最后与过滤之前的水的颜色一样；活性炭晒干后重复使用，过滤之后的水的颜色基本不变。

②分析：
自制简易净化器的净化效果较好。

但是活性炭使用一段时间后就会失去作用，即便重新晒干也不能恢复，长时间使用应注意更换。

四、反思；
第一次制净水器时，我们只是用纱布将各种材料隔开，但将水注
入后，发现部分活性炭进入到蓬松棉里，石英砂随水漂起，于是，我们改用纱布将小卵石、石英砂、活性炭分别包好，解决了这一问题。

此外，我们想到，如果给简易净水器加一个盖子会不会更好，因此，我们在做的时候适当地改进了原来的方案，将这个想法也予以实施。

五、结论与建议
本次活动告诉同学们，在一些特殊的场合完全可以通过带一个自制的简易净水器或者现场自制简易净水器的方法来得到比较洁净的水源。

然后加上消毒药片或者把水煮沸，就可以饮用。

现场制作简易净水器时，活性炭可以用烧制的木炭代替，纱布、蓬松棉包可以用毛巾、手帕等棉纺制品代替。

第五篇：分子生物学实验室常用试剂的配制方法
一.常用贮液与溶液
1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V 或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。

或转移100mg的二硫苏糖醇
至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。

或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH 调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。

1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。

100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。

分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。

溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。

用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。

（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。

10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

用水定容至1L。

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。

100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

（稀释液应在临用前配制）
2.5％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。

100×Denhardt试剂（Denhardt's regent）
成分及终浓度
配制100ml溶液各成分的用量
2%聚蔗糖（Ficoll，400型）
2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）
2%BSA（组分V）
水
2g 2g 2g
加水至总体积为100ml
依照上表称取各组分，溶于水中定容。

过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。

10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分的用量
0.5mol/L Tris-HCl 100mmol/L MgCl2 100mmol/L DTT 2mmol/L ATP
5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）
0.5mg/ml BSA（组分V）（可选）
水
5ml 1mol/L 贮液
1ml 1mol/L 贮液
1ml 1mol/L 贮液
200ul 100 mmol/L 贮液
50ul 1 mmol/L 贮液
0.5ml 10 mg/mL 贮液
2.25ml
将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃。

mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）
可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。

10mmol/L dNTP混合液
成分及终浓度
配制20ul溶液各成分的用量
10mmol/L dATP 10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP 10mmol/L dTTP 水
2ul 100 mmol/L dATP 贮液
2ul 100 mmol/L dCTP 贮液
2ul 100 mmol/L dGTP 贮液
2ul 100 mmol/L dTTP 贮液
12ul
20％PEG 8000/2.5M NaCl
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分的用量
质量浓度为20％聚乙二醇
2.5mol/L 氯化钠
水 20g
50ml 5 mol/L 氯化钠或 14.6g 固体氯化钠
补足100ml
加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。

20×SSC
成分及终浓度
配制1L溶液各成分的用量
300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）
3mol/L 氯化钠
水
88.2g 175.3g 补足1L
溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。

DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水
加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1％。

在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。

DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺（deionized formamide）
直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。

经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。

磷酸缓冲液（phosphate buffer）
按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。

配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g 于足量水中使终体积为1L。

1mol/L 磷酸二氢钠（ml）
1mol/L 磷酸氢二钠（ml）
最终pH值
877 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280 123 150 185 225 265 315 375 435 490 550 610 670 720 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 7.1 7.2
TE（用于悬浮和贮存DNA）
成分及终浓度
配制100ml溶液各成分的用量
10mmol/L Tris－HCl 1mmol/L EDTA 水
1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）
200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
98.8ml
Tris缓冲液（Tris-HCl buffer）
将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。

浓盐酸的体积（ml）
pH
8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 76 9.0 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8
7.6 7.4 7.2
二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液
电泳缓冲液
50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液
成分及终浓度
配制1L溶液各成分的用量
2mol/L Tris碱
1mol/L 乙酸
mmol/L EDTA 水
242g
57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）
200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
补足1L
5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液
成分及终浓度
配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris碱
445 mmol/L 硼酸盐mmol/L EDTA 水
54g 27.5g 硼酸 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
补足1L
染料
1％溴酚蓝（bromophenol blue）
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）
溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）
小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。

用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。

凝胶上样液（gel loading solutions）
6×碱性凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量
0.3 N 氢氧化钠mmol/L EDTA 18％聚蔗糖（400型）
0.15％溴甲酚绿
0.25％二甲苯青FF 水
300ul 10N 氢氧化钠
120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
1.8g 15mg 25mg 补足到10ml
6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 15％聚蔗糖（400型）
水
1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
1.5g 补足到10ml
6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度。